南京医科大学第一附属医院老年医学科ICU 江苏南京 210029
摘要：目的：观察乌司他丁对脓毒症小鼠炎症反应的影响。方法：SPF 级C57BL/6J小鼠40只，随机分为A组（对照组，n＝10）、B组（假手术组，n ＝ 10）、C 组（脓毒症组，n=10），D组（乌司他丁治疗组）。其中，B组在给予水合氯醛麻醉成功后，从正中线剪开大鼠腹部，然后缝合伤口。C组和D组在麻醉成功后，使用盲肠结扎穿孔（CLP）模型将大鼠制成脓毒症动物模型，并且D组在术后立即给予乌司他丁治疗。所有大鼠在术后24 h处死，收集外周血、肺组织制备标本。结果：乌司他丁治疗组与脓毒症组相比较，外周血IL-1β水平明显降低，肺组织炎症浸润明显减轻。结论：乌司他丁减轻脓毒症小鼠炎症反应，具有保护作用。
Abstract Objective：To observe the effects of Urinary trypsin inhibitor（UTI）on septic rats.Methods：40 C57BL / 6 mice，aged 7 to 8 weeks，weight 20-23 g，were randomly divided into four groups：control group（group A）and shame group（group B），sepsis group（group C）and UTI intervention group（group D）. Taken the cecum ligation perforation technique manufacturing model of sepsis. 24h after the operation，blood were taken to be centrifugated and the lung tissue were collected. Results：Compared with septic mice，IL-1β were reduced in UTI intervention group（P≤0.05）and lung neutrophil accumulation were relieved. Conclusion：UTI can reduce circulating inflammatory factor levels in septic mice.
Keywords：sepsis，UTI、IL-1β
脓毒症（sepsis）是因感染引起的过度的炎症反应，可导致严重脓毒症（因感染而继发的多脏器功能障碍）和脓毒症休克（严重脓毒症以及液体复苏无法逆转的低血压）[1]。严重脓毒症以及脓毒症休克每年影响全世界上百万患者的生命健康，可致其中四分之一的患者死亡，且发病率以8.7%的速度逐年增加[2]。脓毒症的病理机制复杂，普遍的观点认为其病理生理学过程是机体对病原体的过度炎症反应，主要由细胞因子所介导。脓毒症时过度释放的炎症因子，如肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）等，可引起剧烈的全身炎症反应，因此积极控制炎症反应，减少炎症因子产生，是防治脓毒症时多器官功能障碍的重要环节，对患者预后有重要作用。
乌司他丁（UTI）是从健康男性尿液中提取的一种蛋白酶抑制剂，已经广泛应用于胰腺炎、创伤、体外循环及肿瘤化疗的治疗中[3]，本研究通过动物实验探讨其在脓毒症防治过程中的作用。
1.材料与方法：
1.1动物模型与制备：SPF级C57BL/6J小鼠40只，7-8周龄，体重20-23g，随机分为四组：对照组（A组）、假手术组（B组）、脓毒症组（C组）、尿胰蛋白酶抑制剂干预组（D组）。采取盲肠结扎穿孔术（CLP）制备脓毒症模型。
