陈志强[1]2000年在《肾炎3号方治疗不同病理类型慢性肾炎的临床研究及其对系膜细胞和相关因子及基因表达影响的实验研究》文中研究指明肾炎3号方是导师根据“少阳三焦气化”理论，结合慢性肾炎（CGN）本虚以气阴两虚为主，标实以湿热（热毒）、瘀血为著的病机特点，拟出的以疏利少阳为主，兼益气养阴、清热利湿（解毒）、活血化瘀为一体的具有良好临床疗效的纯中药复方。在前期研究中，我们先后对104例和206例CGN患者进行了临床疗效观察，分别取得总有效率88.46％和87.86％的治疗效果，在此期间我们又开展了一系列实验研究，结果对该方的显著疗效予以了充分肯定，同时对其作用机理进行了初步探讨。为了探求该方治疗CGN最适宜的病理类型和进一步从细胞、分子生物学的角度阐明该方的作用机理，我们开展了本次临床和实验研究。 在临床研究中，我们利用肾穿刺技术对已确诊的50例CGN患者进行了肾组织活检和病理分型诊断，在此基础上对50例患者进行了肾炎3号方的疗效观察。结果50例CGN患者中有系膜增生性肾炎（MsPGN）29例，IgA肾病（IgAN）11例，膜性肾病（MN）4例，膜增生性肾炎（MPGN）3例，肾小球轻微病变（ML）、局灶性节段性肾小球硬化症（FSGS）、增生性硬化性肾小球肾炎（PSGN）各1例。50例患者的临床疗效为完全缓解率32％，部分缓解率54％，总有效率86％；其中MsPGN和IgAN总有效率分别为96.35％和90.91％，明显优于总有效率为50％的其他病理类型（P＜0.01和P＜0.05）。所观察指标治疗前后变化显示肾炎3号方具有降低尿蛋白、提高血浆蛋白、控制血尿、改善脂质代谢、调节免疫、改善高凝状态等作用。 在实验研究中。我们利用肾小球系膜细胞（MC）体外培养技术，采用血清药理学的方法，应用MTT、ELISA、RT-PCR等检测方法，观察了肾炎3号方血清对正常条件下培养的和受脂多糖（LPS促进MC增殖因子）刺激的MC增殖及其分泌的细胞外基质（ECM）成分和相关因子及基因表达的影响。结果显示，肾炎3号方血清能明显抑制两种培养条件下的MC增殖（P＜0.01）和增殖细胞核抗原（PCNA细胞增殖标志蛋白）mRNA表达，抑制ECM中Ⅳ型胶原（ColⅣ）、纤维连接蛋白（FN）和层粘连蛋白（LN）的分泌（均为P＜0.01），以及转化生长因子-β_1（TGF-β_1）的分泌（P＜0.01）和TGF-β_1mRNA的表达。同时可促进一氧化氮（NO）、一氧化氮合酶（NOS）的合成和释放 （P＜0．05；P（．01）以及诱导型一氧化氮合酶（iNOS）mRNA的表达。 以上的临床和实验结果表明：（1）再次肯定了以“疏利少阳”为主的肾 炎3号方对“N有显著疗效：（）肾炎3号方治疗“N最适宜的病理类型是一 MSPGN和 IgAN：（）肾炎3号方能够明显抑制MC增殖和 ECM蓄积，其抑制 TGF－日；分泌及其基因表达，促进NO、NOS合成释放和iNOS基因表达的作用，．＿．＿．＿＿、、、。＿，＿＿，，＿。＾，＿、．、．．＿，＿；、．＿＿．＿；，、＿、，，、’可能是实现这一效应的重要作用途径之一；H）肾小球 MC是肾炎 3号方发 挥治疗作用的重要靶细胞，该方对MC增殖和它所分泌的ECM、相关因子及其 基因表达的影响，可能正是该方治疗 CGN（尤其是 MSPGN和 IgAN），防止其 进行性发展的重要机制之一。
黄怀鹏[2]2001年在《肾疏宁治疗系膜增生性肾炎的疗效评价及其对系膜基质硬化和相关因素影响的实验研究》文中认为目的： 系膜增生性肾炎是慢性肾小球肾炎中最常见的一种病理类型，其主要病理特征是系膜细胞增生和细胞外基质扩张，而细胞外基质的大量积聚是导致肾小球硬化的关键因素，本研究从临床病理、动物实验、体外培养肾小球系膜细胞三方面来探讨肾疏宁的临床疗效和其对肾小球系膜基质硬化及相关因素的影响，探讨该方防治肾小球炎症及硬化的作用机理。方法： （1）临床研究 选用30例经肾穿刺活检确诊为系膜增生性肾炎、中医辨证分型为气阴两虚、肝肾阴虚的患者，给予肾疏宁治疗，从主要症状、生化、病理、免疫、凝血机制的变化，评价肾疏宁的临床疗效。 （2）动物实验 综合应用尾静脉注射葡萄球菌肠毒素B（0.4mg/kg、实验的第1d和第8d），隔日口服牛血清白蛋白（2mg），定期注射弗氏佐剂（0.2ml、实验的第8d和第15d），复制大鼠系膜增生性肾炎（MsPGN）模型。给予肾疏宁治疗，同时设肾炎康复片为对照组，观察治疗前后肾脏形态学、超微结构及免疫复合物沉积的情况，利用免疫组化、酶联免疫法（ELISA）、逆转录-多聚酶链反应（RT-PCR），观察肾疏宁对MsPGN大鼠肾组织系膜基质中IV胶原（ColIV）、纤维连接蛋白（FN），转化生长因子β_1（TGF-β_1）、细胞间粘附分子（ICAM-1）的影响。 （3）细胞培养 采用肾小球系膜细胞体外培养技术，利用血清药理学方法，制备肾疏宁含药血清，应用MTT、ELISA、RT-PCR等方法，将血管紧张素Ⅱ作为一种刺激因子，在不同时间（4h、8h、16h、32h），观察不同浓度（2.5％、5％、10％）的肾疏宁血清对正常和病理状态下系膜细胞增殖和细胞外基质成分及TGF-β_1、ICAM-1的影响。结果： （1）临床研究表明：肾疏宁能明显改善MsPGN患者治疗前后的主要症状，降低尿蛋白，提高血浆蛋白，控制血尿，改善脂质代谢，调节免疫、高凝状态。 （2）动物实验表明：肾疏宁能明显降低MsPGN大鼠的蛋白尿，提高血浆蛋白，改善肾功能，抑制肾小球系膜细胞增生和细胞外基质的扩张，对损伤的肾组织有修复能力，与肾炎康复片组相比有显著性差异（p＜0.05）。 免疫组化研究发现：在MsPGN大鼠肾组织中，，ColIV主要分布于系膜基质和基底膜及肾间质部位，FN主要分布在包曼氏囊及肾小球系膜基质，在基底膜上着色浅淡。正常组有FN、ColIV的弱表达，与正常组相比，模型组的FN、ColIV的染色范围显著增强（p＜0.01），肾疏宁组的FN、ColIV的染色范围较模 型组相比，显著减少（P＜0．01），肾炎康复片组的染色范围较模型组小（P＜0．05）， 肾疏宁组与之相比，亦有明显差异（P＜0．05）。ICAM－l主要分布于系膜基质和 肾小球的大血管内皮细胞、某些肾小囊的上皮细胞及小管间质部位。正常组有 ICAM－1的弱表达，与正常组相比，模型组的ICAM－1染色范围显著增强（P＜0．01）， 肾疏宁组的ICAM刁的染色范围较模型组相比，显著减少…的．of人 肾炎康复巳 片组的染色范围较模型组小，经统计学处理有明显差异k狈．05入肾疏宁组 与之相比，亦有明显差异（P＜0．05）。正常组 TGF 6；肾小球有极其微弱的表达， 而在肾间质的分布较在肾小球内多。模型组可以见到 TGF 6；大量分布在包曼氏”囊、肾小球的基底膜、血管内皮，同时在肾间质的分介亦明显增多，部分呈团 块状。肾疏宁组TGF p，在肾小球的分布较模型组相比明显减少，有极显著性差 异…m．of），而与肾炎康复片组相比，亦有显著性差异km 05人 采用HPIAS＊00病理图像分析系统分析后表明，肾疏宁组能减少细胞外 基质中 COI IV、FN及 ICAM习、TGF－P；等炎症介质在肾小球系膜区的沉积，与 肾炎康复片组相比，有显著性或极显著性差异…m．05或P刃．01X RT－PCR结果亦表明肾疏宁能下调MSPGN大鼠肾组织中COllVJN及ICAM－1、 TGF－p；等炎症介质的mRNA水平。 （3）细胞培养结果表明：肾疏宁血清能抑制正常和病理培养条件下的系 膜细胞增殖并呈现一定的量效关系，在血管紧张素＊（AT 11）刺激后，细胞外 基质中C。IW、FN的分泌在16h达到高峰，32h时开始回落，ICAM－1、TGF－p； 的分泌高峰在 AT 11刺激后 32h时出现，肾疏宁能抑铝 C。IIV、FN及 ICAM－l、 TGF－6；的分泌并且呈现一定的量效关系。细胞RT干CR结果也证实肾疏宁血清 对正常和病理培养条件下的CollV、FN及ICAM－1、TGF－i，的mRNA表达有抑制 作用 ＃＃： 肾疏宁是治疗系膜增生性肾炎的有效方剂之一，在体和离体实验均表明肾民 疏宁能明显抑制细胞外基质中 Co N、FN的分泌及其 mRNA的表达，其机理可J 能与肾疏宁降低ron－p；的含量和下调其m删n水平有关／肾疏宁亦能降低细胞 粘附分子－1（ICAM－1）的合成和下调其 mRNA表达，可能?
