山西省阳泉市第一人民医院检验科 045000；上海交通大学医学院附属瑞金医院上海血液研究所 200020*
在当今抗生素和激素广泛应用以及有创诊疗技术的发展，血液感染发病率逐渐升高，而菌血症治疗时间长，费用多，病死率高，危害极大。血培养是血液感染诊断的金标准，但培养时间长，即使阴性也不能除外感染，淋巴细胞及其亚群作为机体免疫功能的一个重要指标，在病原菌感染后，会发生一系列数量和比例的变化。本研究选择129例血培养患者，回顾性分析其外周血淋巴细胞亚群数量的变化，找出其规律，为临床对菌血症的诊断、治疗提供理论依据。
1.资料与方法
1.1.资料：本次研究选取2013年10月至2014年11月在本院住院同时进行血培养及外周血淋巴细胞亚群测定的患者129例，男81例，女48例，年龄18-70岁（平均年龄44±22岁），患者除感染外均无其他已知影响机体免疫功能的疾病发生，感染的诊断符合世界卫生组织（WHO）诊断标准［1］，且送检血培养与淋巴细胞亚群送检时间不超过24小时，并选同期健康体检人员36例作为健康对照组，男21例，女15例，平均年龄43±19岁。
1.2.方法：
1.2.1试剂与仪器：美国BD公司BACTEC9120全自动血培养仪及BD公司配套血培养瓶，美国BD公司PHOENIX-100全自动细菌鉴定药敏系统及原装配套试剂，美国贝克曼公司FC-500流式细胞分析仪，稀释液（COULTER ISOTON Ⅲ DILUENT），清洗液（COULTER CLENZ），四色复合试剂异硫氰酸盐荧光素（FITC）标记的CD45、藻红蛋白（PE）标记的CD4、藻红蛋白-得克萨斯红（ECD）标记的CD8、藻青蛋白5（PC5）标记的CD3。双色复合试剂FITC标记的CD3、PE标记的CD（16／56）。单色试剂PC5标记的CD19，藻青蛋白7（PC7）标记的CD45。
1.2.2血培养：静脉采血16-20ml立即注入厌氧菌和需氧菌培养瓶各1瓶，每瓶8-10ml，并送实验室，实验室接受标本编号、登记后，将血培养瓶置BD公司BACTEC9120全自动血培养仪中培养；当仪器阳性报警时，用无菌注射器抽取培养液涂片、革兰氏染色、镜检，根据染色镜检结果接种营养血平板和/或巧克力平板，置于37℃孵育24h，待菌落形成后挑取单个菌落配成0.5个麦氏单位菌液置BD公司PHOENIX-100全自动细菌鉴定药敏系统对病原菌鉴定，另取菌落涂片、革兰氏染色、镜检确认。
1.2.3.淋巴细胞亚群检测：静脉采集外周血2 ml加入EDTA-K2抗凝管中。取两管分别标记T、B&NK，分别加入抗凝血100ul，Ｔ系四色荧光素抗体２０ul加入T管；CD45、CD19、CD3单色荧光素抗体，CD16/56 单色荧光素双抗体各20ul加入B&NK管。两管轻轻混匀，避光染色15min后，均再加入500ul裂解液混匀，避光10min取出，300g离心5min，弃去上清液，加2ml0.01MPBS液洗涤，离心弃去上清液，再加入0.5ml0.01MPBS混匀，上流式细胞仪检测。
1.3.统计学分析：
采用SPSS17.0统计软件进行统计分析，计数资料以 ±s 表示，组间比较采用t检验分析，以P<0.05为差异有统计学意义。
2．结果
本次入选129例患者血培养结果中，病原菌阳性生长93例，阴性36例，且阳性结果均已排除污染菌。分组按有菌生长组和无菌生长组，且有菌生长组又分为革兰氏阴性细菌感染组、革兰氏阳性细菌感染组、混合细菌感染组、真菌感染组，结果显示有菌生长组总T淋巴细胞、T4淋巴细胞、4/8较健康对照组明显升高（P<0.05），革兰氏阴性感染组患者总T淋巴细胞、T4淋巴细胞、4/8、DP-T淋巴细胞、B淋巴细胞百分含量较健康对照组明显升高（P<0.05）。革兰氏阳性组T4淋巴细胞、4/8比值与对照组有统计学意义（p<0.05）。真菌感染组总T淋巴细胞、T4淋巴细胞、4/8比值较健康对照组明显减少（P<0.05）。无菌生长组T4淋巴细胞百分比增高（P<0.05）。见附表。
3．讨论
淋巴细胞是机体免疫反应中主要作用细胞。机体在正常情况下，各淋巴细胞亚群保持一定的数量和比例，协同调节，实现机体免疫功能正常运行。而当病原微生物侵入机体时，免疫应答会使淋巴细胞亚群的数量或功能发生变化，导致机体免疫功能失调。
