张文斌[1]1990年在《三叉神经向孤束核投射的光、电镜研究》文中认为孤束核(NTS)为内脏传入的中继核，三叉神经(TGN)属于一般躯体传入性质，这些都已是传统的定型概念。搞清三叉神经躯体传入向NTS投射的通路及其在孤束核内与内脏初级传入纤维的关连状态，可为解释三叉神经领域针刺镇痛机制提供形态学根据。 既往已有不少关于三叉神经向NTS投射的报道，但仔细推敲，由于方法学的限制，三叉神经诸分支中哪些分支向NTS投射的问题尚处于若明若暗状态；至于三叉神经投射于NTS的纤维在NTS内与由NTS所中继的内脏传入成分的互相关系如何，更未见确切的报道。为此本研究采用光、电镜结合，定位、定性结合的技术路线由浅入深、由表及里，对上述问题进行了比较系统的研究，取得了一些有意义的结果，其中下列两点印象比较突出。 一、本实验结果结合文献分析，证明三叉神经诸分支中，只有舌神经、下牙槽神经和蝶腭神经向NTS投射。此三神经在NTS内各有固定的投射区，舌神经范围最大，下牙槽神经范围最小。它们和Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ颅神经的投射范围在光镜下看来有一定的重叠，特别是舌神经与舌咽、迷走神经的投射区重叠较多。以舌神经为模型进行电镜观察的结果，发现舌神经的终末形态及它所构成的突触类型都和来自舌咽、迷走的内脏传入者并无二致，不具有躯体传入纤维的特点。且舌神经传入和Ⅸ、Ⅹ内脏传入终末之间并未发现有意义的汇聚的关系。结合发生过程中三叉神经源于鳃弓神经等特点，本文认为三叉神经向NTS投射的纤维应属于内脏传入性质者。对三叉神经属于纯一般躯体感觉性质的传统看法提出了异议。并否定了支配皮肤的三叉神经传入成分有直接向NTS投射并可在NTS内调整内脏传入的看法。 本研究通过HRP标记和免疫组织化学方法相结合的观察，证明舌神经至NTS的传入通路属于SP能性质。 二、根据文献的启示，本文探索了三叉神经躯体性传入成分向NTS投射的通路。发现：(1)尾侧亚核吻段背外侧部浅层结构与它所接壤的三叉神经脊束中的细胞团在细胞构筑上相同，可看做是一个统一体，而又证明此处的神经元直接向NTS
马文领[2]2003年在《大鼠三叉神经脊束间质核内calbindin D-28k神经元接受口面部躯体和内脏伤害性传入信息汇聚和投射的研究》文中进行了进一步梳理三叉神经脊束间质核(interstitial nucleus of the spinal trigeminal tract，INV)是位于三叉神经脊束(spinal trigeminal tract，SVT)背侧的数个灰质团块，主要由背侧边缘旁核(dorsal paramarginal nucleus，PaMd)和三叉旁核(paratrigeminal nucleus，PaV)组成。INV经三叉神经(Ⅴ)的一些分支及舌咽神经(Ⅸ)和迷走神经(Ⅹ)接受口面部躯体和内脏神经的初级传入，在外周伤害性信息的汇聚和传递以及对内脏和心血管活动的调制等方面均具有重要作用。 INV内存在多种与伤害性信息传导和调控相关的神经活性物质，如谷氨酸(glutamate，Glu)、ENK、SP和CGRP等。Calbindin D-28k(CB)是钙结合蛋白家族的重要成员之一，可高亲和力地结合细胞去极化时进入细胞内的Ca~(2+)，防止因伤害性刺激过度传入引起的神经元高频放电所致的损伤，并可防止钙依赖性钾外流而使膜产生的超级化，缩短不应期，加快神经信息的传递。