窦科峰[1]2001年在《⒈小鼠脾细胞诱导免疫耐受的实验研究⒉活体肝部分移植3例临床研究》文中进行了进一步梳理器官移植的开展使大量器官功能终末期疾病患者获得了新生，但术后严重的排斥反应发生仍然影响受体术后长期生存的重要因素之一。尽管CsA和FK506等强有力的免疫抑制剂己被应用，但由其所产生的肝肾毒性、严重感染和致肿瘤性等副作用仍然未能解决，因此造成宿主对移植抗原处于免疫耐受状态或低免疫反应状态，又不影响机体对其他抗原的正常免疫应答能力，是目前器官移植术后解决排斥反应的根本途径。本研究根据免疫耐受机制，以小鼠为动物模型，移植前在移植受体体内诱导其产生与移植物抗原具有相同抗原的抗独特型抗体，观察该方法对小鼠皮片移植免疫耐受诱导作用。 第四军医大学博士学位论文 目的： 本研究通过于移植前在移植受体体内诱导其产生与移植物抗原具有相似抗原性的抗独特型抗体，观察其对小鼠移植诱导免疫耐受的作用。 方法： 1．Abl的诱导产生：以C57BL／6 ，J’鼠的脾细胞免疫BALB儿小鼠，制备抗同种异品系抗体仰1卜 2 AbZ的诱导产生：在 Ahl产生基础上，纯化 Ahl血清后，对Abl和 KLH进行交联，联合兔疫佐剂免疫BAJJB儿，J＼鼠。使其体内产生抗独特型抗体（Ah2）。 3，对诱导移植免疫耐受的观察：行小鼠皮片移植，观察AbZ对小鼠移植物存活时间及单向混合淋巴细胞反应（MLR）、微量淋巴细胞毒等排斥反应指标的影响。 结果： 1．Ahl和 AbZ的检测：补体依赖细胞毒试验测定 Ahl血清效价达 1：400以上。夹心 ELISA检测 AbZ血清的 A450 urn值较对照组高2倍以上。 2．AbZ对皮肤移植物的影响：AbZ诱导组BALB／c小鼠移植物的存活时间明显延长，与对照组相比较差异显着（P＜ 0刀1＼ 3．AbZ血清对微量淋巴细胞毒的影响：加入AbZ后，Abl引起的细胞毒明显受抑制，与对照组相比较差异显着（P＜0刀1）。 4．AbZ对混合淋巴细胞培养的影响：AbZ诱导组的A570nm值明显低于对照组（P＜0刀 1）。 5 第四军医大学博士学位论文 结论： l．小鼠脾细胞免疫BALB儿小鼠产生的抗同种异品系抗体（Ahl卜 交联 KLH后联合福氏佐剂，可成功诱导出 AbZ产生。 2 小鼠体内产生的AbZ可延长移植物生存时间，并对混合淋巴细胞培养起到明显的抑制作用。 3 移植前在受体体内诱导产生以移植物抗原为始动抗原的抗独特型的抗体。可以有效诱导特异性低免疫反应状态。
孙倍成[2]2001年在《FasL逆转录病毒体系的构建及诱导大鼠肝移植免疫耐受的实验研究》文中指出目的：（1）构建大鼠FasL基因逆转录病毒体系，并研究FasL在包装细胞PA317中的表达；（2）用PA317/pLXSN-FasL+病毒上清体外转染肿瘤细胞，以观察其对肿瘤细胞的诱导凋亡作用；（3）将FasL基因导入供体源的树突状细胞，注入受体体内后，观察其对肝移植大鼠生存期的影响，并探索转FasL基因治疗诱导免疫耐受的可能机理。 方法：（1）将含FasL基因的质粒pBL-KA15用XhoⅠ酶切，获得大鼠全长FasL cDNA片段，将该片段与同样经XhoⅠ酶切的逆转录病毒载体pLXSN在T4嗜菌体DNA连接酶作用下进行相同突出端的连接反应，并鉴别其正反向，将正向单拷贝插入的重组子pLXSN-FasL用脂质体转染试剂盒导入双嗜性逆转录病毒包装细胞PA317中，用G418筛选，获得病毒滴度高的抗性克隆，命名为PA317/pXSN-FasL+；用PCR及RT-PCR方法检测该包装细胞是否有FasL基因整合及mRNA的表达，并以流式细胞仪检测包装细胞表面FasL的表达。