黄文烨[1]2004年在《霉酚酸对小鼠树突状细胞体外成熟和免疫学功能的影响》文中研究说明[目的] 霉酚酸酯(mycophenolate mofetil，MMF)是一种新型免疫抑制剂，目前已被临床上广泛应用于异基因骨髓移植，可明显减少急慢性移植物抗宿主病(graft versus Host disease，GVHD)的发生率和严重程度，从而提高异基因骨髓移植的成功率。MMF在体内脱酯后形成具有免疫抑制活性的霉酚酸(mycophenolate acid，MPA)，MPA是高效的、选择性的、非竞争性的、可逆的次黄嘌呤磷酸脱氢酶(IMPDH)抑制剂，可抑制鸟嘌呤核苷酸的经典合成途径，由于T、B淋巴细胞对嘌呤经典合成途径的高度依赖性，MPA对其有强烈的选择性免疫抑制作用。 以往的研究认为GVHD的发生是由供者成熟的T细胞将宿主主要组织相容性抗原(MHC)或次要组织相容性抗原(MiHA)作为异物识别而诱发的免疫反应。近年来，随着树突状细胞(dendritic cell，DC)研究的不断深入，发现DC在移植免疫中同样起着重要的作用。最近的实验表明，MPA除影响T、B细胞功能外，还可直接抑制抗原提呈细胞的免疫学功能，而树突状细胞是目前公认的抗原呈递能力最翻片玄‘大月卜月叹d卜拳勺比侧考文强的专职抗原递呈细胞(antigen presentation cell，APC)，其T细胞激活能力比巨噬细胞、B细胞等其它APC强100倍以上，并且是唯一能够在体内或体外激活初始型T细胞、启动初次免疫应答的APC。为此，我们研究了M以对体外培养的小鼠骨髓来源树突状细胞的分化、成熟和免疫学功能的影响，以及对其NF一K B p50表达水平的影响，以期进一步探讨MPA/MMF防治GVHD免疫抑制作用的机理。〔方法〕1参考Inaba方法并稍加改进来体外培养小鼠骨髓来源的DC，实验分3组，一组为对照组，即培养时仅加入GM一CSF 10ng/m1，IL一4 Ing/ml;二组为MPAO.ol组，即除了上述细胞因子外加入0.01，mol/L的MPA溶液处理;叁组为MPAO.1组，即除了上述细胞因子外加入0.1 p mol/L的M以溶液处理。2用倒置显微镜逐日观察细胞生长状况，并收集培养后的细胞悬液离心富集后涂片自然干燥，并进行Wri ght染色镜检，摄片。3用流式细胞仪检测小鼠DC细胞表面表型，加入荧光标记的单克隆抗体分别为Iah、eo4o、eoso和eDs6。4利用小鼠对鸡卵清血蛋白(OVA)抗原特异性MHCH类分子限制性的T细胞杂交瘤，检测上述叁组DC的抗原提呈功能。5同种混合淋巴细胞反应(allo--MLR)以检测DC对同种T淋巴细胞的增殖能力。6 DC培养结束前，收集培养上清，按ELISA试剂盒说明检测DC分泌的IL一12的水平;并在MLR加入:、H一TdR前，收集培养上清，按ELIsA试剂盒说明分别检测IFN一丫、IL一2、IL一4和IL一10等Thl/ThZ细胞因子水平。断艺七，悦月卜祠叹士拳位论文7免疫印迹法(Western blot)检测DC核内NF一K B p50蛋白表达水平。〔结果〕培养6天后可以得到具有典型树突状结构的未成熟DC，对照组DC比MPAO.01组DC和MPAO.1组DC具有更多更粗大的树突状和膜面状伪足。2与对照组相比，处理组DC的CD40、CD80和CD86分子表达均明显下调，而MPA对MHCn类分子的表达没有明显影响。3 MPA以剂量依赖方式抑制DC的抗原提呈功能，MPAO.01组、MPAO.l组和对照组比较，P均(0.05。4随着DC与T细胞比例上升，对照组、MPAO.01组和MPAO.l组DC刺激T淋巴细胞增殖的能力逐渐增强，并且MPAO.ol组、MPAO.1组和对照组比较，P均<0 .05。5 DC培养结束前，收集培养上清检测工L一12水平，对照组的小鼠DC能够分泌相当水平的IL一12(437.89士1 7.99 pg/ml)，而MPAO.01组和MPAO.1组分泌IL一12的水平明显降低，分别为392.33士25.79 pg/ml和228.64士17.99 pg/ml(p<0.05)。6在all。