摘要：目的：对治疗用卡介苗的稳定性进行观察与分析，让临床用药治疗得到保障。方法：根据《中华人民共和国药典》2015版中记录方法对不同批次存放于37℃环境28d卡介苗的稳定性和质量进行检测，检测项目包括活菌含量比、溶解时间、水含量、菌体染色形态、药物毒性以及迟发超敏试验。结果：对9批样品进行存放2至3年后的热稳定试验中,每一批次的残存活菌数均高于20×104CFU·mg-1,同时，保存于37℃环境28d制品的活菌数超过置于4℃环境下样品活菌数的20%。对另外3批样品进行其他项检测，结果数据均提升合格。结论：治疗用卡介苗具质量稳定，可广泛应用于临床疾病治疗。
关键词：治疗用卡介苗；质量；稳定性
在临床应用中，治疗用卡介苗主要用于原发性和复发性膀胱肿瘤的治疗与预防。治疗用卡介苗属于生物制品,它由活的卡介菌种株制成。其药品疗效受到了活菌的数量和质量的显著影响，因此其保存条件和时间会对药品的治疗产生直接影响，药物稳定性是此类药物质量把控中的重点。此次我们选择了成都生物制品研究所有限责任公司（国药准字S20123007）生产的治疗用卡介苗，对其稳定性进行观察。
一、材料和方法
1.1检测样品
选取卡介苗制剂样品共12批，批号为9512271、9512292、9601032、9616031、9601051、9601262、9601291、9601312、9602022,药品剂型为冻干剂型，药品含量为60mg(6.0×107CFU)/瓶。样品保存环境为2～8℃冷藏。
1.2方法
热稳定性试验
选取9批次样品，将样品置于4℃下分别2年（效期后1年）及3年（效期后2年）后，取出部分样品，置于37℃28d后,在同一条件下，分别对其细菌活存率进行检测。通过活菌数检测的方法，算得两组同批样品的活菌率下降比。37℃存放28d后样品的活菌数不可低于4℃环境下保存同批样品活菌数的20%，且高于20×104CFU·mg-1。
理化及形态试验
理化检查
抽取3批样品进行检测。正常样品应呈灰白色疏松粉末状。加入适量稀释液后，应于3min内全部溶解。根据《中华人民共和国药典》2015版中所列水分测定法，对其含水量进行测定，水含量低于3.0%。
毒性试验
抽取3批样品，对每一批次的药毒性进行检测，共选取18-20g雄性小鼠15只，每批5只,采用腹腔注射方法，每只注射0.5mL菌液(30mg),并对其生命状态进行检测，长达1周。观察期体重变化和存活情况。
迟发超敏试验
抽取3批样品，选取6只结核菌素试验(PPD10IU/0.2mL)结果呈阴性的同性健康豚鼠，体重控制在300～400g,采取腹内侧皮下注射的方式注入0.5mL(5mg)卡介菌液,并于6周后行PPD皮试，采用皮内注射的方式注入PPD10IU/0.2mL，并在24h后检测皮肤变态反应阳性率(反应直径≥5mm为阳性)。
二、结果
2.1样品热稳定性观察
对9批样品的活菌含量进行检测，详情可见表1。
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表1 治疗用卡介苗制剂活菌含量稳定性检测
批号初检活菌数（万/mg）效期后1年（万/mg）效期后2年（万/mg）4℃37℃28d残存率4℃37℃28d残存率4℃37℃28d残存率95122715643115543125258.448415732.4951229265936655.546017137.217011467.1960103276628437.157321236.93451002996160317662843860420834.461823337.796010512091055026914553.920913966.596012622328536.621510347.91188067.8960129126112447.522712655.523210947960131247717436.539421454.334918051.696020223972746933215546.734015445.3平均（万/mg）479±216223±13747.24389±179176±12647.24318±276140±14349.38从表1的平均数看,若将初检样品活菌率定为100%，2年后、3年后,4℃下保存治疗用卡介苗的存活率残存率分别为为:479.0万/mg(100%),389.0万/mg(81.2%),318万/mg(66.4%);37℃下保存治疗用卡介苗存活率分别为:223万/mg(100%),176万/mg(78.9%),140万/mg(62.8%)。而活菌残存率分别为47.24%,47.24%,49.38%。
2.2样品的物理性质及菌体形态检测
表2 治疗用卡介苗物理及形态特性检测结果
批号检测时间物理及形态检测结果外观溶解时间（min）水含量（%）抗酸染色9070101初检灰白色,疏松体<31.15+2年后灰白色,疏松体<31.13+3年后灰白色,疏松体<31.25+9070102初检灰白色,疏松体<31.32+2年后灰白色,疏松体<31.16+3年后灰白色,疏松体<30.95+9070103初检灰白色,疏松体<31.23+2年后灰白色,疏松体<31.45+3年后灰白色,疏松体<31.25+结果提示，所检验批次的样品，其外观、溶解度、水含量、抗酸性等随着时间的改变，无明显变化，与规定相符合。
2.3 样品动物试验检测结果
动物实验主要为迟发超敏试验和毒理试验。详情可见表3。
表3 治疗用卡介苗动物试验检测结果
批号检测时间动物检测结果动物检测结果迟发超敏试验（mm）毒性实验9070101初检16.83合格2年后8.31合格3年后7.57合格9070102初检19.21合格2年后10.77合格3年后8.45合格9070103初检18.72合格2年后9.89合格3年后8.93合格结果提示，伴随样品保存时间的延长，豚鼠的皮肤变态反应阳性率降低，但仍呈阳性。同时，随着保存时间延长，治疗用卡介苗的毒性仍然合格。
三、讨论
卡介苗是临床应用中，最早提出的、应用范围较为广泛的一类免疫调节剂，在预防浅表性膀胱癌术后复发(复发率高达60%～90%)中疗效显著。其活菌存活率由和药品存放温度及时间有显著联系。此次研究结果显示治疗用卡介苗品控严格，制品稳定性高,具有明显的稳定性，适合临床广泛应用。
参考文献：
[1]黄建, 王国治, 寇立杰, et al. 国产抗膀胱癌新药“治疗用卡介苗”质量的稳定性观察[J]. 中国药事, 2010, 24(3):240-243.
[2]景辉, 刘朝阳, 陈艳红, et al. 不同剂量西林瓶包装的冻干皮内注射用卡介苗稳定性观察[J]. 国际生物制品学杂志, 2010, 33(5):269-270.
论文作者:张兴强
论文发表刊物:《药物与人》2018年9月
论文发表时间:2018/12/17
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