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摘要：本文利用乙醚对虎杖脱脂后，通过超声波对虎杖进行总黄酮的提取，并且利用紫外分光光度法对虎杖总黄酮进行测定，同时对提取方法进行单因素实验和正交实验，经实验结果确定了最佳条件（料液比为1:15，温度为65℃，乙醇浓度为60%)，在最佳条件下测得的吸光度为0.650，计算出虎杖中总黄酮的百分含量为17.18%。
关键词：虎杖；黄酮；分光光度计；水浴；超声波
1.引言
虎杖，别名土川七、假三七、红三七，是一种蓼科植物，多年生草本，虎杖不但可以作为观赏性的植物，还可以作为食物”。虎杖含有黄酮类化合物、还含有多种糖类。
天然的黄酮多是以苷类形式存在，并且由于糖的多样性可以互相连接成很多种类型。黄酮类化合物为天然色素增加了许多色彩。这是因为它的母核中存在有共轭体系，并且通过电子的转移，重组重排，使得其延长，因此才会有颜色。黄酮化合物它自身的溶解性存在很大的差异，主要原因就是因为它的结构有很多种。在选择提取溶剂的时候一定要把这些因素考虑进去，这样才能得到最佳的方法。现在有许多新型技术比如微波提取法、超声波提取法、超临界流体萃取法，酶工程等，并且都取得显著的成效。超声波提取法主要是利用超声波加快物质运动速率和频率，增加溶剂进入原料的能力，以便于让黄酮类化合物的溶解速度和次数相应的增加，缩短提取黄酮时间的一种浸提方法。超声波提取黄酮主要有以下几个优点：1.提取率高，超声时间短。2.可以同时进行几组实验，很大程度上的节约了时间。3.提取速度快，节省溶剂，节约能耗。分光光度法的原理是黄酮类化合物是具有苯并吡喃环结构的一类化合物的总称。
2.实验
2.1仪器、试剂
2.1.1仪器：超声波清洗仪（KQ32B型）；循环水式多用真空泵（SHB-3型）；集热式恒温加热磁力搅拌器（DF-101S型）；紫外可见光分光光度计（759CRT型）。
2.1.1试剂：芦丁(AR)；亚硝酸钠(AR)；硝酸铝(AR)；氢氧化钠(AR)。
2.2样品与试剂的制备
准确称取在100℃干燥至恒重的芦丁对照品（含量为95%）25mg，倒入50ml的量瓶中加入乙醇适量，通过超声处理使之加快溶解，待冷却后，加入乙醇至容量瓶刻度线，摇匀，放置15分钟[8]。精密量取10.00ml的芦丁对照品溶液，倒入25ml的容量瓶中，定容至刻度线，摇匀，即可得到芦丁的标准液
2.3最佳吸收波长的确定
将制得的芦丁标准溶液取5ml及虎杖提取液5ml。分别加入到25ml的容量瓶，加入5%亚硝酸钠溶液0.5ml，摇匀后放置6分钟，加10％硝酸铝溶液0.5ml，摇匀再放置6分钟，加5％氢氧化钠溶液2.5ml，再加水定容至刻度，摇匀，放置l5分钟，然后在400nm-600nm分别测定芦丁标准溶液及提取液的吸光度。根据所测得的吸光度的最大值，从而确定在510nm处为最佳测定波长。
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2.4标准曲线的制备
准确吸取芦丁标准溶液0.0ml、0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml，2.5ml分别置于25ml容量瓶中浓度分别为0.000，0.008，0.016，0，024，0.032，0.040。各加水至5ml，加5％亚硝酸钠溶液0.5ml，摇匀后放置6分钟，加10％硝酸铝溶液0.5ml，摇匀再放置6分钟，加5％氢氧化钠溶液2.5ml，再加水定容至刻度，摇匀，放置l5分钟[，利用分光光度计，在波长为510nm下测定的吸光度分别为0.000，0.085，0.171，0.261，0.342，0.419。根据吸光度算出的回归线方程为y=10.557x+0.0019，R2=0.9994
