（云南省曲靖市食品药品检验检测中心，云南曲靖655000）
摘要目的：建立HPLC法测定七叶消矾洗剂中栀子苷的含量，为医院制剂提升标准提供参考依据。方法：采用ThermoC18柱（250mm×4.6mm,5μm）;流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（10：90），流速1.0ml/min,检测波长为238nm,柱温30℃。结果：栀子苷进样量在0.086-8.167μg范围内呈良好线性关系，r=0.9999；平均回收率为102.1%，RSD＝1.1%（n=6）。结论：该方法简单，便捷，可靠，可用于医院制剂标准提升的依据。
关键词七叶消矾洗剂；栀子苷；含量测定；高效液相色谱法（HPLC）
中图分类号：R917
Highperformanceliquidchromatographydeterminationofsevenleafcontentofgeniposideinalumlotion
BAOHua-yan(YunnanQujingfoodanddruginspectionandtestingcenter,YunnanQujing655600)
Abstract：Objective:toestablishaHPLCmethodtodeterminethecontentofgardenosideinthewashingagentofsevenleaves,andtoprovidereferencefortheimprovementofhospitalpreparations.Method:ThermoC18column(250mmx4.6mm,5mum)wasadopted.Mobilephaseofacetonitrile-0.1%phosphoricacid(10:90)solution,theflowrateof1.0ml/min,detectionwavelengthof238nm,columntemperature30℃.Results:thesamplesizeofgardenosidewasinagoodlinearrelationshipwiththerangeof0.086-8.167,andr=0.9999.Theaveragerecoverywas102.1%,RSD=1.1%(n=6).Conclusion:themethodissimple,convenientandreliable,andcanbeusedtoimprovethestandardofhospitalpreparation.
Keywords:Sevenleafalumlotion;Geniposide.Contentdetermination;Highperformanceliquidchromatography(HPLC)
七叶消矾洗剂是曲靖市中医院的医院制剂，由重楼（25g）、大黄(50g)、黄柏(25g)、栀子(25g)等中药材制取成1000ml。具有清热解毒、消肿止痛、解毒疗疮，主治接触性皮炎、湿疹、荨麻疹等症。亦可用于外痔、肛瘘、肛门术后坐浴[2]。由于该制剂还未建立含量测定质控标准，该制剂中重楼为君药，重楼具有清热解毒，消肿止痛，用于疔疮痈肿等作用。在中国药典[1]]重楼药材含量项下以重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅶ总和为质控依据且按干燥品计四种皂苷总量不得少于0.60%，根据该制剂处方，以上四种重楼皂苷总和理论上的含量不少于0.15mg/ml。但经过试验，在该制剂中用高效液相色谱法检测不到重楼皂苷相应的峰。大黄药材含量项下按干燥品计，含游离蒽醌以芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的总量计，不得少于0.35%，根据该制剂处方，理论上以上5中大黄素成分总量为0.175mg/ml，但经过试验同样在该制剂中找不到相对应的峰。栀子作为臣药，具有清热利湿，凉血解毒，外用消肿止痛的作用。其有效成分栀子苷，易溶于水，该制剂制法是用水煮沸、过滤、浓缩，栀子中有效成分栀子苷容易提取出，再综合考虑栀子苷对照品易购买和医院检测设备等问题，所以决定以栀子药材中栀子苷含量作为该制剂的质控依据。本文建立HPLC法测定七叶消矾洗剂栀子中栀子苷含量的方法，本方法操作简单，准确，可靠。
1仪器与试药
1.1仪器Agilent1260高效液相色谱仪（配置四元泵、自动进样器、UV检测器）；ThermoC18柱（250mm×4.6mm,5μm）；XS105电子分析天平（梅特勒上海公司）。
1.2试药栀子苷（98.4%，批号110749-201617）购自中国食品药品检定研究院。七叶消矾洗剂由曲靖市中医院提供(批号ZD2017049、ZD20170450、ZD2017051、ZD2017048)。流动相用试剂为色谱纯，水为纯化水。