强胜[3]2011年在《麻黄连轺赤小豆汤治疗慢性肾炎临床疗效及其对系膜细胞增殖的影响研究》文中研究说明《伤寒论》治疗“瘀热在里”发黄的麻黄连轺赤小豆汤,经历了由治黄疸向治水肿演绎的过程。综观该方的应用的源流不难发现,该方虽是仲景为黄疸而设,后世在应用中却远远超出了其原本应用范畴,成为延续与发展仲景理论的范例,印证了仲景所言的“但见一证便是,不必悉具”诊治规律。此外,不管后世应用该方如何变化,其所针对的病机皆为：肺失通调、湿热互结。因此,但凡热与湿邪相恋于内,胶固缠绵为病,或熏蒸肝胆,致胆汁外溢而为黄疸,或侵淫头面四肢发为水肿等,皆可仿此。在此基础上,论文进一步梳理出解表发汗在中医多种病证中的应用规律,认识到解表发汗法的适应范围颇为广泛,不仅可用于外感病,亦可用于内伤杂病,有宣畅气机、调理三焦、透泄水湿、宣肺利水、祛风散寒、调理阴阳等作用。该方的适应证,就其病位而言,不仅为邪客于肌肤、毛窍、筋骨、玄府、营卫腠理等部位,也包含里证在内；就其病因病机而言,除因感受风寒外,还包括水饮内停,水湿泛滥,冷热失调,营卫失和等；就其脉证特点而言,凡具有疼痛,身痒,湿邪困滞导致的身体拘急不舒,哮喘,或水肿脉浮等症状者；就其病性而言,偏实者即可。此外,就该方方药配伍而言,之所以可用于治疗多种病证在于其中运用麻黄,而非如麻黄汤中麻桂同用,此时患者体质相对较强,应尽快发汗解表,祛除在表之湿热之邪。同时全方还运用杏仁,与麻黄相伍,一升一降,条达肺气的宣降,恢复其通调水道之功能,提壶揭盖,通调上焦以恢复水液代谢,祛除在里之湿热之邪。在上述研究基础上,本课题还就该方治疗慢性肾炎的临床疗效做了观察,发现在西医常规治疗的基础上配合使用麻黄连轺赤小豆汤,能显著改善慢性肾炎患者的临床症状,减少尿蛋白,提高血浆白蛋白,提高患者IgG、IgA及补体C3的水平,反映该方对慢性肾炎患者的体液免疫有确切的调节作用,这应该是该方能够治疗慢性肾炎的主要机理之一。为深入探讨麻黄连轺赤小豆汤治疗以系膜增生为主的肾小球疾病的效应机制,本课题从细胞层次和分子水平展开相关研究。结果显示该方具有直接抑制体外培养大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)增殖的效应,其效应随药物浓度增加而增强；该方对系膜细胞的抑制作用是通过调控系膜细胞分泌相关细胞因子(白介素-1β、白介素-6、肿瘤坏死因子-α、转化生长因子-β)而实现；同时麻黄连轺赤小豆汤具有诱导HBZY-1细胞凋亡的效应,该效应是通过该方对凋亡调控基因(B细胞淋巴瘤因子-2、Bcl-2相关X蛋白)的表达调节而产生的。初步揭示该方抑制系膜细胞增殖、诱导系膜细胞凋亡及其对凋亡相关基因的调控的效应机制。为临床应用该方治疗肾小球疾病提供了实验依据,为进一步探讨中药治疗肾小球疾病的机理提供帮助。