近年来对CB在中枢神经系统的分布和功能方面进行了大量的研究，结果表明CB在脑干和脊髓内多存在于与感觉信息特别是伤害性信息传递相关 第四军医大学博士学位论文的核团，如在脊髓背角CB与m 共存于1层长轴突神经元内，并投射到孤束核（nucleus of＊thes solitny tract，NTS）；延髓背角浅层含 CB的神经元可接受躯体的伤害性信息并投射到臂旁核①BNhNTS内接受内脏伤害性信息的CB神经元投射到终纹床核等，提示脊髓和延髓内含CB的神经元可能参与伤害性信息在中枢内传递的过程。INV内分布有大量合CB的神经元，其中大部分投射到NTS和 PBN，但这些含 CB的投射神经元是否直接接受日面部躯体和内脏伤害性信息；是否与兴奋性递质m 共存并受抑制性递质的调控；口面部躯体传入与内脏伤害性传入信息能否汇聚于含CB的投射神经元，特别是口面部躯体传入纤维终末是否与含CB的神经元形成直接的突触连接等，均是值得深入探讨的问题。 基于上述问题，本课题综合应用逆行和跨神经节追踪结合免疫组织化学的光镜、激光扫描共聚焦显微镜以及免疫电镜等技术，对其进行了较系统的研究。 应用 FG逆行束路追踪结合 CB和 Fm标记法，将荧光金吓G）注射到一侧NTS后，观察到同侧WV内大部分（约74．4O）投射到NTS的FG逆标细胞同时呈CB免疫反应阳性。在投射到NTS的CB神经元中，又有41刀％和 47．4％以及 32．5％的神经元分别接受头面部浅层和深层结构的躯体伤害性信息以及内脏伤害性信息。荧光金注射到一侧PBN后，INV投射到同侧PBN的多数FG逆标细胞（77．3％）呈CB免疫反应阳性；在投射到PBN的含CB神经元中，又有38．5％和52刀％分别接受口面部浅层结构和内脏的伤害性传入信息。 磷酸激活的谷氨酸胺酶（PAG）是合成Gltl的关键酶，是m 能神经元的特异标识物。应用 FG逆行束路追踪结合PAG和 CB或PAG和 F。S免疫荧光组织化学三重标记法，观察到INV内约l／4以上的CB神经元（26．6o）与PAG有共存现象，并且CB与PAG共存的神经元大部分投射到NTS或接 2 第四军医大学博士学位论文受内脏伤害性信息。应用免疫组化双重标记法，在INV内虽然未见GABA与 CB共存的神经元，但却观察到 72％和 63％的 CB和 PAG免疫反应阳性神经元分别显示GABAB受体阳性标记。 跨神经节束路追踪结合免疫组织化学多重标记的激光扫描共聚焦显微镜观察结果显示，eV内投射到NTS或含CB的神经元接受内脏伤害性信息，同时与下牙槽神经的初级传入终末之间形成紧密接触。运用跨神经节束路追踪结合免疫电镜法，在超微结构水平观察到下牙槽神经初级传入终末与CB阳性树突或胞体形成非对称型突触连接。 以上结果提示：INV内含CB的神经元直接接受口面部躯体和内脏伤害性传入信息，并投射到＊H和＊＊N；部分含＊B的神经元以mU为神经递质，构成了INV至NTS的兴奋性传导通路，并且可能通过GABAB受体受GABA的抑制性调控；INV内含CB的神经元接受口面部躯体和内脏伤害性信息的汇聚，并参与外周伤害性信息向NTS和PBN的传递，进而通过NTS和 PBN可能影响躯体一内脏及心血管反射活动。
刘玲[3]2008年在《孤束核味觉区脑啡肽和γ-氨基丁酸对味觉信息的调制作用》文中指出孤束核吻侧段(rostral nucleus of the solitary tract,rNST)与味觉信息的传递及整合有密切关系。rNST不仅接受来自于面、舌咽及迷走神经的味觉传入,而且与味觉调控关系密切的核团(臂旁核、下丘脑、丘脑、中央杏仁核、味觉皮质等)之间具有往返的纤维联系。rNST内含有多种神经递质和调质。