刘佳[1]2004年在《对酒精性肝损伤有保护作用的功能性食品的初步研究》文中研究指明适量饮酒对人体有广泛的药理作用,但过量饮酒会造成机体损伤,尤其对胃肠、肝脏的损伤更为明显,如胃炎、胃溃疡以及酒精肝病。大量的酒精可破坏肝细胞,产生不同的病变-酒精性脂肪肝、酒精性肝炎和酒精性肝纤维化及肝硬化。酒精性肝病是一种累积性慢性病,至今该病尚无特效疗法。本课题以“食疗”理论为指导,根据功能性食品以调节机体、预防疾病的特点,保护肝脏角度出发,以“药食同源”理论结合现代医学理论为基础,得到酒精性肝损伤的护肝功能性食品成分,经过有效成分的提取,以Wistar大鼠为实验对象,观察成分对酒精性肝损伤动物模型的保护作用,进行功能性食品成分的功效性研究,以探讨其预防酒精性肝病中的作用机理。课题研究结果表明:通过以中医药食同源理论和脾胃论为指导思想,结合现代医学理论,得到功能性食品配方,葛根花:茯苓:SLG:枳椇子其比为6:2:6:3,协调因子为10%(上述成分均属于食品范畴)。然后根据实验要求采用微波法设计正交实验提取配方有效的功能成分。以配方中总黄酮的得率、总糖得率和浸膏得率为考察指标,结合标准化处理法,根据叁个指标在提取工艺中的主次,加权得到综合指标Y为目标函数,优选最佳工艺参数为pH值11.0,固液比1:15,提取时间10min,微波功率500瓦。并根据该工艺提取配方,得到有效成分为黄酮0.52%,多糖8.59%,并配以10%的协调因子,得到总配方。通过灌胃法复制动物酒精性肝损伤模型,对所提取的有效成分进行动物功效实验。该模型较Tsukamoto-French等其他模型经济、周期短,能满足实验研究要求。配方动物功效实验结果表明,配方提取物具有明显的护肝效果。配方组动物肝脏的甘油叁酯含量、脂质过氧化产物丙二醛均明显低于病理组,与正常组相比,无显着性差异(P>0.05);过量饮酒,会导致乙醇脱氢酶(ADH)活性下降,从而大大削弱肝脏对酒精的代谢能力,损伤肝细胞。配方提取物能够维持ADH的活性,病理组ADH活性为325.51U/L,配方组活性保持在491.57U/L,配方组能够加强肝细胞活性,有效地保护肝脏免受损害。
刘红微[2]2012年在《土庄绣线菊水浸液的保健功能研究》文中研究指明土庄绣线菊是一种分布广泛的野生灌木植物,通过动物试验,初步了解到土庄绣线菊植物水浸液对小鼠有抗疲劳、抗氧化作用,对小鼠高血糖、高血脂有治疗作用,对酒精引起的小鼠急性肝损伤有保护作用,为今后土庄绣线菊植物的进一步开发利用提供了理论基础。主要结论如下：1、抗疲劳试验,灌胃土庄绣线菊植物水浸液20d后,小鼠的力竭游泳时间延长(P<0.05),游泳后LD含量有所降低,BUN含量得到维持,LG、MG含量高于空白对照(P<0.05),说明土庄绣线菊植物水浸液具有抗疲劳作用。2、抗氧化试验,小鼠灌胃土庄绣线菊植物水浸液30d,高、中、低剂量组提高了CAT活性(P<0.05)；中、低剂量组提高了SOD活性(P<0.05)；高、中剂量.组提高了GSH-Px活性(P<0.05),说明土庄绣线菊植物水浸液具有一定的抗氧化作用。3、降血糖试验,糖尿病小鼠灌胃土庄绣线菊植物水浸液20d,试验组血糖、BUN水平得到控制；中、低剂量组比高剂量组有更好的降低Cr含量的作用,说明土庄绣线菊植物水浸液对小鼠糖尿病有积极作用。4、降血脂试验,高血脂小鼠灌胃土庄绣线菊植物水浸液20d,小鼠血清中TG、TC、LDL-c含量降低,说明土庄绣线菊植物水浸液能够改善小鼠高血脂。5、护肝试验,小鼠灌胃土庄绣线菊植物水浸液30d,小鼠血清中酒精性肝损伤引起的AST和ALT活性明显降低,肝脏中GSH含量得到保持和MDA含量明显降低,说明土庄绣线菊植物水浸液对乙醇所致肝损伤具有保护作用。