一MLR加入:IH一TdR前，收集培养上清分别检测IL一2、工FN一、工L一4和IL一10等Thl/ThZ细胞因子水平，结果IL一2和IFN一Y水平显着上升，而工L一4和IL一10水平显着下降，各组两两比较，P均<0 .05。7 MPA可以抑制了DC核内NF一KBp50表达水平，并且这一作用随着MPA剂量的增加而增强。浙东匕，气月卜月叹侧七拳位论文[小结]用小鼠骨髓的造血干细胞能够诱导出了大量DC，并从形态学、表型和刺激同种细胞增殖功能等方面证实。在DC培养液中加入MPA，可以得到表型和免疫学功能均相当稳定的未成熟DC。我们发现MPA处理的DC比对照组表达更低水平的共刺激分子一CD4O、CDSO和CD86，由于这些共刺激分子也是DC成熟的标志，提示MPA处理后可阻止DC的进一步成熟。M以处理的DC和对照组相比其抗原呈递功能和T细胞刺激增殖能力显着下降，从而不能有效地活化抗原特异性T细胞，使T细胞处于无能状态。MPA处理的DC分泌比一12功能也显着减弱。IL一12是DC成熟过程中分泌的一种细胞因子，它能够促进Tho细胞分化为Thl细胞，从而诱导Thl型细胞介导的免疫反应。MPA处理的DC显着提高了ThZ细胞因子IL一4和工L一10水平，而显着降低了Thl细胞因子IFN守和工L一2水平。表明在体外，M以处理的DC能诱导同种T细胞向ThZ分化，从而有利于产生同种抗原特异性T细胞的无能。体外培养的DC加入MPA可以下调DC核内NF一K B p50表达水平，并且这一作用随着MPA剂量的增加而增强。MPA对DC体外成
蔡真, 黄文烨, 孙文佶, 陆国华[2]2004年在《霉酚酸对小鼠树突状细胞免疫学功能和核因子-κB的影响》文中进行了进一步梳理目的:霉酚酸酯(mycophenolate mofetil,MMF)是一种新型免疫抑制剂,目前已被临床上广泛应用于异基因骨髓移植,可明显减少急慢性移植物抗宿主病(graft versus host disease,GVHD)的发生率和严重程度,从而提高异基因骨髓移植的成功率。霉酚酸(mycophenolate acid,MPA)是霉酚酸酯在体内的代谢活性成分。核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)是一种重要的核转录因子,在调节DC活化中起到重要的作用,我们设想MPA可能通过影响DC的NF-κB活性,进而影响DC的一系列免疫学功能。所以,我们观察了霉酚酸对小鼠树突状细胞(dendritic cell,DC)免疫学功能以及对其NF-κB p50表达水平的影响,并进一步探讨MPA/MMF防治GVHD免疫抑制作用的机理。方法:参考Inaba方法并稍加改进来体外培养小鼠骨髓来源的DC,实验分3组,一组为对照组,即培养时仅加入GM-CSF 10ng/ml,IL-4 1ng/ml:二组为MPA0.01组,即除了上述细胞因子外加入0.01μmol/L的MPA溶液处理;叁组为MPA 0.1组,即除了上述细胞因子外加入0.1μmol/L的MPA溶液处理。用流式细胞仪检测小鼠DC细胞表面表型,加入荧光标记的单克隆抗体分别为Iab、CD40、CD80和CD86。利用小鼠对鸡卵清血蛋白(OVA)抗原特异性MHCⅡ类分子限制性的T细胞杂交瘤,检测上述叁组DC的抗原提呈功能。同种混合淋巴细胞反应(allo-MLR)以检测DC对同种T淋巴细胞的增殖能力。免疫印迹法(Western blot)检测DC核内NF-κBp50蛋白表达水平。结果:培养6天后可以得到具有典型树突状结构的未成熟DC,对照组DC比MPA 0.01组DC和MPA 0.1组DC具有更多更租大的树突状和膜面状伪足。与对照组相比,处理组DC的CD40、CD80和CD86分子表达均明显下调,而MPA对MHC Ⅱ类分子的表达没有明显影响。MPA以剂量依赖方式抑制DC的抗原提呈功能,MPA 0.01组、MPA0.1组和对照组比较,P均<0.05。随着DC与T细胞比例上升,对照组、MPA0.01组和MPA 0.1组DC刺激T淋巴细胞增殖的能力逐渐增强,并且MPA0.01组、MPA0.1组和对照组比较,P均<0.05。MPA可以抑制了DC核内NF-κBp50表达水平,并且这一作用随着MPA剂量的增加而增强。结论:用小鼠骨髓的造血干细胞能够诱导出了大量DC,并从形态学、表型和刺激同种T细胞增殖功能等方面证实。MPA处理的DC和对照组相比其抗原呈递功能和T细胞刺激增殖能力显着下降,从而不能有效地活化抗原特异性T细胞,使T细胞处于无能状态。体外培养的DC加入MPA可以下调DC核内NF-κBp50表达水平,并且这一作用随着MPA剂量的增加而增强。所以,MPA对DC体外成熟和免疫学功能起负性调节作用,其机制可能与NF—κB活性受到抑制有关。