其中,谷氨酸和P物质主要发挥兴奋性调节作用,而脑啡肽(enkephalin,ENK)和γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)主要对味觉感受神经元产生抑制作用。rNST内分布有密集的ENK阳性(ENK-ir)纤维和终末及大量的μ型和δ型阿片受体(μopioid receptor,MOR和δopioid receptor, DOR)。GABA阳性(GABA-ir)神经元也大量存在于rNST内。Malanga等发现GABA的活性受到阿片类物质的抑制,而Echo等则证实阿片与GABA存在功能上的协同作用,但其作用机制的形态学基础目前仍未见报道。且孤束核内的GABA能神经元是否呈MOR阳性,这些尚都缺乏直接的形态学证据。为此,本研究利用脑立体定位仪并应用光、电镜免疫组织化学方法,对大鼠摄食变化及rNST内ENK-ir与GABA-ir结构之间的相互联系以及MOR-ir神经元与ENK-ir终末的联系进行了观察。第一部分孤束核内微量注射脑啡肽和γ-氨基丁酸引起大鼠摄食改变的行为学研究目的利用脑立体定位仪向孤束核内微量注射脑啡肽和γ-氨基丁酸,观察大鼠摄食变化。方法1.测量基础摄食量SD大鼠22只。分为三组,GABA组10只、ENK组10只和对照组2只。均单笼饲养在消毒后的笼子中,自由进水、饮食,室温22±2℃,12 h光照/黑暗转换。连续喂养5日,以适应环境。并测量累积摄食量。2.外科手术2.1用2%戊巴比妥钠(45 mg/kg)腹腔麻醉后,将动物头部固定在立体定位仪上,根据Paxinos和Watson[Paxinos and Watson, 1999]图谱经颅骨在rNST将一带芯不锈钢导管(外径0.9mm)插入rNTS上方2.0 mm处(Bregma向尾段12.80mm,中线旁开1.2mm,Bregma点水平向下6mm。Bregma点是大鼠的前囟门位置)手术后,每天给予肌肉注射青霉素20万单位,连续四天,以防伤口和颅内感染。2.2脑内注射:动物轻微麻醉后,将一微量注射器针头(外径0.4 mm)经导管插入脑内,使其尖端在导管尖端下方2.0 mm处,以到达rNTS(Bregma向尾段12.80mm,中线旁开1.2mm,Bregma点水平向下8mm)。将0.2(每侧)μl的药物或生理盐水缓慢地注入rNTS。3.术后测量基础摄食量在注药后4小时、8小时、12小时按同一方法记录大鼠累积进食量。4.注射区的组织学定位实验结束时,在深度麻醉下,将动物用生理盐水和4%多聚甲醛液中相继经升主动脉进行灌注。取出脑并将其在4%多聚甲醛溶液中后固定1-2 d。用冰冻切片机切成大约60μm厚的切片,HE染色。然后将注射位点按组织学图谱进行组织学定位。结果1.注药部位检查:切片检查显示,rNST微量注射的部位(即针道的顶端)处于孤束核吻端内,双侧对称。2.GABA组10只,其中有1只出现了术后感染,弃去不用。从分别在注药后4小时、8小时、12小时测量摄食量,剩余9只与对照组相比,均出现摄食量降低。3.ENK组10只分别在注药后4小时、8小时、12小时测量摄食量,与对照组相比,均出现摄食量降低。结论分别向孤束核内微量注射GABA和ENK,均可引起大鼠基础摄食量降低,这主要是由于二者均可抑制孤束核内的味觉神经元活性,从而影响大鼠的基础摄食量。第二部分大鼠延髓孤束核吻侧段内脑啡肽阳性终末与γ-氨基丁酸阳性神经元联系的形态学研究目的观察大鼠孤束核吻侧段(rNTS)内脑啡肽阳性(ENK-ir)终末与γ-氨基丁酸阳性(GABA-ir)神经元之间的联系。方法1.组织材料的处理SD大鼠10只。