向进乐[3]2012年在《枳椇果梗发酵特性及其果醋功能性研究》文中研究指明枳椇是一种野生或半野生树种，我国大部分地区均有分布，有很高的利用价值。枳椇果梗是枳椇果实的主要组成部分，但是对于枳椇果实的开发研究主要集中在其种子——枳椇子。由于外形扭曲、个体小、残渣多、不耐贮藏、加工适应性差等，枳椇果梗未能得到合理开发和利用，相关的研究报道也较少。枳椇果梗的含糖量极高，其它营养成分也非常丰富，是很好的天然可食资源。食品发酵对原料外形、大小等没有特殊要求，枳椇果梗经微生物发酵酿造果醋，可以充分利用原料中的营养组分，尤其是高糖的特点。采用微生物发酵法加工利用枳椇果梗能达到扬长避短的效果。本文对枳椇果梗原料中多酚含量和性质、有机酸组成分析方法进行研究，对枳椇果梗果醋发酵过程动态变化进行系统研究，并对酿制的果醋预防高脂饮食引起的肥胖、高脂血症以及慢性酒精肝损伤功能特性进行评价。主要研究内容和结果如下：（1）采用Folin-Ciocalteu比色法测定枳椇果梗总酚含量。优化确定了适宜的测定条件：枳椇果梗提取液0-1.0mL加Folin-Ciocalteu试剂0.6mL、20%的Na_2CO_3溶液1.5mL，加水定容至10mL，30℃避光反应60min后在750nm处测定吸光值。方法学评价结果表明，该法能用于枳椇果梗及其加工制品总酚含量测定。（2）通过有机溶剂萃取将枳椇果梗不同极性多酚分离，采用清除DPPH·、ABTS+自由基以及总还原能力体系对不同极性多酚萃取物体外抗氧化能力进行评价。枳椇果梗不同极性萃取物总酚含量、抗氧化能力有显着差异；极性越大，多酚含量越高、抗氧化能力越强。枳椇果梗不同极性多酚萃取物抗氧化能力与其总酚含量极显着相关，而可能与多酚极性无关。（3）通过酸碱水解，有机溶剂萃取的方法分离制备枳椇果梗不同类型酚酸。枳椇果梗游离酚酸占粗提物总酚11.5%；酯型酚酸占12.3%；糖苷型酚酸占10.5%。除含有较高的可溶性多酚，不溶性结合型酚酸含量也很高，不溶性结合型酚酸与可溶性总酚酸的比值约为1：2。枳椇果梗不同类型酚酸体外抗氧化能力与其多酚含量显着相关。（4）采用离子抑制反相高效液相色谱法测定枳椇果梗及其发酵果酒、果醋中的有机酸，优化确定了色谱条件，色谱柱：Wondasil C_(18)（4.6×250mm ID，5μm）；流动相：0.01mol/L KH_2PO_4-H_3PO_4缓冲溶液，pH2.8；流速：0.7ml/min；柱温：25℃；双波长紫外检测器检测波长：210nm（L-抗坏血酸243nm）。建立的检测方法能满足枳椇果梗及其液态发酵制品有机酸组成和含量分析。通过定性和定量分析，枳椇果梗中共检出7种有机酸，分别是草酸、酒石酸、苹果酸、抗坏血酸、醋酸、富马酸、琥珀酸；以酒石酸和苹果酸为主，占其总有机酸含量的94.92%。发酵果酒和果醋中分别检出9种有机酸，果酒中以酒石酸和乳酸为主，占其总有机酸86.52%。果醋以醋酸和酒石酸为主，占92.39%。。酒石酸是枳椇果梗及其液态发酵制品中的特征有机酸。（5）对枳椇果梗酿造果醋的发酵方法和工艺条件进行研究，确定了果醋发酵的合理方式和工艺参数。酒精发酵采用带皮渣发酵方式，加水1.5倍，发酵温度16℃，发酵时间80h。醋酸发酵采用液态深层发酵法，发酵温度34℃，第一轮发酵72h左右；分割留种发酵30h。枳椇果梗果醋酿造过程中，各种有机酸在发酵过程中不断进行转化、积累与代谢。