湖南省衡阳市中心医院 湖南衡阳 421001
【摘 要】目的 探讨高效液相色谱法（HPLC）同时测定人血浆中氟西汀和喹硫平浓度的方法及结果分析。方法 采用HPLC同时测定人血浆中氟西汀和喹硫平的浓度。其中色谱柱：Inertsil ODS-C18柱（4.6 mm×150 mm，5μm），流动相：0.05 mol/L醋酸铵-甲醇（体积比为22∶78），流速：0.8 mL/min，柱温：40℃，检测波长：254nm，萃取剂：乙酸乙酯-二氯甲烷（体积比为77∶23），内标物：卡马西平。结果 卡马西平和氟西汀、喹硫平色谱峰均不重叠，峰形均较好，卡马西平保留时间为4.9min，氟西汀、喹硫平保留时间为6.5min、7.5min；氟西汀、喹硫平分别在10～480μg/L、20～1600μg/L范围内保持良好的线性关系（r值分别为0.991、0.993），且当信噪比（S/N）为3时，氟西汀、喹硫平的检测限分别为5μg/L、8μg/L，二者3种不同浓度下的绝对回收率和绝对回收率分别大于75%、95%，日内、间相对标准偏差（RSD）均低于10%。结论 HPLC方法作为人血浆中氟西汀和喹硫平浓度监测及临床药物动力学研究方法，不仅具有较高的灵敏度和准确度，而且成本低廉，值得临床检验中推广应用。
【关键词】氟西汀；喹硫平；高效液相色谱；HPLC；血药浓度
[Abstract] objective to investigate the methods and results of HPLC（HPLC）in determining the concentration of fluoxetine and quetiapine in human plasma. Methods HPLC was used to determine the concentration of fluoxetine and quetiapine in human plasma. The chromatographic column：Inertsil ODS - C18 column（4.6 mm * 150 mm，5 microns），mobile phase：0.05 mol/L ammonium acetate - methanol（volume ratio of 22，78），flow rate：0.8 mL/min，column temperature：40 ℃，detection wavelength：254 nm，extracting agent：ethyl acetate - methylene chloride（volume ratio of 77：23），internal standard：carbamazepine. Results the peaks of carbamazepine and fluoxetine and quetiapine were not overlapped，the peaks were all better，and the time of camequine was 4.9 min，and the retention time of fluoxetine and quetiapine was 6.5 min and 7.5 min. Fluoxetine，quetiapine respectively in 10 ~ 480 mu g/L，20 ~ 1600 mu g/L keep a good linear relationship（r value were 0.991，0.993），and when the signal-to-noise ratio（S/N）of 3，fluoxetine，quetiapine flat detection limit respectively 8 mu mu g/L，5 g/L，the three kinds of different concentrations of absolute recovery rate and absolute recovery rate is greater than 75% and 95%，respectively，between days，relative standard deviation（RSD）were less than 10%. Conclusion HPLC method as fluoxetine and quetiapine in human plasma concentration monitoring and clinical pharmacokinetics research method，not only has high sensitivity and accuracy，and low cost，is worth popularization and application in clinical laboratory.
[Keywords] fluoxetine；Quetiapine flat；High performance liquid chromatography；HPLC；Blood drug concentration