将大鼠在腹腔内注射过量戊巴比妥钠(100 mg/kg)的深麻醉状态下开胸,经升主动脉插管,先用80 ml生理盐水冲净血液,再灌注以500 ml含4%多聚甲醛、0.05%戊二醛和2%苦味酸的0.1 mol/L磷酸缓冲液(PB,pH 7.4)。灌注完毕立即取脑并置于上述新鲜固定液中后固定4h,再移入含30%蔗糖的0.1 mol/L PB(4℃)内至沉底。将材料切块,分离出低位脑干并切片。2.免疫荧光染色法将光镜组切片置于含小鼠抗ENK(1:500)及兔抗GABA(1:5000)的反应液内(含5%正常山羊血清及0.5% Triton X-100)室温孵育24小时。之后浸入含Biotin标记的绵羊抗小鼠IgG(1:200)的反应液内于室温下孵育8小时。最后入含Texas Red标记的Avidin(1:200)及Fluorescein标记的驴抗兔IgG(1:200)反应液,室温下避光孵育6小时。将上述切片裱于载玻片上,使用SlowFade抗荧光衰减剂封片后于激光扫描共聚焦显微镜(Leica TCS-SP2)下观察。3.包埋前染色免疫电镜法电镜组切片在进行免疫组化染色之前,置于液氮中速冻数秒,放置前、后将切片浸于冰冻保护液中。将切片置于30%正常山羊血清中30 min,之后浸入含小鼠抗ENK(1:500)及兔抗GABA(1:5000)的反应液内(含5%正常山羊血清),室温孵育24 h。随后浸入含Biotin标记的绵羊抗小鼠IgG(1:200)及纳米金标记的山羊抗兔IgG的反应液内,室温下过夜。在1%戊二醛内固定10 min后将切片用银加强试剂盒进行银加强染色,染色前后使用双蒸水清洗。之后使用ABC复合物孵育2 h并进行常规二氨基联苯胺(DAB)反应。上述各步骤之间均用PBS彻底清洗。随后将经上述免疫组化双重染色的切片置入1%锇酸溶液固定1 h,在70%酒铀中浸泡4 h,梯度酒精及环氧丙烷脱水,Epon-812平板包埋。取rNTS位置的组织片做超薄切片,枸橼酸铅染色后于电镜(H-7500,Hitachi)下观察。结果1.在激光共聚焦扫描显微镜下1.1 rNTS内分布着红色标示的ENK-ir结构,以密集分布的终末为主,阳性纤维呈中等密度分布。1.2 rNTS内分布着绿色标示的GABA-ir结构,以散在分布且直径为10~15μm的小神经元为主,纤维和终末样结构则稀疏地分布于阳性胞体之间。1.3部分ENK-ir终末与GABA-ir胞体以及阴性的胞体(直径10~35μm)之间形成密切接触。2.在电镜下2.1 rNTS内存在许多ENK-ir轴突和终末。在ENK-ir终末内,可见DAB反应产物主要沉积于圆形清亮囊泡表面及线粒体等细胞器表面,在部分终末内还可见到阳性的大颗粒囊泡。2.2 rNTS内存在GABA-ir结构,可见数目及大小不等的黑色金颗粒散在分布于胞体、树突及少量轴突内。GABA-ir产物主要分布于粗面内质网及核糖体表面等结构。2.3电镜下可见到ENK-ir轴突终末形成以下突触关系:2.3.1与GABA-ir阳性胞体、树突及树突棘形成对称(62%)及非对称性(38%)轴-体(26%)及轴-树(74%)突触。2.3.2与GABA-ir阴性的胞体、树突及树突棘形成对称(73%)及非对称性(27%)轴-体(18%)及轴-树(82%)突触;2.3.3与GABA-ir阴性的轴突之间还可见到少量对称性轴-轴突触,ENK-ir轴突终末为突触前或后成分。结论rNTS内的ENK-ir终末可能通过抑制或增强GABA能神经元活性或者直接抑制味觉感受神经元活性的方式参与NTS内味觉信息的感受和调节。