酒精发酵阶段中最显着的特点是由于苹果-乳酸发酵，乳酸大量积累，最高达8937.09mg/L；苹果酸含量显着降低至419.13mg/L。而醋酸发酵阶段最明显的特点是由于醋酸菌代谢酒精而使醋酸含量不断上升，含量最高可达37592.77mg/L，而其它大部分有机酸经醋酸发酵而减少。酿造过程中发酵液抗氧化能力也因相关抗氧化组分的变化而不断变化。枳椇果梗发酵酒酪体外抗氧化能力较发酵前显着提高，可能与发酵液总酚和维生素C含量显着升高有关。液态深层醋酸发酵发酵快，发酵液总酚下降12.7%，抗坏血酸下降31%，抗氧化能力也显着降低。发酵液抗氧化能力与总酚含量、维生素C含量均有显着相关性，说明多酚和维生素C是枳椇果梗液态发酵制品的主要抗氧化成分。（6）对枳椇果梗果醋预防饮食型肥胖、高脂血症以及保护慢性酒精肝损伤功能进行研究。研究结果显示，枳椇果梗果醋能显着抑制高脂饮食小鼠体重增加、脂肪积累、血清甘油叁酯（TG）和总胆固醇（TC）升高；能显着降低高脂、高胆盐饮食小鼠血清TC和TG，显着升高血清高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）含量，降低动脉硬化指数（AI）。说明枳椇果梗果醋能预防高脂饮食型肥胖和高脂血症，对动脉粥样硬化有一定的预防效果。枳椇果梗果汁和果醋能显着降低慢性酒精中毒小鼠血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）和γ-谷氨酰转肽酶（γ-GT）活性，降低血清和肝组织中TG和TC含量以及肝脏脂质过氧化（LPO），同时能保护小鼠肝组织抗氧化酶系统。肝组织病理检查也显示，枳椇果梗果汁和果醋对慢性酒精肝损伤具有显着的预防效果，作用机制可能与抑制机体脂质过氧化，提高肝脏抗氧化酶和非酶抗氧化能力有关。
李培培[4]2010年在《杨梅黄酮对酒精性肝氧化损伤的保护作用及其机制研究》文中研究说明近20年来,评价和筛选具有强抗氧化活性的天然资源已成为生物医药、食品科学等领域研究的新趋势。杨梅作为我国特产水果,因其营养价值极高,口感好,还含有多种对人体有生物活性的物质,如槲皮素、杨梅素等黄酮类化合物而深受海内外广大消费者的青睐。随着全球酒精消费量快速上升,各种与酒精相关的疾病增加,酒精性肝损伤成为全世界共同关注的健康问题,自由基是造成肝损伤的一个主要因素,筛选保肝药物具有十分重要的现实意义。本实验以杨梅为材料,对不同品种杨梅果实中黄酮类化合物的结构、含量和抗氧化活性进行了一系列研究,并通过建立亚急性小鼠肝损伤模型,探究了杨梅黄酮提取物对酒精诱导小鼠肝损伤的保护机制。主要研究结果如下：对“荸荠”、“水晶1”、“粉红”3种杨梅提取物进行了液质分析,发现主要黄酮类化合物有杨梅素、莰菲醇葡萄糖(或半乳糖)苷、杨梅素鼠李糖苷、杨梅素葡萄糖(或半乳糖)、槲皮素鼠李糖苷等；通过高效液相和比色法分析,“荸荠”种杨梅苷、杨梅苷与杨梅素含量之和及总黄酮含量略高。采用不同体系研究了不同品种杨梅黄酮粗提物对自由基的清除作用及抗脂质过氧化的效果,结果表明“荸荠”种清除自由基的能力最强,抗脂质过氧化效果最明显。通过化学发光法进一步研究了杨梅黄酮粗提物与黄酮对照品的抗氧化活性,结果表明,芦丁的抗氧化活性最佳,“荸荠”种杨梅黄酮粗提物的抗氧化活性高于其他品种,杨梅果实的抗氧化活性能力与其黄酮的含量成剂量效应关系。