1.江西中医药大学 南昌 330004；2.广东省湛江市湛江中心人民医院中药房 湛江 524037；
3.广东省湛江市湛江中心人民医院药剂科 湛江 524037
【摘 要】目的 探究建昌帮特色饮片四制香附调经止痛的物质基础。方法 采用系统溶剂提取法对香附进行分部位提取，从在体、离体和血液流变学三个层面对其活性成分进行测定，并采用NMR对其有效成分进行分析。结果 石油醚部位为香附调经止痛的有效部位，其有效成分有豆甾醇、胡萝卜苷、大黄素甲醚和十六烷酸。结论 本研究首次采用在体模型、离体模型和血液流变学指标三种方法同时评价建昌帮四制香附调经止痛效应，切入江西地方炮制品种，有利于江西传统炮制流派的传承与发展。
【关键词】建昌帮；四制香附；调经止痛
香附为双子叶植物莎草科植物莎草（Cyperus rotundus L.）的干燥根茎，又名雀头香、香附子、雷公头，主产于我国山东、浙江、湖南、河南等地。现代药理研究表明：香附内含葡萄糖、果糖、柠檬烯、香附子烯、香附醇、考布松、绿叶萜烯酮等成分，具有抗菌、镇痛和抑制子宫收缩的作用，有“气病之总司，女科之主帅”之美称[1]，为妇科调经止痛的要药。现代常用香附治疗胃炎和胃痉挛疼痛、胃肠功能紊乱症、月经不调及痛经等[2]。痛经是妇科常见病，病因复杂，易反复，其高发病率直接影响了女性的健康、工作和生活质量，因此，人们对治疗痛经药物的关注度越来越高。本研究采用小鼠在体痛经模型、缩宫素所致大鼠离体子宫收缩模型和大鼠血液流变学影响三种方法结合使用评价江西建昌帮四制香附调经止痛效应，为其开发研究提供参考。
1.仪器与试剂
BT25S型电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司），香附饮片（购于江西汇仁药业有限公司），缩宫素注射液（安徽丰原药业股份有限公司），布洛芬混悬液（扬州市三药制药有限公司），己烯雌酚，生理盐水乙醇，石油醚，乙酸乙酯，水饱和正丁醇，双蒸水，所用试剂均为分析纯
2.方法与结果
2.1有效部位提取
采用系统溶剂提取法对建昌帮四制香附进行部位提取。取香附粗粉加95%乙醇回流提取三次，每次两小时，回收得乙醇浸膏，加水混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取，萃取液分别回收溶剂，作为石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位；药渣加水煎煮三次，过滤，滤液浓缩得水煎液，水层与之混合，浓缩至浸膏作为水提部位。另取香附饮片于圆底烧瓶，加适量水，水蒸气蒸馏法提取挥发油得挥发油部位。并按收率比例取适量挥发油、水煎液、乙醇浸膏混合，作为香附药材对照液。
2.2有效成分药理效应研究
2.2.1在体模型
取KM小鼠240只，体重18-22g。其中雌性小鼠216只，雄性小鼠24只。雄性小鼠为阴性对照组。216只雌性小鼠随机分为9组，分别作为空白组、模型组（布洛芬混悬液）、阳性对照组以及各供试组。每天给小鼠灌胃己烯雌酚10 mg/kg，空白组灌胃生理盐水20 mL/kg，连续7d，以同步化子宫并增加子宫对缩宫素的敏感性。第7d灌胃后各组动物禁食不禁水24 h，第8 d灌胃给药1次，20 mL/kg（约合生药量为7.5 g/kg），给药30 min后腹腔注射缩宫素10 u/kg，观察小鼠在注入缩宫素后30 min内的扭体次数（见表1）。并计算平均抑制率。
对照组平均扭体数－给药组平均扭体数
平均抑制率（%）＝ ——————————————— ×100%
对照组平均扭体数
实验结果表明，模型组与空白组比较，其扭体次数增加，说明造模成功。在同样药量下，石油醚部位的平均抑制率67.25%，远超过其他提取部位，为其治疗痛经的主要有效部位。乙酸乙酯部位和挥发油部位有减少小鼠扭体次数的趋势。
2.2.2离体模型[3]