近年来随着生活和工作压力的不断增加，使得临床上焦虑和抑郁等患者呈现出逐年上升和年轻化趋势，虽然临床对于此类患者多采取药物治疗，但抗精神类药物其本身的安全范围较为狭窄，副作用较大；加上患者自身疾病的特殊性，即对治疗方法和服药的抗拒和排斥等[1]。因此临床上亟需对此类药物进行血药浓度的监测，以寻找最小剂量、最小副作用的最佳服药浓度，为此我们开展了利用高效液相色谱法（HPLC）同时测定人血浆中氟西汀和喹硫平浓度的相关研究，现报告如下。
1 对象
选取2016年1月~2017年1月我院收治的5例抑郁症住院治疗患者作为研究对象，其中男2例，女3例，年龄28~65岁，所有患者均口服氟西汀40mg/d、喹硫平400mg/d治疗。5例患者均于治疗14d后于清早空腹下空腹采集血标本并进行分离血浆后测定血药浓度。
2 仪器、试剂与标准品
仪器：高效液相色谱仪（日本日立L-2130），包括紫外分光检测器（SPD-20A）、进样器（六通7725i）、系统工作站（LC Solution）、电子分析天平（XS105）、泵（LC-20AT）、S20 pH计（梅特勒-托利多仪器公司、离心机、旋涡混合器、氮吹仪，水浴箱、超声脱气机等[2]。
试剂及标准品：美国迪马公司的甲醇（批号93101），台山粤侨试剂公司醋酸铵（批号2008031），超纯水，其他乙酸乙酯、、氢氧化钠等均为国产分析纯。标准品氟西汀（购自上海中西药业股份有限公司，批号20080316），喹硫平（批号100815 X00501）、内标物卡马西平（批号100114220100401）均购自于中国药品生物制品检定所[3]。
3方法
首先建立色谱条件：Inertsil ODS-C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，5μm），流动相：0.05 mol/L醋酸铵-甲醇（体积比为22∶78，乙酸pH值为6.5，使用前超声波脱气处理），流速：0.8mL/min，柱温：40℃，检测波长：254nm，进样量：20μL。其次取1ml含有氟西汀和喹硫平的血浆标本置入专用试管并加内标参照按照实验室规程及试剂操作说明进行标准曲线的制备，其中标准曲线制备方法参照张岳春等[2]的试验方法及步骤进行。
4 统计学方法
采用LC Solution工作站对色谱数据进行采集，应用SPSS19. 0版软件对本次研究数据进行统计分析，均数±标准差（ ）表示计量数据。
5 结果
5.1 色谱图
卡马西平和氟西汀、喹硫平色谱峰均不重叠，峰形均较好，卡马西平保留时间为4.9min，氟西汀、喹硫平保留时间为6.5min、7.5min。试验中血浆中的杂质均为对本次测定产生任何干扰影响。见图1-3。
图3 服药后的患者血样（1为卡马西平，2为喹硫平，3为氟西汀）
5.2 灵敏度和线性关系
标准品浓度（Y）以氟西汀、喹硫平的峰面积与内标卡马西平的峰面积比值（X）进行线性回归分析，结果显示：①氟西汀、喹硫平分别在10~480μg/L、20~1600μg/L范围内线性较好，标准曲线回归方程分别为Y=18.173X-3.254（r=0.991）、Y=9.256X+2.546（r=0.993）；②当信噪比（S/N）为3时，氟西汀、喹硫平的检测限分别达到5μg/L、8μg/L。
5.3 回收率与精密度试验
采集适量空白血浆用以制备高、中、低3种浓度血浆标准品溶液，其中氟西汀3种浓度分别为240μg/L、60μg/L、10μg/L；喹硫平3种浓度分别为800μg/L、200μg/L、20μg/L，试验操作按照梁俊等[3]的试验方法进行操作。氟西汀、喹硫平两种药物高、中、低3种浓度绝对回收率、相对回收率均分别大于75%、95%，日内、间相对标准偏差（RSD）均低于10%。见表1。
表1 氟西汀和喹硫平高、中、低3种浓度下的回收率及日内、日间精密度
6 讨论
氟西汀是临床使用较为广泛的抗抑郁药，属于选择性5-羟色胺再摄取阻滞剂，不仅患者具有较高的耐受性，而且药物自身的毒副作用较小，但临床单用效果并不佳[4]；喹硫平作为非典型抗精神类药物，同样具有较为显著的抗焦虑、抗抑郁等药效[5]；因此目前临床上对于难治性抑郁症患者多给予上述两种药物的联合治疗[6]。这也是本研究开展的目的和价值所在，即为此类联合用药的疗效和安全性进行研究并对临床用药进行个体化指导[7]。
本研究发现由于氟西汀和喹硫平均存在苯环，因此对于紫外吸收能力较强，而且前者的强吸收峰出现在210、254nm处，后者为210、256nm处，为减少杂质和溶剂对研究结果的影响，我们在研究中选择了254nm。结果显示卡马西平和氟西汀、喹硫平色谱峰均不重叠，峰形均较好，卡马西平保留时间为4.9min，氟西汀、喹硫平保留时间为6.5min、7.5min。而且无论是灵敏度和线性关系，还是回收率与精密度试验，结果符合临床药代动力学试验指导 原则，结果可靠值得信赖[8-9]。
总而言之，HPLC方法作为人血浆中氟西汀和喹硫平浓度监测及临床药物动力学研究方法，不仅具有较高的灵敏度和准确度，而且成本低廉，值得临床检验中推广应用。
参考文献：
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论文作者:姚科,丁菁
论文发表刊物:《中国蒙医药》2017年第12期
论文发表时间:2017/11/3
标签：西平论文; 浓度论文; 血浆论文; 色谱论文; 回收率论文; 高效论文; 标准论文; 《中国蒙医药》2017年第12期论文;