采用酒精灌胃法制造亚急性小鼠肝损伤模型,并选用抗氧化活性最好的“荸荠”种杨梅黄酮提取物作为干预物,以葵花牌护肝片作为阳性对照药物,采用试剂盒以及组织病理观察等手段,探讨了亚急性酒精暴露及杨梅黄酮干预对小鼠肝脏组织切片、小鼠血清、肝匀浆组织、肝线粒体、肝微粒体抗氧化系统及血清脂质水平的影响：1)肝脏组织切片观察结果：正常组肝小叶结构清晰,细胞索排列整齐,肝细胞无明显病变；模型组肝正常结构消失,小叶界限不清,细胞索紊乱,大部分肝细胞呈中到重度水肿；杨梅黄酮治疗组小叶结构清晰,细胞索排列整齐,肝细胞仅有轻度浊肿或胞浆疏松。2)对小鼠血清的影响：与模型组比较,经酒精诱导的亚急性肝损伤小鼠预先摄入杨梅黄酮中(100mg/kg.bw/d)、高剂量(200mg/kg.bw/d)后,其血清的AKP(P<0.01)、AST (P<0.01)、ALT (P<0.05)活性显着降低,杨梅黄酮低剂量组(50mg/kg.bw/d)小鼠血清的AKP活性显着降低(P<0.01),但AST、ALT活性无统计学意义；低、中、高剂量组明均降低了小鼠血清中TG、TC、L-DLC的含量,提高了H-DLC的含量,随着杨梅黄酮低、中、高剂量浓度的逐渐加大,其保肝作用呈增强趋势。3)对小鼠肝匀浆各指标的影响：经酒精诱导的亚急性肝损伤小鼠预先摄入杨梅黄酮中、高剂量后,其肝匀浆的ADH、GSH-Px、GST、GSH、SOD、CAT活性水平较模型组显着提高(P<0.01),低剂量组无统计学意义。高剂量组中MDA、NO、NOS的含量明显降低(P<0.01),而低剂量组无统计学意义。4)对小鼠线粒体各指标的影响：与正常组比较,模型组小鼠肝线粒体T-SOD、GST、CAT、GSH-Px水平均极为显着(P<0.01),预先摄入高剂量的杨梅黄酮及护肝片后,抗氧化酶T-SOD、GST、CAT、GSH-Px活性水平较酒精模型组得到明显改善,统计学意义极显着(P<0.01)；且随着杨梅黄酮低、中、高剂量浓度的逐渐加大,其保肝作用呈增强趋势。5)对小鼠微粒体各指标的影响：与正常组比较,模型组小鼠肝脏微粒体GSH水平急剧下降(P<0.01),而MDA急速升高(P<0.01)。肝脏抗氧化酶GST、POD活性降低、GSH水平下降。较模型组而言,预先摄入高剂量的杨梅黄酮后MDA含量显着降低,为4.81±0.52nmol/mgprot (P<0.01), GSH、GST、POD活性显着升高,分别为5.53±0.42mg/gprot (P<0.01),63.18±7.48U/mgprot (P<0.01),2.90±0.22 U/mgprot (P<0.01);黄酮中剂量组MDA、GSH、GST的值有显着性统计学差异(P<0.01),POD有较显着性差异(P<0.05)；低剂量组MDA、GSH、GST的也有较显着性差异(P<0.05),其POD活性无统计学意义。
杨梅[5]2016年在《新型乐陵金丝小枣原汁的活性成分分析及抗氧化和保肝作用的研究》文中研究说明随着食品工业的发展和消费水平的不断提高,人们越来越注重强身健体,改善饮食习惯,提高生活质量。保健食品以其天然性、食效性等特点,成为人们日益关注的焦点。枣树以其抗旱耐贫瘠、枣果丰产、枣果营养成分丰富、经济效益和生态效益显着等特点,在我国农业经济中占有十分重要的地位。枣果中营养成分极其丰富,主要包括糖、蛋白质、氨基酸、脂肪酸、环核苷酸、叁萜及皂苷类、黄酮类、多酚类、生物碱、矿质元素、维生素及其他活性物质。这些物质使其具有养血安神、增强免疫力、抗衰老等多种功效。其中,酚酸类化合物因具有良好的抗氧化活性,成为近年来食品科学和生物医学研究的热点。