取KM未孕雌性大鼠，于实验前连续4d灌胃己烯雌酚，10 mg/kg•d，以同步化子宫并增加子宫的敏感性。于第5d取出大鼠子宫，置于Loke'S液（NaCl 9.2 g，KCl 0.42 g，CaCl2 0.24 g，NaHCO3 0.15 g，Glucose 1.0 g，溶于1000 ml重蒸馏水）中清洗，从子宫颈端剪开，将子宫颈端固定于浴槽内固定器底部小钩上，卵巢端连接在张力换能器上。置于含15 ml Loke’S液的恒温浴槽中，温度为37 ± 0.1℃，通入95% O2 + 5% CO2混合气体，pH = 7.3。通过调节螺母加0.3 g的负荷，平衡40 min，每10 min换营养液一次，待子宫收缩频率平稳后加入0.05 u缩宫素，作用15 min后再依次加入对照组、各供试组15 mg，其中对照组给药3%吐温-80 15 μL，记录给药后子宫张力，观察药物对缩宫素引起子宫痉挛性收缩的对抗作用，记录20 min，用营养液冲洗3次后，进行下一次实验观察。统计给药前及给药后子宫肌肉张力，使用Chart4.0.1软件计算抑制的百分率，并用SPSS软件进行方差分析发现与对照组相比，给药组均有一定程度地抑制作用，且石油醚部位抑制作用最强。
2.2.3血液流变学[4]
取健康雌性大鼠170只，随机分为17组，即阴性对照（等容生理盐水）、月月舒、各供试组。灌胃给药，每天1次，连续14 d。末次给药后30 min，分别将大鼠用20％乌拉坦麻醉，腹主动脉取血4-5 mL，迅速注入加有肝素的抗凝管内，摇匀后测定其血液流变学指标：全血黏度高切、全血黏度低切、全血还原黏度、红细胞聚集指数。结果表明，模型组全血高、低切黏度显著增加，给药后全血黏度均有一定程度的降低，其中，石油醚部位改善作用最强。
2.3有效成分的分离与鉴定
取石油醚浸膏适量，以柱层析用硅胶拌样装柱，以石油醚-丙酮梯度洗脱分离。分离得到4个化合物。经NMR检测鉴定其分别为豆甾醇（stigmasterol）、胡萝卜苷（daucosterol）、大黄素甲醚（physcion）、十六烷酸（hexadecanoic acid）。
3.讨论
香附作为一种常用中药，有着广泛的生物学活性，能够治疗多种疾病，尤其在妇科疾病中有着广泛的应用，因此，继续深入研究香附的药效学物质基础，开发临床疗效确切、毒副作用小的新药很有意义。
本研究证实了香附具有明显镇痛作用，可缓解缩宫素所致的小鼠子宫收缩，减轻痛经时的疼痛症状。在同样药量下，石油醚部位为其调经止痛的主要有效部位，其平均抑制率达67.25%，远大于其他提取部位。同时，本研究采用NMR对其有效成分进行了测定，分离出了4中化合物分别为豆甾醇、胡萝卜苷、大黄素甲醚和十六烷酸。
本研究首次采用在体模型、离体模型和血液流变学指标三种方法同时评价建昌帮四制香附调经止痛效应；切入江西地方炮制品种，有利于江西传统炮制流派的传承与发展。
参考文献：
[1] 慈倩倩，李英霞，张文，等. 香附的本草考证[J]. 四川中医，2010，（04）：50-51.
[2] 徐燕，李大祥，凌铁军，等. 香附化学成分研究进展[J]. 中国实验方剂学杂志，2010，（11）：214-218.
[3] 华永庆，洪敏，李璇，等. 当归、芍药、香附及其配伍对离体小鼠子宫痛经模型的影响[J]. 浙江中医杂志，2003，（01）：28-29.
[4] 薛建欣，严永清，蒋莹. 黄芪、归尾、香附、川芎、赤芍等配伍对“血瘀”大鼠血液流变学的影响[J]. 中国中药杂志，1994，（02）：108-110+128.
基金项目：江西省卫生计生委中医药科研计划课题，课题编号2015B014
论文作者:胡律江, 张永芳, 廖华
论文发表刊物:《航空军医》2015年17期
论文发表时间:2016/4/22
标签：部位论文; 香附论文; 建昌论文; 小鼠论文; 子宫论文; 乙酸乙酯论文; 江西论文; 《航空军医》2015年17期论文;