1.2CLP致脓毒症模型建立：C57BL/6J小鼠实验前禁食24h，自由饮水。以3.6%水合氯（3.5ml/kg）腹腔麻醉后固定。假手术组大鼠沿下腹壁前正中切口切开2cm，寻找到盲肠后轻提起盲肠并将之回纳入腹腔，不作任何处理，缝合伤口。B组小鼠在麻醉后，将升结肠中的粪便挤入盲肠中，使盲肠进一步充盈，从盲肠盲端向上在盲肠总长度50％处结扎。避免使用止血钳造成肠管损伤，在穿破肠系膜进行结扎时需避开血管，减少出血。沿盲肠与肠系膜相对侧边缘，用BD公司输液针在结扎线下5mm处贯穿盲肠1次，造成2个漏口，使2个漏口的距离约为lcm。小心挤压结扎的盲肠，挤出少量粪便后将盲肠还纳入腹腔，逐层关闭腹部的肌层和皮肤层。手术后立即皮下注射生理盐水1ml，进行液体复苏。
1.3乌司他丁治疗组：小鼠在行CLP后立即给予UTI 50，000U/kg静脉注射。24h处死各组小鼠取血，检测血清中IL-β水平，取肺组织做病理。
1.4酶联免疫吸附试验（ELISA）测定IL-1β水平，按照ELISA试剂盒操作。
1.5肺组织病理：取实验各组肺组织，经中性甲醛固定后石蜡包埋、切片、拷片，HE染色，光镜下观察病理变化。
2、统计分析：采用SPSS17.0软件包进行分析，数据以均数±标准差（±s）表示，多组间的比较采用单因素方差分析（Oneway- ANOVA），两两比较采用LSD法；P≤0.05时为具有统计学差异。
结果：
1.1UTI对脓毒症小鼠外周血中炎症介质IL-1β的影响。脓毒症小鼠外周血IL-1β急剧升高，UTI减轻脓毒症小鼠外周血中IL-1β分泌，降低炎症反应水平。
3.讨论
脓毒症（sepsis）是宿主对感染的一种全身性，有害的免疫反应，导致严重脓毒症和脓毒症休克的发生。严重脓毒症和脓毒症休克是危及人类健康的重要问题，每年影响着全世界数百万人的生命，且发病率逐年上升。针对严重脓毒症和脓毒症休克对人类的巨大危害和挑战，2002年10月在西班牙巴塞罗那召开的欧洲危重病医学学术会议上，由欧洲危重病医学会（ESICM）、美国危重病医学会（SCCM）和国际感染论坛（ISF）共同签署了全球性拯救脓毒症运动倡议（Surviving Sepsis Campaign，SSC），同时发表了著名的《巴塞罗那宣言》，旨在改善脓毒症患者的预后，此后不断更新，为脓毒症的诊治提供指南[4]。虽然越来越多的新疗法应用于临床，但该疾病病理过程复杂，涉及全身多系统，许多患者因并发多脏器功能障碍（MODS）甚至多脏器功能衰竭（MOF）而死亡。针对脓毒症中多脏器功能及病理改变，控制脓毒症时的炎症反应，我们利用UTI对CLP致脓毒症模型小鼠进行干预，结合实验结果做以下分析：
肺在脓毒症中也是易受累的器官，脓毒症是为急性肺损伤（ALI）与急性呼吸窘迫综合症（ARDS）最重要的危险因素之一，事实上，超过半数的严重脓毒症患者可发生ALI/ARDS[5]。其发病机制主要是感染过程中肺泡巨噬细胞首先被激活[6]，天然免疫介导的炎症反应介导了ALI的发生发展，其中肺泡巨噬细胞在其病理过程中发挥这主要作用巨噬细胞活化后生成多种促炎症因子包括一氧化氮（NO），活性氧（ROS）从而造成组织损伤，降低肺血管通透性，临床上常见肺组织水肿及由此造成的顽固性低氧血症[7、8]。TNF-α，IL-6等细胞因子不仅直接引起肺损伤，也可继发激活巨噬细胞，上调内皮细胞粘附分子水平使中心粒细胞等炎症细胞易于粘附和迁移[9]。在我们的实验中可以发现，CLP致脓毒症组小鼠的肺组织病理切片可见多量中性粒细胞积聚，而UTI干预组的小鼠肺组织炎症反应有所减轻，验证了尿胰蛋白酶抑制剂对脓毒症所致的肺组织损伤具有保护作用。
在我们的实验中看出，CLP致脓毒症小鼠血清中IL-1β的水平随时间推移而升高，IL-1β在体内主要由单核细胞，巨噬细胞及树突状细胞所分泌，UTI可明显降低脓毒症小鼠外周血中炎症因子的水平，从而减轻炎症反应。
参考文献：
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[9]Dong，C.，R.J. Davis，and R.A. Flavell，MAP kinases in the immune response. Annu Rev Immunol，2002. 20：p. 55-72.
论文作者:朱冬梅
论文发表刊物:《健康世界》2017年24期
论文发表时间:2018/1/21
标签：小鼠论文; 炎症论文; 盲肠论文; 病理论文; 组织论文; 休克论文; 水平论文; 《健康世界》2017年24期论文;