另外,大枣药理实验研究证实,枣果在抑制癌细胞增殖、降血压、降胆固醇、保护肝脏、抗变态反应等方面,有明显的疗效。因此其高端功能食品和药品开发利用近几年受到了国内外的广泛关注。随着现代社会人们生活方式的改变和酒精性饮料消费的增加,酒精性肝病(alcoholic liver disease, ALD)的发病率呈逐年上升趋势,成为仅次于病毒性肝炎的第二大肝病。肝脏是酒精代谢的主要器官,酒精在体内代谢式会产生活性氧(ROS)和乙醛,消耗谷胱甘肽(GSH)并引起肝脏内的氧化应激反应,这被认为是酒精性肝损伤的主要病理机制。因此,寻找具有抗氧化作用的功能性食品有望能够用于酒精性肝损伤的辅助性防治。山东省德州地区是乐陵金丝小枣的发祥地,乐陵金丝小枣栽培历史悠久,风味甘美,营养丰富,不仅在古代是每年进贡朝廷的贡品,现今也因品质良好深受喜爱而销往世界各地,是山东省最有名的叁大果品之一(其他两种分别是肥城佛桃和莱阳茌梨)。为了深入挖掘乐陵金丝小枣的食用和药用价值,本研究选用了产于乐陵市的新型金德润牌乐陵金丝小枣原汁作为分析对象,对其进行了主要生物活性成分的分析以及抗氧化和保肝作用的研究,以期为金丝小枣中高端产品的开发提供生物成分物质基础、以及抗氧化活性和酒精性肝病防治方面的理论指导。本课题采用了HPLC-RID法对乐陵金丝小枣原汁中游离单糖进行了测定分析；采用HPLC-UV法测定了枣汁中环核苷酸、芦丁的含量；采用紫外分光光度法测定了枣汁中总黄酮、总酚、多糖的含量；氨基酸自动分析仪法和原子吸收光谱法分别用于检测氨基酸和矿质元素含量。此外,利用HPLC-UV法和HPLC-MS法对枣汁中含有的酚酸类成分进行了分析,并采用DPPH法、ABTS法、ORAC法和FRAP法对金丝小枣原汁中所含有的酚酸类化合物及枣汁样品进行了抗氧化性能的评价。最后,采用动物实验法对该金丝小枣原汁的保肝作用进行了研究。结果表明乐陵金丝小枣原汁中蔗糖、葡萄糖、果糖和多糖平均含量分别为3.9.27.3.32.5和3.6 mg/mL；氨基酸总量平均值为269.7μg/mL；矿物质Ca、Fe、Mg、Zn、Mn、Cr、Cu的平均含量分别为35.1、0.85、55.8、0.85、0.44、0.41.0.21μg/mL；总酚(以没食子酸计)、总黄酮(以芦丁计)、芦丁、环磷酸腺苷(cAMP)口环磷酸鸟苷(cGMP)平均含量分别为1.34、157.3、7.15、19.2和8.11μg/mL。该金丝小枣原汁中至少含有原儿茶酸、儿茶酚、对羟基苯甲酸、香草酸和对香豆酸五种酚酸化合物,这五种酚酸类化合物和金丝小枣原汁均表现出良好的抗氧化活性。此外动物实验结果显示,金丝小枣原汁能够显着降低p<0.05)酒精诱导肝损伤模型组小鼠的肝指数、血清AST、ALT和LDH舌性以及胆固醇(TC)和甘油叁酯(TG)水平；相较于模型组,给予金丝小枣原汁的小鼠MDA浓度显着降低(p<0.05)并且SOD和GSH-Px活性增强(p<0.05)。与此同时,对小鼠肝脏病理学研究结果也证明了金丝小枣原汁对于酒精性肝损伤有定的防治作用。综上所述,该乐陵金丝小枣原汁含有丰富的抗氧化物质和其他生物活性成分,表现出良好的抗氧化活性和对酒精性肝损伤的防治作用。
