单中书1陈亮2（通讯作者）罗宗平2沈晓钟2顾勇2张弛2车纯庆2
（1青海省人民医院青海西宁810001）
（2苏州大学附属第一医院江苏苏州215006）
【摘要】目的：观察共轭亚油酸（CLA）对大鼠骨折愈合的影响。方法：体重200g左右的雌性Sprague-Dawley大鼠30只随机分成2组，每组15只:空白对照组（A）;CLA干预组(B)，将各组大鼠制作左胫骨中段骨折模型;A组给予生理盐水灌胃，B组给予共轭亚油酸灌胃干预(10g/Kg·diet)。于第2周、第4周、第6周检测碱性磷酸酶；行DR摄片并评分。结果：血清碱性磷酸酶（ALP）活性在骨折后2周时两组对比有显著性差异(P<0.01)，X线摄片评价显示共轭亚油酸干预组4周骨折线模糊，骨折端骨痂体积大、骨痂数量多，三名骨折医生对骨折后6周进行评分较空白对照组具有明显统计学差异。根据实验结果推测：①共轭亚油酸可以促进骨折愈合。②增强机体内成骨活动，提高ALP的活性。
【关键词】共轭亚油酸；骨折愈合；碱性磷酸酶；X线评分
【中图分类号】R965【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2015）07-0232-02
近年来的广泛研究证明，共轭亚油酸有多种生物学活性，例如减少动脉粥样硬化的严重程度，改善免疫不良刺激的影响，改善瘦素抵抗来发挥其降脂，CLA可以抑制肿瘤细胞繁殖、抑制肿瘤细胞向细胞外基质成分和纤维粘连蛋白粘附的作用。且具既无毒又无任何副作用的生物安全性。目前国内、外没有关于CLA对骨折愈合方面的相关研究，故设计本实验研究CLA对骨折愈合的影响。
1.动物及主要材料
1.1实验动物
雌性Sprague-Dawley大鼠30只，清洁级，体质量(200±15)g［北京维通利华实验动物养殖中心，动物合格证号SCXK(京)2007-0001号］。
1.2试剂和仪器
共轭亚油酸(顺-9，反-11CLA，37.6%；反-10，顺-12CLA，39.3%；C18:1，10.1l%；c18:O，2.04%，青岛澳海生物有限公司)
2.实验方法
2.1动物分组
将30只雌性SD大鼠骨折造模后随机分成2组，每组15只，A空白对照组（Control）：给予生理盐水灌胃，B给予共轭亚油酸（CLA）灌胃干预(10g/Kg·diet)。
2.2骨折大鼠骨折模型的建立与给药方法
用10%水合氯醛以3mL/kg进行腹腔注射麻醉，将大鼠仰卧，四肢固定于手术台上，各组大鼠行左侧胫骨中段纵形皮肤切口，长约2cm，沿胫前肌肌间隙钝性分离达胫骨干，固定胫骨，在胫骨干中段用线锯锯断成横行骨折，此过程注意保护神经和肌肉组织，再以直径为0.8mm的克氏针逆行穿入骨折近端且从胫骨结节穿出，复位骨折后再将其顺行穿入骨折远段髓腔，生理盐水冲洗，逐层关闭伤口。不包扎，不固定。术后在大鼠尾部标记，待麻醉醒后放入笼中喂养，自由取食、饮水。
每天18：00灌胃一次，灌胃剂量为：A组给予生理盐水灌胃，B组给予共轭亚油酸灌胃干预(10g/Kg·diet)，其他食物统一给标准鼠粮。各组大鼠均自由进食饮水，12h光照周期。
2．3检测标本采集：
2.3.1血清碱性磷酸酶（ALP）测定：骨折造模后第2周、第4周和第6周，处死5只实验大鼠取1.5ml血，离心后取上清液测定。
2.3.2X射线检查大鼠胫骨骨痂的连续性及骨折愈合情况：在胫骨骨折造模后第2周、第4周和第6周将各组大鼠用10%水合氯醛以3mL/kg进行腹腔注射麻醉后计算机X射线摄相仪(DR)摄片，拍摄条件为50kV，2.5ms，观察大鼠胫骨骨痂的连续性及骨折愈合情况。
表1：骨痂形成的影像学分级量表
骨痂形成的影像学评分:每张片均由3名骨科医生分别评分，取平均值，对骨折断端愈合组织具体评分标准如下:
2.4统计分析
测定数据采用SPSS16.0进行数据处理，两组间比较采用t检验，设P<0.05为差异有显著性意义。
3实验结果
3.1血生化指标检测结果：
骨折2、4、6周后CLA干预组和空白对照组ALP浓度均有不同程度的升高，CLA干预组在2周时ALP浓度均明显高于生理盐水对照组（p=0.0126）;骨折后4周、6周CLA干预组血清ALP浓度均高于生理盐水A组，无统计学意义（图1）。
图1：空白与CLA两组在不同时间点对大鼠血清ALP浓度的测定，在2周时CLA干预组ALP浓度均明显高于生理盐水对照组（p=0.0126）。
3.2X线检查结果：
骨折2周空白组：0.83±0.19分；CLA干预组：1.08±0.16分。骨折4周空白组：3.0±0.33分；CLA干预组：3.66±0.33分、骨折6周空白组：3.38±0.36分；CLA干预组：4.43±0.57分。骨折6周时CLA干预组的评分明显较对照高。
4讨论
本实验结果提示CLA对骨折愈合有促进作用。通过对骨折不同时间点观察血清ALP和放射学检查说明经过CLA干预后的大鼠骨折愈合明显优于空白对照组。血清ALP在骨折后2周明显高于空白对照组P=0.0126，而且在术后第4、6周，CLA干预组的ALP均高于空白对照组，虽然两组对比无统计学意义，但是发现CLA干预组的ALP保持一定的水平，我们认为CLA可以提高ALP的活性，从而说明CLA有助于骨折早期愈合。放射学的检查同样证实这一点，选3名骨科医生对X线光片的评价，并应用统一的骨痂愈合评分标准，我们发现在术后第6周，CLA干预组的评分3.38±0.36分，空白对照组评分4.43±0.57分，CLA干预组明显优于空白对照组P<0.05，2、4周两组虽没有统计学意义，但是CLA干预组的评分均优于空白对照组。以上的结果说明CLA可以促进骨痂形成，有助于骨折愈合。
论文作者:单中书1陈亮2（通讯作者）罗宗平2沈晓钟2顾勇2张弛2车纯庆
论文发表刊物:《医药前沿》2015年第7期供稿
论文发表时间:2015/7/3
标签：胫骨论文; 大鼠论文; 空白论文; 生理盐水论文; 对照组论文; 血清论文; 亚油酸论文; 《医药前沿》2015年第7期供稿论文;