黄文烨, 蔡真, 孙文佶, 陆国华[3]2004年在《霉酚酸对小鼠树突状细胞体外成熟和免疫功能的影响》文中进行了进一步梳理霉酚酸酯 (mycophenolatemofetil,MMF)是一种新型免疫抑制剂 ,目前已被临床上广泛应用于异基因骨髓移植。本研究的目的是观察其免疫活性成分霉酚酸 (mycophenolicacid ,MPA)对小鼠树突状细胞 (dendriticcell,DC)体外成熟和免疫学功能的影响 ,以期进一步探讨MPA防治移植物抗宿主病 (graftversushostdisease,GVHD)免疫抑制作用的机理。在小鼠DC体外培养时加入两种剂量 ( 0 .0 1μmol/L和 0 .1μmol/L)的MPA处理 ,观察DC的生成情况 ,以流式细胞仪分析各处理组细胞的免疫表型 ,以3 H TdR掺入值来反映DC的抗原呈递功能 ,并作体外混合淋巴细胞反应观察其对同种T细胞的刺激增殖能力 ,用ELISA方法测定其分泌的IL 12水平及与同种T细胞共同培养时IL 2 ,IFN γ ,IL 4和IL 10等细胞因子水平。结果表明 :经MPA培养后 ,DC的生成和形态没有影响 ,表达低水平的共刺激分子CD4 0 ,CD80和CD86 ,其分泌的IL 12水平明显下降 ,DC的抗原呈递功能和刺激同种T细胞的功能显着下降 ,并促使T细胞分泌的Th1细胞因子IL 2和IFN γ下降 ,而Th2细胞因子IL 4 ,IL 10上升。结论 :霉酚酸能使小鼠骨髓来源的树突状细胞停留在未成熟状态 ,对其免疫学功能起负性调节作用 ,并促使Th1细胞因子向Th2细胞因子转移
黄文烨, 蔡真, 陆国华, 孙文佶[4]2007年在《霉酚酸对小鼠树突状细胞免疫学功能和NF-κB的影响》文中进行了进一步梳理目的探讨霉酚酸酯(mycophenolate mofetil,MMF)的免疫活性成分霉酚酸(mycophenolate acid,MPA)对小鼠树突状细胞(dendritic cell,DC)免疫学功能以及对其NF-κBp50表达水平的影响。方法在小鼠DC体外培养时加入不同浓度(0.01μmol/L和0.1μmol/L)的MPA,以[3H]-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入值来反映DC的抗原提呈功能,作体外混合淋巴细胞反应(MLR)观察DC对同种T细胞的刺激增殖能力的影响;免疫印迹法(Western blot)检测DC核内NF-κBp50表达水平。结果经MPA处理后,DC的抗原提呈功能和刺激同种T细胞的功能显着下降(均P<0.05);MPA下调了DC核内NF-κBp50表达水平,并且这一作用随着MPA剂量的增加而增强(均P<0.05)。结论MPA对小鼠骨髓来源的DC免疫学功能起负性调节作用,其机制可能与NF-κB活性受到抑制有关。
参考文献：
[1]. 霉酚酸对小鼠树突状细胞体外成熟和免疫学功能的影响[D]. 黄文烨. 浙江大学. 2004
[2]. 霉酚酸对小鼠树突状细胞免疫学功能和核因子-κB的影响[C]. 蔡真, 黄文烨, 孙文佶, 陆国华. 浙江省免疫学会第五次学术研讨会论文汇编. 2004
[3]. 霉酚酸对小鼠树突状细胞体外成熟和免疫功能的影响[J]. 黄文烨, 蔡真, 孙文佶, 陆国华. 中国实验血液学杂志. 2004
[4]. 霉酚酸对小鼠树突状细胞免疫学功能和NF-κB的影响[J]. 黄文烨, 蔡真, 陆国华, 孙文佶. 浙江医学. 2007