黄杰秋[6]2017年在《苏麻油中α-亚麻酸的分离纯化与护肝功能研究》文中研究指明苏麻是传统的药食同源植物,富含多种营养物质。贵州苏麻种质资源丰富,种植广泛。研究发现,贵州苏麻籽实的油脂含量为30%左右,其中α-亚麻酸(ALA)的含量高达60%左右。ALA的缺乏是老年痴呆、癌症、心脑血管疾病、高血压、高血脂和糖尿病等疾病发生的重要诱因。最近研究表明:ALA以及其长链代谢物,可能在许多生理活动中起着重要的作用,如益智、保护视力、降血脂、降血压、抗血栓形成、延缓衰老、抗过敏及抑制癌症的发生和转移等作用。本文用两种不同方法对苏麻籽油中ALA进行分离纯化,并初步探索了ALA的护肝作用,主要研究结论如下:以单因素实验方式考量蒸馏温度、预热温度、转数、进料速率四个因素对分子蒸馏纯化效果的影响,并在此基础上进行响应面优化实验。响应面最佳工艺条件为:蒸馏温度100℃、预热温度70℃、转数235 r/min,进料速率0.9 mL/min,此时重组分收集瓶中ALA纯度为83.01%。为得到高品质、高纯度的ALA,又进行了以控制蒸馏温度为主的多级蒸馏试验,经过4级蒸馏,将产品中ALA纯度提高到86.04%。通过超声波辅助HP-β-CD包合的方法来对贵州苏麻油中ALA进行分离纯化,考虑超声的功率、超声时间和料水比(无水乙醇+FFA与HP-β-CD溶液的比值)叁个因素对ALA纯度的影响,并在此单因素基础上进行响应面优化设计。结果表明,最佳提取工艺为超声功率250 W,料液比1:7.5、提取时间21 min,此条件下ALA的纯度为87.11%。进行动物实验,连续灌胃小鼠一个月酒精和分子蒸馏工艺提取的不同纯度的ALA,分析小鼠血清中载脂蛋白、抗炎免疫因子和肝脏中抗氧化酶的相关指标。结果表明,ALA的干预显着降低血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、碱性磷酸酶(AKP)和总胆红素水平,能有效促进载脂蛋白的合成分泌,抑制肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素(IL-6)和NO的释放,提高SOD和GSH活力。86%左右的ALA解酒保肝效果最佳,其作用机制为防止甘油叁酯和胆固醇代谢紊乱,抗炎、抗氧化途径。用不同纯度的ALA灌胃小鼠10天,之后再单次静脉注射刀豆蛋白A。通过测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)和肿瘤坏死因子(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)和IL-6水平监测肝损伤。测定肝组织中MDA、SOD、GSH、MPO等水平判断ALA对刀豆蛋白A引起免疫肝损伤小鼠的保护作用,并探索其药理作用机制。研究表明,ALA对小鼠ConA诱导的肝损伤有保护作用,作用机制是减少促炎细胞因子,恢复氧化还原平衡,从而减少肝细胞和组织损伤的信号。通过分子蒸馏技术和超声波辅助羟丙基-β-环糊精包合法对苏麻油中ALA进行分离纯化,探索出了两种提纯苏麻油中ALA的新方法。再用分子蒸馏方法提纯的不同纯度ALA来探索其对酒精肝损伤、刀豆蛋白A肝损伤小鼠的保护作用,发现ALA(尤其是高纯度)在解酒保肝和预防免疫肝损伤上具有很大潜力。
王雪[7]2015年在《蛹虫草基质多糖的提取及对酒精所致肝损伤的保护作用》文中研究表明虫草多糖是蛹虫草重要的生物活性物质,研究发现虫草多糖具有许多生理功能,如抗氧化性、抗肿瘤、提高免疫力、降血脂和保肝等。本研究以蛹虫草废基质为原料,不同提取方法提取了蛹虫草基质多糖,并探讨了不同提取方法对蛹虫草基质多糖的得率、黏度以及体外抗氧化活性的影响,同时较全面的比较各种方法的优缺点,并对其急性、亚急性酒精性肝损伤预防效果进行研究,本研究有利于提升蛹虫草基质多糖的附加值,为蛹虫草基质多糖作为抗氧化和保肝功能的产品提供理论支撑。