王惠君[4]2002年在《肾络宁对IgA肾病模型大鼠系膜细胞、细胞外基质和相关细胞因子影响的实验研究》文中指出目的：IgA肾病是原发性肾小球疾病中常见的病理类型，平均每年有2％～3％的病人发生终末期肾衰，是终末期肾衰的主要原因之一。本研究通过复制IgA肾病大鼠模型，观察肾络宁对IgA肾病模型大鼠肾小球细胞因子以及系膜细胞、细胞外基质的影响，探讨该方治疗IgA肾病的作用机理。 方法：通过口服并定时静脉注射牛血清白蛋白后，复合葡萄球菌肠毒素感染的方法复制大鼠IgA肾病模型，同时给予肾络宁治疗，设肾炎康复片为对照组，观察血尿素氮、肌酐、尿红细胞、24小时尿蛋白定量、肾脏形态学、超微结构及免疫复合物沉积的情况，利用酶联免疫吸附法(ELISA)、放射免疫法、免疫组化法结合计算机图像分析、逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)，观察肾络宁对IgA肾病大鼠肾组织白细胞介素-1(IL-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1ra)、白细胞介素-10(IL-10)及α-肌动蛋白(a-SMA)、纤维连接蛋白(FN)、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的影响。 结果： (1)肾络宁组的尿红细胞、蛋白及血尿素氮、肌酐含量与模型组相比，明显降低((p＜0.05)，且在降低血尿方面明显优于肾炎康复片组(p＜0.05)；(2)正常组无IgA、IgG沉积，模型组有弥漫的IgA和散在的IgG沉积，肾络宁组IgA、IgG沉积强度明显弱于模型组，光镜及电镜下的表现也轻于模型组。(3)PAS染色计算机图像分析结果显示系膜与肾小球面积比值模型组明显高于正常组(p＜0.05)，肾络宁组与肾炎康复片组均显著轻于模型组(p＜0.05)，且肾络宁组优于肾炎康复片组(p＜0.05)；(4)模型组肾小球的a-SMA、FN、ICAM-1表达均较正常组高(p＜0.05)，肾络宁组与肾炎康复片组均低于模型组中＜0乃5人6）模型组肾组织ILl、TNF心含量高于正常组中功．05），肾络宁组几－l、TNF咀含量显著低于模型组。且肾络宁组hL皿含量低于肾炎康复片组…＜0刀5人N 模型 问厂组IL4 二L10含量略高子正常组，其中几4 含量升高有意义中功刀5人肾络宁组与肾炎康复片组IL4、IL4 含量均高于模型组巾＜005L 肾＿络宁组又高于肾炎康复片组（P＜0刀5）。结论：（）肾络宁能减轻远A肾病模型大鼠的尿红细胞、蛋白，降低血尿素氮、肌酚含量，是治疗 IgA肾病的有效方剂之一；门）肾络宁减轻肾组织病理损害，抑制肾小球a－SMA、FN、ICAM－l 表达可能与肾络宁降低 IL－l、TNF－a，提高几－lra、IL－10，调节异常的细胞因子网络有关。（3）肾络宁的这种多靶点作用可能是其治疗IgA肾病，防止其进行性发展的机理所在。
参考文献：
[1]. 肾炎3号方治疗不同病理类型慢性肾炎的临床研究及其对系膜细胞和相关因子及基因表达影响的实验研究[D]. 陈志强. 天津中医学院. 2000
[2]. 肾疏宁治疗系膜增生性肾炎的疗效评价及其对系膜基质硬化和相关因素影响的实验研究[D]. 黄怀鹏. 天津中医学院. 2001
[3]. 麻黄连轺赤小豆汤治疗慢性肾炎临床疗效及其对系膜细胞增殖的影响研究[D]. 强胜. 南京中医药大学. 2011
[4]. 肾络宁对IgA肾病模型大鼠系膜细胞、细胞外基质和相关细胞因子影响的实验研究[D]. 王惠君. 天津中医学院. 2002