【摘要】目的：验证ZBED6 1043位点基因单核苷酸多态性与直肠癌的相关性。方法：采用聚合酶链式反应-限制性内切酶长度多态性方法，对81例随机直肠癌患者和同数量无亲缘关系健康对照者的ZBED6基因1043A/G多态性进行检测，并随机抽取患者及正常人样本各5例测序。结果：在81列直肠癌患者标本中未检测到ZBED6 1043位点存在基因多态性，均为AA型。结论：ZBED6基因1043A/G位点基因多态性与直肠癌发生的危险因素无相关性。
【关键词】直肠癌；ZBED6；基因多态性
【中图分类号】R735.3 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2018）36-0136-02
Association of ZBED6 gene polymorphism with rectal cancer
He Shan, Bian Wei, Yuan Xin, Lei Xiao, Liang Tiantian, Shen Tianran.
School of Medical Technology, Baotou Medical College, Baotou, Inner Mongolia, 014040 China
【Abstract】Objective The aim is to study the association of single nucleotide polymorphism (SNP1043) of the ZBED6 gene with rectal cancer. Methods The distribution of genotypic and allelic frequencies at 1043 site was detected by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism method among 81 patients with rectal cancer and the same number of unrelated healthy controls, and verified by gene sequencing analysis. Result There was only one genotype AA at 1043 sites in 81 patients with rectal cancer. Conclusion There is no correlation between the 1043A/G polymorphism of ZBED6 gene and the risk factors of rectal cancer.
【Key words】Rectal cancer; ZBED6; Single nucleotide polymorphism
ZBED6是在研究瘦肉型猪的影响因素时挖掘出来的一个转录因子，它结合在胰岛素样生长因子2（IGF2）的3号内含子区，抑制IGF2的表达量，从而影响猪的肉质[1-2]。随后展开了一系列对于ZBED6的深入研究，发现ZBED6基因主要参与细胞周期调控、发育及分化等事件，且其信号通路多与人类疾病有关[2]。敲减ZBED6后会使细胞增殖和迁移速率增加[3]。且ZBED6会影响人结直肠癌细胞的增殖和分化速率[4]。故本研究拟在直肠癌病例个体中进行ZBED6基因1043A/G位点基因多态性的研究，探讨其与直肠癌发病的相关性。
1.资料和方法
1.1 研究样本
于包头市肿瘤医院收集直肠患者81例，彼此间无亲缘关系。其中男52例，女29例，年龄41～82岁。同数量健康对照来自同时期社区体检人群，均无癌症病史，其性别、年龄与患病组相匹配。
1.2 聚合酶链反应－限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）检测
（1）提取基因组DNA：提取EDTA抗凝管采集的外周血样本基因组DNA。（2）引物设计与合成：使用Primer5软件设计引物，引物序列F：TCAAGAGCTGTGTGTAATATATGTA，R： CTAACATAGGTTCATCTGAATCAGA。目的基因序列长280bp。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆（3）PCR扩增：反应体系总体积为25μl：模板3μl，2×Taq PCR Master Mix13μl，上下游引物各1μl，去离子水7μl。（4）基因分型和测序：酶切反应总体系为10μl，包括NlaⅢ内切酶0.2μl，10×限制性内切酶Buffer1μl，PCR产物4μl。37℃水浴15min，2%琼脂糖凝胶电泳，分析其基因型（GG型：280bp，AG型：205，280，75bp；AA型：205和75bp）随机选取10份PCR产物，送由北京六合华大基因科技有限公司测序，验证基因型。
2.结果
2.1 ZBED6基因1043A/G位点基因分型
通过限制性内切酶NlaⅢ消化后电泳，结果显示ZBED6基因1043A/G位点只有AA，1种基因型，直肠癌患者与正常对照无差异。
2.2 ZBED6基因1043A/G位点测序结果
随机选取直肠癌和正常对照PCR产物各5例测序，结果显示ZBED6基因1043A/G位点只有AA，1种基因型与酶切结果完全一致，直肠癌患者与正常对照无差异。
3.讨论
Laere等人2003年在Nature上的一篇报道提出猪IGF2基因内含子3的一个单碱基突变可增加猪3%～4%的瘦肉量，并发现在IGF2基因内含子3突变的区域内存在一个未知抑制因子[1] Markljung等将此新发现的抑制因子命名为ZBED6。随后展开了一系列对于ZBED6的深入研究，发现ZBED6定位于细胞核内，主要参与细胞周期调控、发育及分化，且其信号通路多与人类疾病有关[2]。敲减ZBED6后会使细胞增殖和迁移速率增加，且ZBED6会影响人结直肠癌细胞的增殖和分化速率[3-4]。ZBED6基因在哺乳动物中有高度的保守性[5]，现发现牛ZBED6存在3个SNP对于牛体重等胴体性状具有显著影响，说明不同的SNP对于细胞增殖速率具有不同影响[6]。这3个SNP中1043A/G位点与人最具同源性，而目前尚无报道人ZBED6基因多态性与直肠癌发病关系的研究，故本课题初步探讨了人ZBED6基因1043A/G位点多态性与直肠癌关系。实验结果显示在人ZBED6基因1043位点不存在突变，均为AA型。表明直肠癌发病与1043A/G位点是否突变无关。也可能包头地区人群在此位点不存在突变，或因标本数量不足出现偏倚，可在后续研究中选取其他人群进行研究分析。且本次实验只选择了一个SNP位点研究，今后可继续选择其他的SNP位点进行分析，继续探寻ZBED6基因多肽性与直肠癌发病的关系。已确证直肠癌发病是否与该基因某位点多态性相关。
【参考文献】
[1] Anne-Sophie Van Laere, Minh Nguyen, Martin Braunschweig, Carine Nezer, et al. A regulatory mutation in IGF2 causes a major QTL effect on muscle growth in the pig.Nature，2003,425:832-836.
[2] Ellen Markljung, Lin Jiang, Jacob D. Jaffe, et al. ZBED6, a Novel Transcription Factor Derived from a Domesticated DNA Transposon Regulates IGF2 Expression and Muscle Growth. Plos Biology，2009，7：e1000256.
[3] Yong-Zhen Huang, Liang-Zhi Zhang, Xin-Sheng Lai, et al. Transcription Factor ZBED6 Mediates IGF2 Gene Expression by Regulating Promoter Activity and DNA Methylation in Myoblasts. Scientific Reports，2014，4: 4570-4581.
[4] Muhammad Akhtar Alia, Shady Younis, Ola Wallerman，et al. Transcriptional modulator ZBED6 affects cell cycle and growth of human colorectal cancer cells. PNAS, 2015，25：7743-7748.
[5] Markljung E, et al.ZBED6, a novel transcription factor derived from a domes-ticated DNA transposon regulates IGF2 expression and muscle growth. Plos Biology,2009,7(12):e1000256.
[6] Yong-Zhen Huang, Ming-Xun Li, Jing Wang, et al. A 5′-Regulatory Region and Two Coding Region Polymorphisms Modulate Promoter Activity and Gene Expression of the Growth Suppressor Gene ZBED6 in Cattle. Plos one,2013，8：e79744.
论文作者:何珊,边伟,袁鑫,雷笑,梁田田,沈甜然
论文发表刊物:《心理医生》2018年36期
论文发表时间:2019/1/10
标签：基因论文; 直肠癌论文; 多态性论文; 位点论文; 引物论文; 细胞论文; 限制性论文; 《心理医生》2018年36期 论文;