外周血中总T淋巴细胞，其表面的CD3分子参与T淋巴细胞识别抗原，介导机体的细胞免疫应答反应。T4淋巴细胞也称诱导/辅助性T淋巴细胞，具有辅助B淋巴细胞产生淋巴因子，增强和扩大免疫应答。T8淋巴细胞包括抑制性/细胞毒性细胞，具有直接杀伤感染微生物的靶细胞的功能。4/8比值是监测人体细胞免疫功能，反应机体免疫状态的主要指标，用于评价免疫失调、免疫状态、以及免疫系统的损害程度。DN-T细胞和DP-T细胞这两种细胞是T细胞分化发育及其功能状态的体现和反映，异常提示T细胞分化发育受到抑制，细胞功能障碍。B淋巴细胞表达和分泌免疫球蛋白，执行体液免疫以清除病原微生物。NK细胞属自然杀伤细胞，具有抗感染、免疫调节等功能。
本研究中，有菌生长组总T淋巴细胞、T4淋巴细胞、4/8较健康对照组明显升高，说明
菌血症患者在病原菌侵入血液后，机体免疫功能失调，动态平衡紊乱，细胞免疫功能反应性增强。革兰氏阴性细菌感染组患者总T淋巴细胞、T4淋巴细胞、4/8、DP-T淋巴细胞、B淋巴细胞百分含量较健康对照组明显升高，表示机体感染革兰氏阴性菌后，以细胞免疫为代表的T4细胞异常活化，反应性增殖，介导体液免疫的B淋巴细胞功能亢进，说明机体此时细胞免疫和体液免疫同时对非己抗原诱发的免疫应答，在对抗病原菌过程发挥重要的调节作用。革兰氏阳性细菌感染组中T4淋巴细胞、4/8比值均高于对照组，但增高幅度不及阴性对照组，说明机体此时以细胞免疫为主，但免疫反应不及阴性对照组。真菌感染组总T淋巴细胞、T4淋巴细胞、4/8比值较健康对照组明显减少，说明机体在感染真菌时，免疫功能受到抑制，这与刘建强等研究一致[2]。无菌生长组T4淋巴细胞百分比增高，表明此时虽然血培养未检出病原菌，但不代表机体未受感染，而且机体的细胞免疫功能已经激发。混合感染组与健康对照组淋巴细胞亚群结果无差别，这也可能与病例少有关系，是本研究的不足之处，还有待在后续工作中进一步的研究改进提高。
在淋巴细胞亚群检测中影响因素众多，如机体的营养状况，维生素和微量元素水平、体质等，[3-6]但是在血培养患者中由于淋巴细胞亚群的异常活化，导致了免疫功能的紊乱，在临床治疗过程中，应加强免疫功能调节，适度使用免疫调节剂（如糖皮质激素、免疫球蛋白、匹多莫德等）进行治疗，尽快平衡患者的淋巴细胞亚群比例，有助于促进病情恢复，缩短病程，减少并发症。
参考文献：
[1]World Health Organization，Prevention of hospital-acquired infections：a practical guide[M].2nd ed.Geneva：World Health Organization，2002
[2]刘建强。李秀武，杨志英，等.肺结核并呼吸衰竭患者外周血T淋巴细胞亚群的变化[J].河北医药。2010，32（15）：2075-2076.
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[4]Singh M.Recurrent lower respiratory tract infections in children[J].Indian I Pediatr，1999，66（6）：887-893
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[6]Brook I，Shah K.Bacteriology of adenoids and tonsils in children with recurrent adenotonsillitis[j].Ann Otol Rhinol Laryngol，2001，110（9）：844-848.
论文作者:高海兵,王淑春,黄婷（通讯作者）赵俊琴,何鸿绯,李占
论文发表刊物:《健康世界》2015年24期
论文发表时间:2016/3/15
标签：淋巴细胞论文; 免疫论文; 机体论文; 细胞论文; 对照组论文; 功能论文; 病原菌论文; 《健康世界》2015年24期论文;