（福建医科大学附属协和医院 福建 福州 350001）
【摘要】 目的：探讨谷氨酸转运体1（GLT-1）在瑞芬太尼诱发痛觉过敏中的作用。方法：24只CD1小鼠随机分成4组（n=6），对照组(C组)：皮下泵注生理盐水；切口痛组(I组)：皮下泵注生理盐水+左后爪切口；瑞芬太尼组(R组)：皮下泵注瑞芬太尼；瑞芬太尼+切口痛组(R+I组)：皮下泵注瑞芬太尼+左后爪切口。在建模前1d、建模后6h、1d、2d、7d测量各组小鼠左后爪的热缩足反射潜伏期(PWTL)和50%机械缩足阈(50%MWT)。Western blot检测建模后2d各组小鼠脊髓腰段GLT-1的表达情况。结果：除C组外，其余各组小鼠左后爪PWTL和50%MWT从建模后1d起均下降(P＜0.05)；与C组比较，各组建模后1d、2d，小鼠的PWTL和50%MWT均明显降低(P＜0.05)；与C组比较，各组建模后2d小鼠腰段脊髓的GLT-1表达下调(P＜0.05)，R+I组与I组比较也明显下降(P＜0.05)。结论：持续泵注瑞芬太尼可诱发痛觉过敏，GLT-1下调可能与其有关。
【关键词】阿片类药物；瑞芬太尼致痛觉过敏；谷氨酸转运体1
【中图分类号】R453 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）35-0179-02
阿片类药物诱导的痛觉过敏与其药代动力学密切相关[1]，瑞芬太尼能够更快更明显地产生术后痛觉过敏。GLT-1主要表达在星形胶质细胞上，影响着细胞外和突触间隙中谷氨酸的清除[2],当脊髓背角谷氨酸增多时，可激活NMDA受体，放大神经元的兴奋作用，导致神经元的敏化，引起痛觉过敏的发生。因此，本研究探讨GLT-1在瑞芬太尼诱发小鼠术后痛觉过敏中的作用。
1.材料与方法
1.1 主要试剂与仪器
瑞芬太尼(批号：20140302，国药集团工业有限公司)，七氟烷（上海恒瑞医药有限公司），BCA蛋白定量试剂盒(北京鼎国生物科技有限公司)，兔抗鼠GLT-1抗体(Sigma公司，美国)。足底热点仪BME-410C（上海玉研科学仪器有限公司），美国纤维丝NC12775-99（上海玉研科学仪器有限公司），SDS-PAGE蛋白电泳仪（Pharmacia Biotech公司）。
1.2 实验动物及分组
将基础痛阈无差异健康成年雄性CD1小鼠24只，体重25～30g，清洁级，购于吴氏实验动物中心（许可证号：SCXK（闽）2012-0001），采用随机数字表法分成4组（n=6），对照组(C组)：皮下泵注生理盐水；切口痛组(I组)：皮下泵注生理盐水+左后爪切口；瑞芬太尼组(R组)：皮下泵注瑞芬太尼；瑞芬太尼+切口痛组(R+I组)：皮下泵注瑞芬太尼+左后爪切口。以上各组小鼠均在密闭容器中吸入七氟醚下进行建模(麻醉诱导3%，麻醉维持1%)，术中持续泵注生理盐水/瑞芬太尼（80μg·kg-1）30min，泵注速度为0.8 mL·h-1。
1.3 热痛阈和机械痛阈的检测
分别于造模前1d、造模后6h、1d、2d、7d测量所有未处死小鼠双侧后爪的热痛阈(PWTL)和机械痛阈(50%MWT)。
1.4 脊髓组织GLT-1蛋白表达的测定
建模后2d，将各组小鼠深麻醉，用生理盐水灌注后取小鼠脊髓腰段（L4～L6）。将脊髓组织进行匀浆，4℃离心，取上清液，采用BCA法进行蛋白定量。取60μg总蛋白进行SDS．聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，电泳完毕后将蛋白转移至PVDF膜，用含5％脱脂奶粉的缓冲液室温封闭2 h，分别加入兔抗鼠GLT-1（1:1000）或GAPDH(1:1000)，4℃孵育过夜，加入辣根过氧化酶标记的相应二抗(1：1 000)，室温孵育2h，采用HRP化学发光法显色曝光，应用图象分析软件进行分析，以GLT-1的条带灰度值与GAPDH条带灰度的比值反映GLT-1蛋白表达。
