姜岭梅[1]2000年在《TTV感染病人肝组织中的TTVDNA的定位与分布研究》文中认为第一部分 原位杂交法检测肝组织中TTVDNA技术的建立及评价 目的 建立肝组织TTVDNA的原位杂交检测技术。 方法 根据Okamoto等报道的TTVDNA序列，选择高度保守区设计一对引物，采用PCR扩增法，以地高辛标记TTVORF1部分基因序列（1914-2186nt），分别合成Gla、G2b两种亚型的双链TTVDNA探针。同时应用两型探针对22例肝病患者肝组织TTVDNA进行原位杂交检测，检测结果与配对血清巢氏PCR法检测TTVDNA的结果进行比较。随机选择一例原位杂交阳性标本，对其血清中TTV病毒株（599）ORF1部分基因进行分子克隆与核苷酸序列分析。 结果 14例血清TTVDNA阳性的患者肝组织中TTVDNA阳性13例，阴性1例。8例血清TTVDNA阴性的患者肝组织中TTVDNA阴性6例，阳性2例。S99 ORF1区部分基因的测序结果表明，其核苷酸序列与Okamoto等报道的TTV N22、Gla克隆的同源性分别为97.79％、98.16％。 结论 同时应用两型探针可以提高TTVDNA原位杂交检测的灵敏性。探针的长度和特异性、杂交严格度及杂交后的漂洗决定杂交反应的特异性。肝组织TTVDNA原位杂交检测是研究TTV感染的可靠的分子病理学技术。第二部分 TTVDNA在肝组织中的定位及分布初步研究 目的 观察TTVDNA在肝细胞中的定位及肝组织中的分布特点，初步探讨TTV感染与肝损害的关系。 方法 采用原位杂交法检测26例慢性肝炎、肝硬化、肝细胞癌患者肝组织中的 TTVDNA，同时应用巢氏 PCR法检测其中 18例患者配对血清标本中的TTVDNA，分析肝组织中TTVDNA与血清TTVDNA之间的关系。选择其中的单纯TTV感染的病例进行HE染色研究，在排除已知肝炎病毒感染的情况下，研究TTV感染后，肝组织的病理学改变。 结果TTVDNA主要定位于肝细胞和肝癌细胞核内，偶有极少数肝细胞浆内呈弱阳性。TTVDNA阳性细胞在慢性肝炎、肝硬化、肝细胞癌肝组织中呈散在分布。癌组织与癌周组织中TTVDNA阳性细胞密集程度差别不明显。单纯感染TTV的慢性肝炎病人肝组织标本HE染色可见病毒性肝炎所见的基本病理变化。 结论TTV是一种嗜肝病毒，肝脏是TTV复制的场所之一。TTV可能与非甲一庚型肝炎有关。TTV感染可能不是导致原发性肝癌的危险因素。
樊玲, 赵西平, 张东绅, 王宝菊, 张俊[2]2000年在《经血传播病毒在肝脏及肝外组织的感染状况》文中研究指明探讨ＴＴＶ在肝脏及肝外组织中的定位、分布及其意义。方法通过ＰＣＲ方法扩增ＴＴＶ基因组 ＯＲＦ_２中 １２３ ｂｐ的 ＤＮＡ片段，构建 ＴＴＶ ＤＮＡ质粒并克隆，序列分析表明与日本 ＡＢＯ１１４９４序列具有高度同源性。采用地高辛标记ＴＴＶ ＤＮＡ探针并与组织进行原位杂交，检测了２２例因肝病死亡患者的肝脏、脾脏、肾脏、胃、小肠等组织内ＴＴＶ ＤＮＡ感染状况。结果 ８例肝脏检出ＴＴＶ ＤＮＡ， ５例肾脏、 ４例脾脏、 ２例小肠、２例胃检出ＴＴＶ ＤＮＡ。阳性信号在组织中分布呈局灶性或散在胞浆型。肝脏感染度较其它组织高。阳性细胞与组织炎症坏死无固定病理解剖学关系。结论支持ＴＴＶ有嗜肝性的观点；ＴＴＶ可以感染肝外多种组织并可能导致ＴＴＶ持续感染。
朱惠明, 姜岭梅, 周伯平, 黄勋, 乐晓华[3]2001年在《TTVDNA在肝细胞中的表达及其致病性研究》文中认为1997年12月日本学者Nishizawa等最先从一例输血后非甲非庚型肝炎患者血清中分离到一种DNA病毒克隆(N22),命名为TT病毒(transfusiontransmitted virus,TTV)。并报道感染TTV后表现为一过性或持续性病毒血症,且病毒滴度与ALT升高相关,推测T1W可能是未知病毒致肝损害的病因之一。为探讨这一新型病毒在肝组织中的表达与分布特点,我们在TTV ORFl的保守区设计一对引物,采用PCR扩增法,以地高辛标记TTV ORFI部分基因序列(1914-2186nt),获得双链TTV DNA探针。用此探针对部分肝病患者肝组织TTV DNA进行原位杂交检测,并对其中一株TTV ORFl部分
李伯安, 程云, 王利平, 李靖, 高蓉[4]1999年在《应用原位杂交技术检测人肝组织中输血传播病毒核酸》文中认为目的 探讨输血传播病毒 (transfusiontransmittedvirus,TTV)在人肝组织中的分布状况及其意义。方法 采用地高辛标记探针 ,对肝组织中的TTV基因进行原位杂交定位检测。结果 原位杂交染色阳性者为细胞核团块状。 5例正常人中有 1例阳性 ,5例乙型肝炎患者有 3例阳性 ,4例丙型肝炎患者有 2例阳性 ,3例戊型肝炎患者有 1例阳性。结论 TTV可感染肝细胞并在肝细胞核内复制。正常人及不同型肝炎病人的肝细胞内均可感染TTV。