第三部分大鼠延髓孤束核吻侧段内GABA和MOR共存神经元及ENK阳性终末与MOR阳性神经元联系的实验研究目的观察延髓孤束核吻侧段(rNST)内是否存在γ-氨基丁酸(GABA)与阿片μ受体(MOR)共存的神经元,以及MOR阳性(MOR-ir)神经元与脑啡肽阳性(ENK-ir)终末的突触联系。方法1.组织材料的处理SD大鼠22只。将大鼠在腹腔内注射过量戊巴比妥钠(100 mg/kg)的深麻醉状态下灌注,取材。方法同上。2免疫荧光染色法方法同上。光镜组第一套切片用豚鼠抗MOR(1:500)及兔抗GABA(1:5000)代替原一抗,用Fluorescein标记的驴抗豚鼠IgG(1:500)和Cy3标记的绵羊抗兔IgG(1:500)代替原二抗。光镜组第二套切片用小鼠抗ENK(1:500)及豚鼠抗MOR(1:500)代替原一抗,用Biotin标记的绵羊抗小鼠IgG(1:200)及Texas Red标记的Avidin(1:200)及Fluorescein标记的驴抗豚鼠IgG(1:500)代替原二抗。余反应步骤同。3.包埋前染色免疫电镜法将电镜组第一套切片用小鼠抗ENK(1:500)及豚鼠抗MOR(1:500)代替原一抗,用Biotin标记的绵羊抗小鼠IgG(1:200)及纳米金标记的山羊抗豚鼠IgG代替原二抗。将电镜组第二套切片用豚鼠抗MOR(1:500)及兔抗GABA(1:5000)代替原一抗,用Biotin标记的绵羊抗兔IgG(1:200)及纳米金标记的山羊抗豚鼠IgG代替原二抗。余反应步骤同。结果1.在激光共聚焦扫描显微镜下1.1 GABA/MOR双标反应可见:可见rNTS内分布着GABA-ir、MOR-ir结构。GABA-ir(红色)和MOR-ir(绿色)结构均以散在分布且直径为10-15μm的小型神经元为主。可见同时呈GABA和MOR免疫反应阳性的神经元。1.2 ENK/MOR双标反应可见:可见rNTS内分布着ENK-ir(红色)终末与MOR-ir神经元(绿色)。ENK-ir终末与MOR-ir神经元的胞体及突起形成密切接触。2.在电镜下2.1 GABA/MOR双标反应可见:GABA与MOR共存于胞体及树突内,GABA阳性(GABA-ir)产物主要分布于粗面内质网及核糖体表面等结构,MOR阳性(MOR-ir)产物位于树突膜、线粒体膜、内质网膜等结构表面。GABA-ir与MOR-ir共存神经元与免疫反应阴性的终末形成对称性及非对称性突触,以对称性突触为主。2.2 ENK/MOR双标反应可见:可见到大量的ENK-ir轴突和终末和MOR-ir胞体和树突。在ENK-ir终末内,可见DAB反应产物主要沉积于圆形清亮囊泡表面及线粒体等细胞器表面,在部分终末内还可见到阳性的大颗粒囊泡。ENK-ir终末与MOR-ir神经元的胞体及树突形成以对称性为主的突触联系。部分MOR-ir产物存在于轴突末端,且与ENK-ir产物共存,并且与免疫反应阴性树突形成对称性突触。结论rNST内的GABA能神经元表达MOR,而ENK-ir终末可能通过与MOR结合调节GABA能神经元的活性,从而参与味觉信息的感受和调节。
参考文献：
[1]. 三叉神经向孤束核投射的光、电镜研究[D]. 张文斌. 第四军医大学. 1990
[2]. 大鼠三叉神经脊束间质核内calbindin D-28k神经元接受口面部躯体和内脏伤害性传入信息汇聚和投射的研究[D]. 马文领. 中国人民解放军第四军医大学. 2003
[3]. 孤束核味觉区脑啡肽和γ-氨基丁酸对味觉信息的调制作用[D]. 刘玲. 河北医科大学. 2008
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