1.5 统计学分析
采用SPSS19.0统计软件处理，计量资料以均数加减标准差（x-±s）表示，不同时间点PWTL和50%MWT采用双因素多水平重复测量方法，组间比较采用单因素方差分析方法，P＜0.05认为有显著性差异。
2.结果
2.1 不同分组，不同时间点小鼠疼痛行为的变化
各组小鼠基础痛阈无差别（P＞0.05)。与建模前1d相比，建模后1d、2d、7d I组、R组、R+I组小鼠PWTL和50%MWT均下降，并以建模后2d下降最为显著(P＜0.05)。建模后1d、2d，I组、R组、R+I组与C组比较小鼠的PWTL和50%MWT均明显降低(P＜0.05)。（见表1，表2）。
2.2 建模后2d各组GLT-1表达水平的比较
建模后2d，与C组比较，I组、R组和R+I组小鼠的GLT-1表达水平明显降低(P＜0.05)；R+I组GLT-1表达水平也明显低于I组(P＜0.05)。（见表3）
3.讨论
瑞芬太尼诱导术后痛觉过敏的能力与使用浓度直接有关，而与使用持续时间以及使用药物的总量无明显关系[3]，七氟烷吸入麻醉不影响瑞芬太尼诱导的术后痛觉过敏[4]。本研究在七氟烷吸入麻醉下(3%诱导，1%维持)，术中泵注瑞芬太尼80ug·kg-1，持续30min建立瑞芬太尼致痛觉过敏模型。结果表明，持续泵注瑞芬太尼可引起小鼠热痛阈和机械痛阈的下降，提示模型建立成功。
脊髓中谷氨酸的重吸收对维持正常的感觉传导（包括痛觉）至关重要，当脊髓背角谷氨酸增多时，可激活脊髓神经元突触前后膜上的NMDA受体，放大神经元的兴奋作用，导致神经元的敏化与痛觉过敏。本实验结果表明术中持续泵注瑞芬太尼后GLT-1表达下调，其可能影响脊髓中谷氨酸的重吸收，从而导致脊髓背角谷氨酸增多，引起脊髓神经元突触后膜上的NMDA受体激活，进而造成神经元敏化与痛觉过敏。
【参考文献】
[1] Xia WS,Peng YN,Tang LH,et al.Spinal ephrinB/EphB signalling contributed to remifentanil-induced hyperalgesia via NMDA receptor[J].Eur J Pain,2014,18(9):1231-1239.
[2] Zeng XN,Sun XL,Gao L,et al.Aquaporin-4 deficiency down-regulates glutamate uptake and GLT-1 expression in astrocytes[J].Mol Cell Neurosci,2007,34(1):34-39.
[3] Cabanero D,Campillo A,Celerier E,et al.Pronociceptive effects of remifentanil in a mouse model of postsurgical pain:effect of a second surgery[J].Anesthesiology,2009, 111(6):1334-1345.
[4] Shin SW, Cho AR,Lee HJ,et al.Maintenance anaesthetics during remifentanil-based anaesthesia might affect postoperative pain control after breast cancer surgery[J]. Br J Anaesth,2010,105(5):661-667.
论文作者:吴碧玲,赖忠盟,陈文华,张良成,林鹏焘（通讯作者）
论文发表刊物:《医药前沿》2016年12月第35期
论文发表时间:2017/1/4
标签：芬太尼论文; 小鼠论文; 痛觉论文; 脊髓论文; 建模论文; 谷氨酸论文; 切口论文; 《医药前沿》2016年12月第35期论文;