2方法与结果
2.1色谱条件色谱柱：ThermoC18(250×4.6,5μm);流动相：流动相A为0.1%磷酸，流动相B为乙腈，A：B=（90:10）;流速1.0mL.min-1；检测波长238nm；柱温30℃；进样量：10μL。
2.2溶液的制备
2.2.1对照品溶液制备精密称取含量为98.4%的对照品栀子苷20.75mg，加甲醇溶解并定容至25ml。制成每ml含0.8167mg栀子苷对照品溶液。
2.2.2供试品溶液制备将供试品摇匀，精密吸取供试品5ml置于25ml容量瓶中，用水稀释并定容至刻度，摇匀，即的。
2.2.3阴性样品制备按处方各药材比例及制法，制得不含栀子的阴性样品，按“2.2.2”项下方法制成阴性对照溶液。
2.3系统适用性试验分别取供试品溶液、对照品溶液，按上述色谱条件实验，对系统适用参数进行考察，栀子苷理论板数为7725。理论板数大于2000。
2.4线性关系考察精密吸取适量浓度为0.8167mg.mL-1的栀子苷对照品溶液，分别配制成每1ml含8.617、16.33、40.84、81.67、163.3、408.4、816.7μg的栀子苷对照品溶液。分别吸取10μL进样测定。以栀子苷进样量（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，经线性回归，回归方程为Y=15.9655X+22.7402，r=0.9999。结果表明：栀子苷进样量在0.086～8.167μg范围内具有良好的线性关系。对照品、供试品、阴性对照的色谱图见图1
图1高效液相色谱图
A.对照品 B．样品C．缺栀子苷阴性样品
1.栀子苷
2.5精密度试验精密吸取浓度为81.67μg.mL-1的对照品溶液10μL，连续进样测定6次，测定栀子苷峰面积，其RSD为0.6%（n=6）。
2.6稳定性试验取批号为ZD2017051的样品，按“2.2.2”项下制备供试品溶液，在2.1项下色谱条件下分别于2、4、8、16、24h测定，测得栀子苷面积RSD为0.6%。表明样品在24h稳定。
2.7重复性试验取批号为ZD2017051的样品，按照2.2.2项下方法平行制备6份供试品溶液，按上述色谱条件，进样10μL测定。栀子苷的含量为0.4289mg/ml，其RSD为0.4%（n=6）。
2.8回收率试验取已知含量七叶消矾洗剂（批号ZD2017049）6份，精密吸取2ml置于25ml容量瓶中,分别精密加入浓度为05612mg.mL-1的栀子苷对照品溶液1ml，按照2.2.2项下方法制备供试品溶液，进样10μL测定。结果见表1。
讨论
3.1流动性优化首先参考中国药典流动相为水：乙腈（85:15），发现出峰时间快，供试品中与目标峰相邻的杂峰多且分离情况不是很好，然后尝试降低水相比例，目标峰保留时间没明显改变。尝试将乙腈换成甲醇，发现也没明显改变。尝试将水换成0.1%的磷酸，通过调节流动相比例，供试品中目标峰峰型好，与相邻的杂峰少且分离度满足要求。从而决定流动相为0.1%的磷酸-乙腈（90:10）。
3.2稀释溶剂的选择根据栀子苷的溶解性及制剂制法，尝试用水、甲醇、50%的甲醇作为溶剂，结果用水作为溶剂测得值最高，所以选择水作为溶剂。
3.3含量测定指标的选择根据参考中药复方制剂含量测定指标选择原则相关文献[3-4]应选择该复方中主药、贵重药、毒剧药或剂量较大的药物，而且要综合考虑这些药物主要成分的类型，含量，检测难易程度等问题。在该复方制剂中重楼作为君药，其含量测定项下含重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅶ总量不得少于0.60%，根据该制剂处方，以上四种重楼皂苷总量理论上的含量不少于0.15mg/ml。但在实际检测中，没有检测到相应的峰，故不能以此为检测目标。大黄在该制剂中用量较大，但在实际检测中亦没有检测到相应的峰。栀子作为臣药，其有效成分栀子苷是具有代表性的主要已知单体化合物，而且易溶于水，根据该制剂的制法，选择栀子苷作为检测目标具有一定的专属性、代表性。
参考文献：
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典：2015年版一部[S].北京：中国医药科技出版社，2015：248
[2]曲靖国立中医院.云南省食品药品监督管理局：滇ZJGF/2005-536
[3]钟淮滨.浅谈中药新药的含量测定方法研究[J]．基层中药杂志，1995，9(3)：40-41
[4]胡娟，吴志生，黄美霞等．中药复方制剂质量控制中含量测定指标的选择思路[N]．福建中医学院学报，2008-06(3)
论文作者:保花艳
论文发表刊物:《医师在线》2018年5月上第9期
论文发表时间:2018/8/17
标签：栀子论文; 制剂论文; 溶液论文; 含量论文; 色谱论文; 洗剂论文; 精密论文; 《医师在线》2018年5月上第9期论文;