张可满[1]2000年在《氧化型LDL对血管内皮细胞的诱导激活》文中研究表明动脉粥样硬化(Atherosclerosis，AS)是严重危害人类健康的主要疾病之一。它是缺血性心脑血管疾病的重要病理基础。AS的主要特征是病灶中细胞内及细胞外脂质聚集，单核／巨噬细胞的浸润，泡沫细胞的形成，主动脉平滑肌的增生以及结缔组织成分的聚集。LDL与血管病变的发生密切相关，作为天然LDL衍生物的——氧化型低密度脂蛋白(Oxidized low density lipoprotein，Ox-LDL)是一种重要的致病因子，参与AS形成的整个病理过程。 内皮细胞损伤是AS发生的始动环节。Ox-LDL可以激活内皮细胞，诱导细胞表达粘附分子，促使产生单核细胞趋化蛋白，吸引外周单核细胞聚集于内皮，促使其进入内皮下层，并使渗入膜内的单核细胞分化为巨噬细胞，后者通过清道夫受体非反馈地摄取Ox-LDL。在Ox-LDL的诱导下，血管内皮细胞可能产生某些对细胞增殖、凋亡有影响的但目前还未知的因子。因此寻找这些新因子(或新基因)，分析研究其结构特征和生理功能，将有助于经一步了解AS发生的分子机制。 本研究工作采用差异显示反转录PCR(DDRT-PCR)技术对诱导激活的人脐静脉内皮细胞和非诱导细胞mRNA进行了差异显示分析，共获得差异表达的cDNA片段87条。选择明显差异表达的35条cDNA片段进行克隆、测序，并逐一对诱导和非诱导内皮细胞的RNA进行了Northern杂交分析，其中18条cDNA片段呈阳性杂交结果与差异显示谱一致。经DNA数据库同源性比较，得到12个被GenBank接受的新的表达序列标签(EST)，接受号为AW134405，AW134406，AW134407，AW134408，AW134409，AW134410，AW134411，AW134412，AW134413，AW735742，AW735743，AW735745。通过分析6个与已知基因同源性的片段，发现编号为21-49的克隆含thymosinβ4完整读码框架，Ox-LDL诱导内皮细胞后其表达明显增加，thymosinβ4与内皮细胞的增殖及分化有密切的关系，其表达的增加可能会影响内皮细胞的生理进程。 为了用差示cDNA片段来获得结构完整的新基因，本文选择了9个新ESTs作为混合探针，并对人主动脉cDNA文库进行筛选，结果共得到3个全长的cDNA
车京津[2]2004年在《对CRP直接参与动脉粥样硬化形成的实验研究》文中研究说明C-反应蛋白(C-reactive protein，CRP)，作为急性期蛋白的原型，近来被证实对动脉粥样硬化进展造成的心血管突发事件具有良好的预示价值，而且越来越多的证据表明CRP直接参与了动脉粥样硬化的形成。外周血单核细胞募集，巨噬细胞分泌基质金属蛋白酶(Matrix Metalloproteinase，MMP)，泡沫细胞摄取氧化的低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein，OX-LDL)是动脉粥样硬化形成和发展的重要步骤，本实验预对CRP对以上三个过程的影响进行探讨，而且有证据表明动脉粥样硬化局部的细胞成份可表达CRP，这种类似于自分泌和旁分泌的作用是CRP参与动脉粥样硬化的又一例证，本实验还将对巨噬细胞表达CRP进行研究。 方法： 本文采用单核细胞系THP-1细胞和人外周血单核细胞作为材料，利用流式细胞仪、半定量RT-PCR、明胶酶谱及ELLSA检测单核细胞表面CC细胞因子2(CC Chemokine Receptor 2，CCR2)、CD11b和CD36的表达，细胞培养上清液中MMP-2、MMP-9、MMP-1的活性，巨噬细胞内胆固醇含量以及细胞培养上清液中CRP含量，从这些方面揭示CRP在动脉粥样硬化发生和发展中的作用。 