（2）将PA317/pLXSN-FasL+体外转染淋巴瘤细胞株Jurkat、Raji、Daudi，肝癌细胞株HepG-2及骨髓瘤细胞株SP2/0，用流式细胞仪分别检测这些细胞株表面Fas及FasL的表达，并用Annexin V-PI法检测这些细胞的凋亡，通过细胞增殖实验观察PA317/pLXSN-FasL+病毒上清对Raji、Daudi、SP2/0及HepG-2细胞株的生长抑制。(3）首先建立“二袖套法”大鼠肝移植模型，并在袖套管制作，受体麻醉，肝上下腔静脉、门静脉及肝下下腔静脉吻合等方面进行技术改进，行供体为SD大鼠、受体为Wistar大鼠的肝移植48例，并分为4组：①对照组12例，不作任何治疗；②mdrl组12例，移植前腹腔注射转mdrl基因的DC细胞；③CsA治疗组，术后给予环孢霉素（CsA）治疗；④转FasL 南京医科大学悍十学位论文基因治疗组，移植前腹腔注射转FasL基因的DC细胞。肝移植术后3d及 7d分别杀死各组4只大鼠，取出外周血及肝脏，检测肝功能，半定量 RT－P皿检测移植肝 FasI虬、IL4 的 InRNA表达，TU’N’E‘法检测肝细胞及外周血淋巴细胞凋亡；光镜及透射电镜观察移植肝的病理及超微结构，同时观察各组大鼠肝移植后生存期。 结果：O 重组子经酶切鉴定后获得正向单拷贝插入子，脂质体介导法导入N3细胞后，m18 筛选出抗性克隆，命名为 PA3 7MSNlasL＋，测得病毒滴度为 4．7 xlo’CFUth。PCR及RTPCR证实 PA317细胞有 FasL基因整合及 wA表达，流式细胞仪检测出PA3 17包装细胞表面有高强度的F虬分子表达。仅）流式细胞仪检测 Jim’ai、oaudi、Rat、SPz／0及 HyG上细胞株 eas阳性率分别为 99．8％、33．9％、68＊％、72％、sl．7％Z用 PA317／pLXSN－FasL＋病毒上滑转染 oaucti’ Rat’ sn：vo及 Hpcrz细胞株后，east阳性率分别为 99．l％、99．4％、86．l％、72．3％，AnneAn VFI法捡测细胞凋亡率分别为 30．50、31．30、12．l％、19．40；细胞增殖实验提示转 FasL后肿瘤细胞株生长受到明显抑制。o）对“二袖套法”大鼠肝移植进行技术改进后，无肝期明显缩短，肝移植成功率明显提高；供体SD大鼠的骨髓经体外扩增后，获得表型特异的DC，将之转染FasL基因后移植前受体腹腔注射，结果发现对照组及mdrl组移植后945d死亡，血清胆红素及转氨酶明显高于 CsA组及 FasL组，病埋学及透射电镜提示有肝细胞变性、坏k，6 CsA fAA F吼组肝细胞免疫排斥较轻，肝移植大鼠生存期已超过4个月；半定量RTPCR结果示对照组及mdrl组术后7d F嘛、IL《2表达增高，而CsA组及F札组F虬及几12则呈不表达或低表达；刀l田L法检测发现FIL组有明显外周血淋巴细胞凋亡，透射电镜结果也证实肝组织内有凋亡的淋巴细胞。 结论：＊）建立的 PA317／pLXSNFasL＋逆转录病毒体系能有效地表达 F虬八 PA3 7／pLX狲F虬＋能有效地诱导 Fas高表达肿瘤细胞凋亡，井对这些肿瘤细胞的生长有抑制作用。o准D大鼠为供体， 4 南京医科大学博士学位论文Wistar大鼠为受体的肝移植是一个高排异组合，是用于研究移植耐受埋想的模型；经转染FasL基因的DC治疗后可有效地诱导肝移植免疫耐受，其机理是诱导活化T细胞凋亡，并一定程度地减少ILJ 的分泌。
参考文献：
[1]. ⒈小鼠脾细胞诱导免疫耐受的实验研究⒉活体肝部分移植3例临床研究[D]. 窦科峰. 第四军医大学. 2001
[2]. FasL逆转录病毒体系的构建及诱导大鼠肝移植免疫耐受的实验研究[D]. 孙倍成. 南京医科大学. 2001