（广西梧州市疾病预防控制中心 广西 梧州 543002）
【中图分类号】R155.3 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2017）16-0353-04
目前无论是发达国家还是发展中国家，食源性致病菌污染已为影响食品安全的最主要原因[1]引起人们的关注。在检测食源性致病菌工作中，为加强微生物实验室检测能力，保证监测结果的正确性和可靠性，梧州市疾控中心于2010年，2012年，2014年先后三次参加了食源性致病菌盲样质控考核，现将应对考核思路、病原菌分离鉴定体会报告如下：
1.材料与方法
1.1 样品来源和性状
样品由中国疾病预防控制中心营养与食品安全所对承担食源性致病菌检测工作的检验机构开展质量控制考核下发,收样记录如表1。
1.2 考核检测范围
国标GB4789中规定的常见食源性致病菌。
1.3 培养基和试剂
SC、BPW、LB、EC、LST、GN、7.5%NaCl营养肉汤、3%NaCl碱性蛋白胨水、血平板、营养琼脂、胰胳胨多粘菌素、SS、XLD、MYP、EMB、麦康凯、山梨醇麦康凯、三糖铁（TSI）琼脂、冻干血浆等购自北京陆桥技术有限责任公司；弧菌、金黄色葡萄球菌等显色平板购自郑州博赛生物技术有限责任公司；沙门菌诊断血清、大肠埃希菌诊断血清等购自宁波天润制药有限公司； API20E生化鉴定条购自生物-梅里埃公司，以上所有培养基试剂的使用均在有效期内。
2.实验室检验
2.1 检测项目
按考核检测范围样品开展了沙门氏菌、志贺氏菌、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌、O157菌、单核细胞增生李斯特菌、创伤弧菌、阪崎肠杆菌、致泻性大肠埃希氏菌、蜡样芽孢杆菌。
2.2 检验方法
依据食品卫生国家安全标准《食品卫生微生物学检验》的GB/T4789.4.10.30.40-2010、GB/T4789.7.9.36.37-2008、GB/T4789.5-2003和广西食品安全风险监测工作手册进行检测。
2.3 检验步骤
2.3.1制定检测方案 根据考核样品的特性和考核要求，制定检测方案如表2。
2.3.2样品增菌培养及结果，见表3。
2.3.5 G-杆菌生化及鉴定结果见表6：
2.3.6血清学试验结果见表7。
3.讨论
连续3次的食源性致病菌盲样质控涉及了沙门氏属、芽孢杆菌属、肠杆菌属、弧菌菌属、葡萄菌属的鼠伤寒沙门氏菌，蜡样芽孢杆菌，阪崎肠杆菌、产毒型大肠埃菌、肠致病性大肠埃菌，副溶血性弧菌，金黄色葡萄球菌，通过盲样质控考核大大提高了检验人员的业务素质和实验室的检测能力。
在应对盲样质控考核，首先确定检测方案、选择增菌液培养、分离培养、革兰染色镜检归类、初步生化试验过筛、生化试验确证、动力实验、血清学分型以及最终的结果判定。在整个检验过程中，为确保培养基和环境仪器等符合检验要求，进行带标操作，即菌株生长比对，可帮助鉴别。
当收到考核样本时，注意观察样品性状如是冻干标本，不能在初次分离后就急于鉴定，要进行复性培养，最好多分离几次，待生物学特性恢复后再鉴定。
增菌及分离培养在盲样考核中至关重要[2]，直接影响目的菌的分离，由于盲样中细菌未知，在检验中应按其要求充分考虑到各种增菌液及鉴别培养基，满足分离不同细菌的需要。在分离培养时，一定要将培养皿表面孵干(不含冷凝水)，以便分离出单个菌落，避免菌落不纯，在细菌鉴定时必须用纯的细菌培养物作鉴定[3]。