2.6测定虎杖提取液总黄酮最佳反应条件的研究（单因素试验）
2.6.1乙醇浓度对总黄酮测定的影响
准确称取4份2.000g脱脂后的虎杖粉末，倒入在4个50ml的烧瓶中，分别加入30ml乙醇溶液（浓度为50%，60%，70%，80%），用超声波加热两次（每次45分钟），冷却抽滤得到滤液。然后准确吸取1ml的滤液倒入25ml的容量瓶中，加水4ml摇匀，10分钟后，加入5%的亚硝酸钠5ml，放置10分钟，再加入10%的硝酸铝5ml，放置10分钟，最后加入5%的氢氧化钠5ml，定容至刻度，放置10分钟[11]，然后用分光光度计在510nm下测定吸光度。
2.6.2温度对总黄酮的测定的影响
准确称取4份2.000g脱脂后的虎杖粉末，倒入在4个50ml的烧瓶中，同时都加入30ml 60%乙醇溶液度，分别用超声波加热两次（每次45分钟），加热温度分别为45℃，55℃，65℃，75℃，冷却抽滤得到滤液。然后准确吸取1ml的滤液倒入25ml的容量瓶中，加水4ml摇匀，10分钟后，加入5%的亚硝酸钠5ml，放置10分钟，再加入10%的硝酸铝5ml，放置10分钟，最后加入5%的氢氧化钠5ml，定容至刻度，放置10分钟，然后用分光光度计在510nm下测定吸光度。（
2.6.3料液比的不同对总黄酮的测定
准确称取4份2.000g脱脂后的虎杖粉末，倒入在4个50ml的烧瓶中，分别加入20ml，30ml，40ml，50ml浓度为60%的乙醇溶液，分别用超声波加热两次（每次45分钟，温度为65℃），冷却抽滤得到滤液。然后准确吸取1ml的滤液倒入25ml的容量瓶中，加水4ml摇匀，10分钟后，加入5%的亚硝酸钠5ml，放置10分钟，再加入10%的硝酸铝5ml，放置10分钟，最后加入5%的氢氧化钠5ml，定容至刻度，放置10分钟，然后用分光光度计在510nm下测定吸光度。
3.结论与讨论
3.1单因素实验结果
3.1.1乙醇浓度对虎杖中黄铜提取的影响
从测得的数据来看乙醇浓度50%吸光度为0.645，浓度为60%吸光度为0.650，在70%吸光度为0.435，80%为0.644.在60%与80%两者间相差不大，从节约成本的方向，确定了乙醇浓度为60%为最佳。
3.1.2温度为65℃的确定
温度为45℃，55℃，65℃，75℃测得的吸光度分别为0.475，0.517，0.59，0.543。从测得的数据看，确定了最佳温度为65℃。
3.1.3料液比为1：15的确定
在料液比为1:10， 1:15，1:20，1：25的条件下测得的吸光度分别为0.540，0.560，0.354，0.400，从而确定了最佳的料液比为1:15。
3.2总黄酮的结果分析
虎杖提取液在最优条件下（乙醇浓度为60%，温度为65℃，料液比为1：15），测得吸光度为0.650。将此数值代入芦丁标准液在510nm下测定的吸光度标准曲线的线性回归方程：y=10.557x+0.0019中。得到C=6.86395mg/mL。
则总黄酮的百分含量为：
其中第一个25为稀释后的体积，单位mL；
2为稀释后的倍数（从原液中吸取12.5mL，倒入25mL容量瓶中，定容），单位mL；
25为原液的体积，单位mL； 1000为单位换算的常数； 2.0019为称取的样品量，单位g。
4.结论
利用紫外分光光度法对虎杖总黄酮进行测定，同时对提取方法进行单因素实验，实验结果确定了测定的最佳条件(料液比为1:15，温度为65℃，乙醇浓度为60%)，在最佳条件下测得的吸光度为0.650，总黄酮的百分含量为17.18%。
论文作者:吕家靖
论文发表刊物:《防护工程》2017年第21期
论文发表时间:2017/12/25
标签：光度论文; 黄酮论文; 溶液论文; 乙醇论文; 芦丁论文; 浓度论文; 超声波论文; 《防护工程》2017年第21期论文;