(2南昌市新建区乐化镇中心卫生院 江西 南昌 330114)
【摘要】 目的:研究奥美拉唑（OME）增强多柔比星（ADM）对肺腺癌A549细胞株的毒性作用。方法:采用0、2.0、4.0、8.0以及16.0ug/ml OME对肺腺癌A549细胞株进行处理48h，之后采用锥虫蓝法测定A549细胞毒性。OME预处理A549细胞0和24h后，采用MTT法检测A549细胞的半数抑制浓度（IC50），分析不同浓度OME对肺腺癌A549细胞株的毒性作用。结果:不同浓度OME处理48h后，锥虫蓝染色，显微镜下均未见蓝染细胞。不同浓度OME预处理0h，ADM对A549细胞的IC50对比无差异，P＞0.05。不同浓度OME预处理24h，ADM对A549细胞的IC50随着OME预处理浓度的增大而逐渐降低，均P＜0.05。结论:OME对肺腺癌A549细胞无毒性作用，但能增强ADM对A549细胞的毒性。
【关键词】 奥美拉唑；多柔比星；肺腺癌；A549细胞；毒性作用
【中图分类号】R730.5 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2017）34-0199-02
恶性肿瘤较高的发生率和死亡率一直威胁着人们的生命安全，是全世界关注的重点疾病。目前随着对恶性肿瘤研究的不断深入，靶向治疗、放化疗等综合治疗的研究成为恶性肿瘤的研究热点，放化疗也越来越受到人们的重视。但放化疗的毒副作用导致患者不耐药情况一直是临床上的棘手问题。本文采用奥美拉唑制造微酸环境，研究其在ADM对肺腺癌A549细胞毒性作用中的影响，现报道如下。
1.材料与方法
1.1 细胞和试剂
购自华中科技大学实验室提供的人肺腺癌A549细胞株。由阿斯利康制药有限公司生产的奥美拉唑（规格：20mg/片 批号：国药准字H20046379）。由浙江海正药业股份有限公司生产的盐酸多柔比星（规格：5ml：10mg 批号：国药准字H20041318）。由杭州四季青公司提供的胎牛血清。武汉博士德公司生产的锥虫蓝。
1.2 方法
1.2.1细胞培养方法 将A549细胞株种植于由Gibco公司生产的RPMI 1640培养液中（含10%胎牛血清），青霉素、链霉素浓度为100U/ml。将培养基置于37℃下培养箱中培养，5%CO2，培养3d。
1.2.2 A549细胞毒性检测 将对数生长期的A549细胞配置为1×105个/ml的单细胞悬液，接种于24孔板上，1ml/孔，在37℃、5%CO2下培养24h，之后每孔按浓度梯度加入OME，培养48h。收集上述细胞并弃除上清液，加入20ul PBS重悬细胞以及0.4%锥虫蓝混合，显微镜下观察蓝染细胞数。
1.2.3 MTT法测量A549细胞的IC50 将对数生长期的A549细胞制成2.5×104个/ml的单细胞悬液，接种于96孔板上，200ul/孔，设置不含细胞的等量培养液为空白组。将96孔板置于37℃、5%CO2的培养箱中培养24h。OME预处理0h组：将不同浓度的OME和ADM（0.05、0.1、0.2、0.4、0.8ug/ml）按浓度梯度加入孔中，培养48h。OME预处理24h组：每孔按浓度梯度加入OME，预处理24h后更换培养液，PBS缓冲液洗涤3次，再按上述浓度梯度加入ADM，培养48h。培养后两组每孔加入20ul MTT（5mg/ml），细胞培养箱中孵育4h，去除上清液，每孔再加入100ul DMSO，摇匀20min后充分溶解结晶，酶标仪波长492nm处进行吸光度（A）测量，计算细胞生长抑制率。公式：细胞生长抑制率=[1-（A实验组-A空白组）/（A对照组-A空白组）]×100%。
1.3 统计学处理
采用SPSS18.0统计软件，计量资料用x-±s表示，采用t检验，计数资料用百分比表示，采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。
2.结果
2.1 锥虫蓝蓝染情况
不同浓度OME处理48h后，锥虫蓝染色，显微镜下均未见蓝染细胞。
2.2 ADM对A549细胞IC50的影响
不同浓度OME预处理0h，ADM对A549细胞的IC50对比无差异，P＞0.05。不同浓度OME预处理24h，ADM对A549细胞的IC50随着OME预处理浓度的增大而逐渐降低，均P＜0.05。见表。
表 ADM对A549细胞IC50的影响（n=3）
注：与0ug/ml OME对比，*P＜0.05。
3.讨论
目前微酸环境对肿瘤耐药性的研究成为热点，引起众多专家学者的研究[1]。微酸环境不仅与肿瘤耐药性有关，还与肿瘤的生长、转移等密切相关。因此如何对局部微酸环境进行改变，降低肿瘤细胞耐药性，增强药物对肿瘤细胞的毒性作用，从而提高放化疗效果是当下研究的重点内容。
对于如何影响局部环境有学者提出应用囊泡型质子泵（V-ATPase）抑制剂来改变细胞的酸碱平衡[2]。由于大多数化疗药物呈弱碱性，因此肿瘤局部酸性环境对药物穿透细胞膜造成一定影响，导致肿瘤细胞耐药性增加[3]。
在本文研究结果中显示，不同浓度OME处理48h后，锥虫蓝染色，显微镜下均未见蓝染细胞。不同浓度OME预处理0h，ADM对A549细胞的IC50对比无差异，P＞0.05。结果提示单纯采用OME处理对A549细胞并无毒性作用。通过不同浓度OME预处理24h发现，ADM对A549细胞的IC50随着OME预处理浓度的增大而逐渐降低，均P＜0.05。结果提示，OME与ADM可能存在竞争性抑制作用。肿瘤细胞生成酸性物质较多，造成了细胞酸性微环境，从而隔离了碱性化疗药物的渗透作用，降低了治疗作用。OME处理后，通过抑制V-ATPase从而改变PH值，诱导肿瘤细胞对化疗药物更敏感。
综上所述，OME对肺腺癌A549细胞无毒性作用，但能增强ADM对A549细胞的毒性。
【参考文献】
[1]郭喜喜，汪文东，王家顺等.奥美拉唑增强多柔比星对肺腺癌A549细胞毒性作用的实验研究[J].华中科技大学学报（医学版），2012，41(5):593-596.
[2]翁涵，金海，庹必光等.质子泵抑制剂抗肿瘤机制的研究进展[J].医学综述，2017，23(3):465-469.
[3]郭道华，胡永全，孔令提等.奥美拉唑增强奥沙利铂对胃腺癌SGC-7901细胞毒性作用的体外实验[J].临床合理用药杂志，2017，10(4):22-23.
论文作者:刘丹1,甘海涛2
论文发表刊物:《医药前沿》2017年12月第34期
论文发表时间:2018/1/8
标签：细胞论文; 浓度论文; 毒性论文; 腺癌论文; 作用论文; 细胞株论文; 肿瘤论文; 《医药前沿》2017年12月第34期论文;