对于培养基的选择，充分利用现有的显色培养基和生化培养基的特性，在初期培养就根据检测要求将相应的几种典型鉴别培养基全部用上，这是提高检测效率的捷径，能快速高效地确定鉴定方向。观察分离培养基上菌落所产色素及拉丝等现象，对鉴定细菌也很重要，如阪崎杆菌产黄色色素，副溶血弧菌挑取菌落有口香糖质感、拉丝现象。
革兰染色镜检在盲样菌检测中起重要作用[4]。通过染色镜检可以观察菌体的形态和染色性质，判断盲样中存在何种细菌，有助于对细菌的初步识别，可以初步确定鉴定的方向，为下一步分离鉴定提供依据。革兰染色阳性球菌对营养要求较高，在普通培养基上不能生长或生长不良，在含有血液、血清等的培养基上生长良好[5]。
镜检时注意，在营养丰富的液体培养基中链较长，在陈旧培养物革兰染色为阴性球菌。
生化试验、血清学实验在细菌学鉴定中起关键作用。做沙门菌诊断血清凝集试验时，H抗原发生絮状松散的凝集，出现快，容易摇散[6]，因此操作人员的主观判断可以影响血清凝集试验的结果。此外，由于质控菌株长期保存在固体培养基及冷藏条件中，可能导致H相抗原的消失或变异，操作人员在恢复H相的诱导试验中所采用的诱导方式、诱导次数都可能对结果产生影响。当只出现单相H 抗原凝集现象，检出第1相H抗原而未检出第2相，在琼脂斜面移种1～2代再检查，仍未检出第2相，最后做位相变异实验才检出第2相。在沙门菌的检测过程中，如果遇到生化符合沙门菌定义，血清AF多价不凝集时，考虑沙门菌属表面抗原含有Vi抗原和M抗原，它的存在可引起O抗原与相应抗体不凝集，但60℃加热30min可破坏［7］，再与AF多价和其他O抗原凝集；二是考虑诊断血清质量存在问题，血清凝集时，做好盐水凝集对照，以排除自凝菌和交叉凝集对检测结果的影响，同时尽可能用2种不同厂家或不同批号的血清进行比对。在做血清诊断时，防止同属不同名菌落[8]。阪崎肠杆菌与肠道侵袭性大肠埃希氏菌EIEC的诊断血清发生凝集[9]。
在蜡样芽胞杆菌鉴定过程注意与其他芽胞杆菌鉴别，尤其蛋白质毒素结晶试验，它是区别蜡样芽胞杆菌与苏云金芽胞杆菌的唯一试验。经过反复染色，在陈旧培养基上反复寻找，确定没有蛋白质毒素结晶才报告检出蜡样芽孢杆菌。
总之，要做好细菌盲样检测，我们平时就要规范检测过程并注意生物安全，质控考核的菌株大多是致病菌，检测结束时所有的培养产物都要进行高压灭菌处理对检测中所遇到的问题深入思考，不断总结，积累经验，积极关注国内外相关的专业发展动态，不断学习掌握新技术、新方法，确保持续的能力和水平。
【参考文献】
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[3]李苏英．盲样菌株微生物室间质控考核分析[J]．浙江预防医学，2006，18(1) :3-5.
[4]王虹玲.微生物质控考核盲样未知菌检测方法探讨[J].中国卫生检验杂志，2000，10(5) : 603．
[5]齐小秋．病原生物学检验—细菌[M].北京:卫生部病原生物学检验教材编写组，2009．
[6]何晓清.卫生防疫细菌检验[M].南昌:新华出版社，1989.6.
[7]齐小秋．病原生物学检验———细菌[M].北京:卫生部病原生物学检验教材编写组，2009．
[8]莫丽娟，吴南卫，邓瑶，林永通.一次食源性微生物考核样检测的分析[J].检验医学与临床2012.9(8):986-988.
[9]陈道利，高峥，霍开兰等 从投诉食品中检出具有EIEC相同抗原的阴沟肠杆菌[J].中国卫生检验杂志，2000.10（2）：213.
论文作者:劳希,盘珍梅,梁炳健
论文发表刊物:《医药前沿》2017年6月第16期
论文发表时间:2017/6/22
标签：培养基论文; 杆菌论文; 血清论文; 致病菌论文; 抗原论文; 细菌论文; 鉴定论文; 《医药前沿》2017年6月第16期论文;