李伯安[5]2001年在《输血传播病毒(TTV)部分基因序列的克隆、表达、活性鉴定及临床病理学、流行病学的研究》文中研究指明1997年日本学者应用代表性差异分析技术，从l 例输血后肝炎病人血清中克隆到一个新的基因片段， 并暂时以病人的名字命名为TTV。随后，各国均开展 了相关的研究工作，报道了多株病毒的全基因序列， 并将该病毒正式命名为输血传播病毒（transfusion transmitted virus，TTV），恰与最初的英文命名缩写相 同。 本文根据报道的 TTV ORF2区段序列设计、合成 巢式PCR引物，从1例非甲~庚型肝炎病人血清中分 离出TTV部分基因片段。将该片段克隆到pQE－30载 体中，经过核苷酸序列测定证明该片段与日本株同源 性为96％。将该重组载体转染至大肠杆菌JM109中， 并诱导表达。经过蛋白电泳鉴定，重组体细菌裂解后 可见约12.5KD的外源基因表达带，与预期片段大小 －第7页共65页． 摘要 一致，约占细菌整体蛋白的22．33％。细菌蛋白经粗提 后，包被酶联板，进行ELISA检测，证实该粗提产物 具有良好的杭体结合活性。 利用地高辛标记上述TTV部分基因片段，作为 探针，进行了ZI 例不同背景肝组织切片的原位杂交 实验，并同时进行连续切片的HE染色以了解肝组织 的病理改变。结果显示，肝组织中阳性杂交信号呈蓝 紫色团块状或颗粒状，集中于肝细胞核内，在整个肝 组织中均匀分布。证明 TT病毒具有嗜肝性。21例切 片中有9例呈现阳性杂交信号，占42．8％。观察原位 杂交阳性切片的病理改变发现均属GI，SI期，证明 TT病毒对肝脏的损伤程度可能较轻。 根据 TTV ORn段序 fd再合成两对巢式 PCR SI 物，同时应用 ORFZ段引物及 TTV ORFZ段表达蛋白， 对 246例不同背景的血清进行了 TTV DNA及 TTV抗 体的流行病学调查。结果显示在75 例有偿献血者、 3 0例甲型肝炎患者、40例乙型肝炎患者、3 5例丙型 肝炎患者、15例丁型肝炎、12例戊型肝炎、ZI例庚 型肝炎及 18 例非甲－庚肝炎患者中，TTV ORF、 ORFZ 段 DNA 及 TTV 抗体的阳性率分别为 160、 10．7％、25．3％；10刀％、16．7％、16．7％；47．5％、42．5％、 22．5％；32．9％、37．l％、28．5％；20＊％、26．7％、13．3％； 16．7％、16．7％、33．3％；23．8、38．1％、23．8％；61．l％、 50o、44．4O。经统计分析表明甲型肝炎患者及戊型肝 炎患者的 TTV感染率低于其它人群；TTV ORF区段 和 ORFZ区段 DNA检出率无差异；血清中 TTV抗体 ·第吕页共65页． 摘要 与 TTV DNA相关性不具统计学意义。 通过试验研究了解到中国人群中存在着TTV感 染，感染率及病毒核旮酸序列与日本报道基本一致； TTV具有嗜肝性，但对肝组织的损伤较轻；血清中存 在着抗－TTV ORFZ IgG，但与 TTV DNA不相 关。为 进一步了解TTV奠定了一定的基础。
谢志春, 周元平, 吴继周, 高伟志, 胡慧宁[6]2000年在《TTV感染成年树的初步研究》文中进行了进一步梳理目的探讨树鼠句对TTV的易感性。方法通过股静脉将TTV接种于树鼠句并设对照组。用PCR技术检测血清及肝组织中TTV_DNA ,并用全自动分析仪进行DNA序列分析。结果在4只接种了TTV的树鼠句中 ,2只(50 %)血清ALT异常升高 ,肝组织有炎症表现 ,同时血清及肝组织均检出TTV -DNA ,这些检出物的序列与接种物TTV完全一致。结论树鼠句对TTV是敏感的,有望建成TTV感染的树鼠句动物模型。
参考文献：
[1]. TTV感染病人肝组织中的TTVDNA的定位与分布研究[D]. 姜岭梅. 暨南大学. 2000
[2]. 经血传播病毒在肝脏及肝外组织的感染状况[J]. 樊玲, 赵西平, 张东绅, 王宝菊, 张俊. 中华肝脏病杂志. 2000
[3]. TTVDNA在肝细胞中的表达及其致病性研究[J]. 朱惠明, 姜岭梅, 周伯平, 黄勋, 乐晓华. 现代消化及介入诊疗. 2001
[4]. 应用原位杂交技术检测人肝组织中输血传播病毒核酸[J]. 李伯安, 程云, 王利平, 李靖, 高蓉. 中华流行病学杂志. 1999
[5]. 输血传播病毒(TTV)部分基因序列的克隆、表达、活性鉴定及临床病理学、流行病学的研究[D]. 李伯安. 军医进修学院. 2001
[6]. TTV感染成年树的初步研究[J]. 谢志春, 周元平, 吴继周, 高伟志, 胡慧宁. 广西预防医学. 2000