【摘要】目的：通过检测贲门腺癌中PPARγ mRNA的表达，研究和贲门腺癌生物学特性间的相关性，探究PPARγ作为贲门腺癌治疗靶点的可能性。方法：采用RT-PCR检测贲门腺癌组织中的PPARγ的表达量情况。结论:（1）PPARγmRNA的表达在贲门癌组织中显著低于远端癌组织，其与肿瘤的分化程度、TNM分期、淋巴结转移情况及侵润深度相关（P<0.05)。（2）贲门癌的发生和进展可能与PPARγ其抗肿瘤活性丧失或减低相关。PPARγ可能是贲门癌的预后标志物，并作为贲门腺癌基因治疗的靶点。
【关键词】过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）；贲门腺癌；实时定量PCR
【中图分类号】R735.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2018）30-0081-02
贲门癌在我国是一种常见的消化道恶性肿瘤。目前，手术切除是贲门癌的主要治疗方式，但预后不佳，术后5年生存率统计只有20%左右。其病理类型腺癌居多，且放化疗效果不佳。因此寻找新的高效，低毒的药物成为了肿瘤治疗新的方向。过氧化物酶体增殖物激活受体（PPARs）是属于核受体超家族的一类核转录因子。PPARs可分为三种亚型，包括PPARα，PPAR β/δ，PPARγ。PPARγ在多种肿瘤组织中均有表达，包括：肺癌、胃癌、前列腺癌、结肠癌、膀胱癌、十二指肠癌、乳腺癌、甲状腺癌。并在肿瘤的发生发展中起着促进细胞分化，抑制肿瘤细胞增殖，诱导细胞凋亡，抑制肿瘤细胞侵袭和血管生成等重要作用。本研究采用RT-PCR的方法检测贲门腺癌中PPARγmRNA的表达量，研究其与贲门腺癌的生物学特性间的关系。
1.研究对象
标本为手术切除的50例贲门腺癌组织及远端癌组织（离癌组织边缘5cm以上，手术后残端为阴性）。术前均未进行放化疗。
2.PCR操作方法
提取贲门腺癌组织及其远端癌组织的总RNA作为实验组和对照组。按照逆转录试剂盒说明书合成cDNA，进行检测后以cDNA为模版扩增PPARγ基因，扩增β-actin基因做为内参照基因。操作方法：反应体系为25μL，各引物添加量为：正向引物0.5μL，反向引物0.5μL，模版DNA2μL 。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆PPARγmRNA上游引物：5'TGGAGAAAATCTGGCACCAC3'，下游引物：5'GAGGCGTACAGGGATAGCAC3'，β-actin上游引物5'TGGAGAAAATCTGGCACCAC3'，下游引物5'-GCATTATGAGACATCCCCCAC-3'。PCR反应参数：94℃预变性2min，94℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸45s，72℃再延伸5min，总计35个循环，
3.数据统计与分析
实验数据使用SPSS17.0进行统计分析，数据呈非正态分布，方差不齐，故采用Mann Whitney U检验，组间比较使用Kruskal-Wallis H检验。基因表达量计算采用2-ΔΔCt法。
4.PCR检测结果
4.1 在癌组织中PPARγ的中位表达量为1.07498，其在远癌组织中位表达量3.25193。结果显示PPARγ在贲门癌组织与远端癌组织之间的表达差异有统计学意义（P=0.01），PPARγmRNA在贲门癌组织中的表达水平较远癌组织低。
4.2 PPARγ在贲门腺癌组织表达与肿瘤的TNM分期（P=0.01）、淋巴结转移（P=0.01）、侵润深度（P=0.01）、分化程度（P=0.013）有关，差异有统计学意义。与患者的年龄、性别无相关性（P＞0.05）。
5.讨论
PPARγ分布在不同组织中，具有调节细胞生长、分化、凋亡与代谢平衡等多种生物功能。在结合和激活配体后，PPARγ和视黄酸受体（RXR）形成异二聚体，然后结合过氧化物酶体增殖物反应元件（PPRE）活化靶基因并激活目的基因转录发挥其调控作用。PPARγ具有多种抑制肿瘤的机制，主要包括：（1）阻滞细胞周期。（2）诱导细胞凋亡。（3）抑制肿瘤血管生成。（4）减少肿瘤细胞侵袭性。
在胃癌发生、发展和预后中么立萍[1]等研究认为PPARγ表达存在相关性。刘鹏飞、马秀梅[2，3]等报道认为PPARγ在胃癌的发生发展和浸润转移中可能起着抑制作用。在食管癌中，目前研究认为PPARγ表达降低可能与食管癌转移及预后不良相关[4]。
目前，在贲门腺癌与PPARγ的生物学特性间的相关性研究较少。RT-PCR结果显示贲门癌组织和远端癌组织中PPARγ的表达量差异有统计学意义（P=0.01），在贲门腺癌组织中PPARγmRNA的表达水平要低于远癌组织，与在食管癌中PPARγmRNA表达趋势一致。我们发现PPARγmRNA的表达水平与肿瘤的分化程度相关，随着分化程度的降低PPARγmRNA的表达量也随之减少（P=0.013）。与TNM分期有关，与侵袭和转移，侵润深度（P＜0.05）有关。与年龄、性别无关（P＞0.05）。RT-PCR的实验结果提示在贲门癌的发生发展可能有PPARγ的参与，其在贲门癌组织中的表达水平的降低提示贲门腺癌的发生和进展可能与PPARγ抗肿瘤活性丧失或者下调相关。
综上所述，PPARγ在贲门癌组织中的表达与其预后相关，可能是贲门癌预后的一个有用指标，可对贲门癌的发展及预后做出准确的判断，并更好地进行个体化治疗。
【参考文献】
[1]么立萍,吴开春,吴汉平,等.胃癌组织中过氧化物酶体增殖因子活化受体γ和维甲酸受体"表达的意义[J].中华消化杂志,2001;21(7):393.
[2]刘鹏飞,刘顺英,钱建忠,等.PPARgama与MMP-7与胃癌及癌前病变的关系[J].中华消化内镜杂志,2005,22(3):171-173.
[3]马秀梅,左连富,刘江惠,等.人胃癌组织中PPARγ表达及其配体对胃癌细胞生长的影响[J].基础医学与临床,2006,26(3):294-301.
[4]江洁?刘顺英,等.PPARγ激动剂对MKN-45胃癌细胞系增殖及MMP-γ基因表达的影响，东南大学学报：医学版2005，4,180-183.
论文作者:葛宇君
论文发表刊物:《医药前沿》2018年30期
论文发表时间:2018/12/6
标签：贲门论文; 腺癌论文; 组织论文; 引物论文; 肿瘤论文; 胃癌论文; 受体论文; 《医药前沿》2018年30期论文;