结果： (1)流式细胞仪和RT-PCR结果都显示CRP以剂量依赖性方式抑制人外周血单核细胞和THP-1细胞表达CCR2和CD11b(p＜0.05)，脂蛋白对THP-1细胞表达CCR2和CD11b的作用不同：OX-LDL诱导CCR2和CD11b的表达(p＜0.01，n=4)，而高密度脂蛋白(high density lipoprotein，HDL)抑制此二者的表达(p＜0.01，n=4)，低密度脂蛋白(low-density lipoprotein，LDL)则对其无显著影响(p＜0.01，n=4)。CRP抑制OX-LDL所诱导的CCR2(115.75±6.4比99.12±3.65，p＜0.01，n=4)和CD11b(121.25±4.79±98.5±4.93，p＜0.01，n=4)的表达增加，并与LDL显著地协同作用于CCR2(101.80+2.59摘要比161.77士10.82，P<0.01，n=4)CDllb(102.14士2.73比147.14士12.14，p<0.01，n二4)，但CRP对CCRZ和CDllb的诱导作用可被HDL所削弱。RT一PCR结果也符合以上规律。 (2)在所有实验组中Ce咫(二0.613，p<0.01)和CDllb份0.615，p<0.01)分别与培养上清液中NO含量相关，且ccRZ与CDllb也相关(二0.883，p<0.01)。 (3)P做刺激的由THP一l细胞分化的巨噬细胞在基础状态下分泌MMP一2、枷P一9、枷P一1，CRP抑制其分泌，以MMP一2为例，CRP抑制枷P一2的酶原(0.82士0.05，与空白对照组比较p<0.01)和其活性形式 (0.61土0.03，与空白对照组比较P<0.01)。ox一LDL诱导MMp的分泌，但这种作用被同时存在的CRP所抑制(0.56士0.10，与ox-LOL组比较P<0 .01)。 (4) Ox-LOL显著增加巨噬细胞内胆固醇的积累(0.323士0.023比0.150士0.013 nmol/pg蛋白，P<0.01)，而CRP明显降低巨噬细胞内胆固醇的含量，lpg/ml的C即就有此作用(0.212士0.028比0.150士0.013nmol/“g蛋白，p<0.01)，10 p g/ml的CRP对胆固醇累积的抑制作用最大(0.195士0.011 nmol/pg蛋白)。同时Rl’- pCR也显示C”在转录水平上降低 CD36的表达(p<0.01)。 (5)外周血单核细胞(pe五pheral blood mononuclear eells，pBMC)来源的巨噬细胞和THP一1分化的巨噬细胞均可表达C即，在基础状态下PBMC本身可表达cRP，浓度相对较低，为0.448士o.368nglm!，Ox一LDL以浓度依赖性方式显著增加PBMe生成C即，100 p g/ml0X一LDL使pBMC分泌的CRP增至8.1巧士o.433ng/ml，与基础状态比较增加约50倍(与空白组比较，p<0.01)，但后来加入的LPS可降低相应浓度的Ox一LDL所诱导的e即的表达(oxso+LPsl组与oxso组比较，p<0.01)。以pMA诱导分化的巨噬细胞为材料时也得到了类似的结果，并得到Rl’- PCR的进一步证实。 结论:摘要 (1)CRP诱导单核细胞表达CCRZ和CDllb，并调节脂蛋白对CCRZ和 CDllb的影响; (2)CRP抑制活化的巨噬细胞分泌MMP一2、MMP一9、枷P一1，并抑制OX一LDL 对MMP的诱导作用; (3)CRP抑制巨噬细胞起源的泡沫细胞中胆固醇的积累，此作用至少 部分是通过抑制CD36的转录来实现的; (4)巨噬细胞本身可合成C即，并受OX一LDL的上升调节。
参考文献：
[1]. 氧化型LDL对血管内皮细胞的诱导激活[D]. 张可满. 中国协和医科大学. 2000
[2]. 对CRP直接参与动脉粥样硬化形成的实验研究[D]. 车京津. 天津医科大学. 2004