关键词：EB病毒；淋巴瘤；淋巴细胞
EB病毒是一种双链γ-DNA类型的疱疹病毒，EB病毒经研究发现有三个潜伏膜蛋白和六种核抗原[1]。多种恶性肿瘤发生和发展与该病毒的潜伏膜蛋白和核抗原有关，如T细胞淋巴瘤、自然杀伤细胞NK淋巴瘤、胃癌、乳腺癌、传染性单核细胞增多症( IM) 、鼻咽癌(NPC) 、噬红细胞综合征、、何杰金氏病、平滑肌肉瘤、和肺癌等[2]。据统计百分之九十以上的成年人感染过EB病毒，大多数人无症状感染的终身携带情况 。淋巴瘤是一类起源于人类淋巴造血系统的单克隆增生性疾病，按组织学类型可以分为霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤。由于 ＥＢＶ 相关肿瘤的 发 病有 地 域 差异，而 不 同 的ＥＢＶ 毒株又具有基因变异和相关生物学方面的差异，所以ＥＢＶ 基因与淋巴瘤发生发展的关系一直是 近些年来国内外学者研究的热点[3]。
关于EB病毒与淋巴瘤的关系存在以下研究方法
1.EB病毒体外诱导人淋巴细胞的转化淋巴母细胞
首先进行细胞培养及EB病毒的提取，培养B95-8细胞，传代培养，细胞到达一定数量后，细胞放置8到10天，用饥饿方法抽提EB病毒，然后再收集培养液，进行三十分钟离心。用无菌过滤器将上清过滤后就可以得到EB病毒的悬液。分离正常人血液中的淋巴细胞，将 EB病毒上清重悬淋巴细胞，观察淋巴细胞增大，淋巴细胞出现母细胞化，也就是镜下可见增生的淋巴母细胞呈现聚集现象。然后培养EB病毒转化的淋巴母细胞系[1]。再进行相关EB病毒基因的检测
2.在动物体内采用EB病毒诱发动物肿瘤
从正常人血液中分离出淋巴细胞，用不含小牛血清的1640培养液将PBL
定容到（8-10）×107 个/ml ，在无菌条件下注射1 ml 淋巴细胞悬液到小鼠腹腔，获得动物的诱发淋巴瘤，然后比如免疫组织化学法，或者实时定量PCR技术进一步研究正常人B淋巴细胞在致瘤因素作用下诱导EB病毒相关肿瘤的机制，以及可能引起的宿主细胞相关某些基因的表达变化[3]。
3.EB病毒基因芯片 制作EB病毒基因芯片，
通过利用人cDNA微阵列膜上现在已有的10大类基因（瘤/抑瘤基因、细胞
周期调节、凋亡调节、DNA合成修复重建、转录因子、DNA结合蛋白、细胞因子和粘附分子、受体、信号传导等）以及大量的EST对EB病毒在特定实验条件下引起肿瘤发生的相关EB病毒基因异常表达谱进行大规模的研究[3]。EB病毒基因芯片检测EB病毒相关淋巴肿瘤细胞基因表达谱和病毒基因表达谱和采用生物信息学技术，使寻找差异基因和功能基因的工作变得更加简便快速、可靠[4]。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆为了验证cDNA微阵列结果的可靠性，选择表达差异较明显,可能具有重要功能的基因及其产物，分别采用RT-PCR，Northern blot和Western blot，免疫组化染色技术等进一步验证候选差异表达基因在多例各种类型淋巴瘤细胞中转录和翻译水平的表达，确定与EB病毒诱发淋巴瘤紧密相关的已知基因或未知基因[5]。
4.研究人淋巴瘤中EB病毒表达情况。
收集人淋巴瘤组织和癌旁正常组织，采用免疫组织化学法检测组织EB病毒表达情况，大部分研究发现EB病毒在人淋巴瘤组织中的表达上调。有学者用原位杂交技术检测淋巴瘤组织中 ＥＢＶ编码小 ＲＮＡ，淋巴瘤组织中 ＥＢ病毒 基因序列变异，发现ＥＢＮＡ２基因编码有部分序列扩增，有３个共有突变，另外有位点发生缺失。这些研究结果显示EB病毒基因的阳性表达率与与与淋巴瘤的组织类型有关，以及和临床分期有关，但一般与淋巴瘤患者的年龄性别关系不大，因此我们推测EB病毒的相关基因可能参与了淋巴瘤的发生发展，并且与淋巴瘤患者的临床预后相关。
全面系统地研究癌基因、抑瘤基因、细胞周期、凋亡调控基因等在EB病毒诱发淋巴瘤中的作用以及相互关系，可能发现参与淋巴瘤发生的真正原因，从而揭示出EB病毒与淋巴瘤细胞恶变过程中关键基因的相互作用关系。
近几年来，国内外学者对EB病毒和相关的淋巴瘤的研究越来越多，随着分子诊断技术水平的不断进步，现在已经开始探索淋巴瘤的信号转导通路与相应治疗靶点之间的相互关系。EB病毒与淋巴瘤新的作用机制的和治疗靶点正在逐步进入新的研究阶段。这些研究必将为EB病毒相关的淋巴瘤诊断与治疗开启新的篇章。可望提出EB病毒诱发淋巴瘤的真正分子机理，并尽早筛选出分子诊断和相应的治疗策略的靶分子。
参考文献
[1]曾亮，刘轶平，赵燕，等，应用cDNA 微阵列技术研究EB病毒LMP1 介导的鼻咽癌中转移相关基因的表达。病毒学报 2004；20（1）：17-21
Gan R, Xie X, He J,et al. Gene Analysis of Epstein-Barr Virus-Associated [2] Lymphomas in Hu-PBL/SCID Chimeras [J]. Tumori 2010; 96(3):465-472
[3]甘润良，尹志华，刘腾飞，等。EB病毒诱发人B细胞淋巴瘤的分子病理特性。 生物化学与生物物理学报 2003；35（10）：925-929
[4] Kim LH, Peh SC, Poppema S. Expression of retinoblastoma protein and P16 proteins in classic Hodgkin lymphoma: relationship with expression of p53 and presence of Epstein-Barr virus in the regulation of cell growth and death. Hum Pathol 2006;37(1):92-100
[5] Klein E, Kis L L, Klein G. Epstein-Barr virus infection in humans: From harmless to life endangering virus–lymphocyte interactions[J]. Oncogene, 2007, 26(9): 1297 –1305.
论文作者:路素丽
论文发表刊物:《健康世界》2020年3期
论文发表时间:2020/4/9
标签：淋巴瘤论文; 病毒论文; 基因论文; 细胞论文; 淋巴细胞论文; 组织论文; 淋巴论文; 《健康世界》2020年3期论文;