以废弃的蛹虫草培养基基质为原料,利用水提法、酶解法、超声波法、超声波-酶法、微波法和微波-酶法来提取蛹虫草基质多糖,研究不同提取方法下蛹虫草基质多糖得率、多糖黏度及多糖抗氧化活性的区别来比较六种提取工艺的优缺点。结果表明：超声波-酶法所得蛹虫草基质多糖的得率最高,达30.27%,水提法最差,为10.69%。不同提取方法所得的多糖溶液黏度均随多糖溶液浓度的增大而增大,在相同浓度下多糖溶液的表观黏度大小依次为水提法>微波法>酶法>微波-酶法>超声波法>超声波-酶法。超声波-酶法提取的蛹虫草基质多糖体外抗氧化活性最好,而水提法的多糖抗氧化活性最差。通过建立急性酒精性肝损伤动物模型,系统探讨了超声波-酶法提取的蛹虫草基质多糖(CMSP)对小鼠急性酒精性肝损伤的影响。将小鼠随机分为空白对照组、模型组、阳性对照组(150mg/(kg·d))、CMSP各剂量组(150、300、600mg/(kg·d)),连续灌胃30d,除空白对照组外,给予体积分数50%的乙醇溶液建立小鼠急性肝损伤模型。12h后,小鼠脱臼处死后取血液测定血浆中甘油叁酯(triglyceride, TG)含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)和谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)活性,取肝脏、胸腺和脾脏计算其系数,并制备肝匀浆测定其中谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-PX)活力、超氧化物歧化酶(SOD)活力、还原型谷胱甘肽(glutathione transferase,GSH)和丙二醛(]malondialdehyde,MDA)的含量,并观察肝组织病理学变化。结果CMSP各剂量组肝脏系数、胸腺系数、脾脏系数、血浆中SOD活力、TG含量、AST、ALT活性及肝组织中SOD活力、GSH-PX活力、GSH、MDA含量与模型组各水平相比均具有显着性差异(P<0.05或P<0.01)。结论蛹虫草基质多糖对酒精诱导的小鼠急性肝损伤有明显的保护作用。此外,我们进一步研究了蛹虫草基质多糖对亚急性酒精性肝损伤的作用。小鼠被随机分为空白对照组、模型组、阳性对照组(150mg/(kg·d))、CMSP各剂量组(150、300、600mg/(kg·d))。除空白对照组外,其余各剂量组在分别灌胃蒸馏水、CMSP及联苯双酯后6h均灌胃30%体积分数的乙醇溶液,连续灌胃28d。处死所有小鼠,测定血浆中葡萄糖(glucose, GLU)含量、总胆红素(total bilirubin, TBIL)含量、谷丙转氨酶(ALT)活性、谷草转氨酶(AST)活性、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)活性、甘油叁酯(TG)含量、总胆固醇(total cholesterol, CHOL)含量以及乳酸脱氢酶(lactic acid dehydrogenase, LDH)活性,取肝脏计算其指数,并制备肝匀浆测定其中乙醇脱氢酶(alcohol dehydrogenase, ADH)活力、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力、丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)的含量,并观察肝组织病理学变化。结果CMSP各剂量组肝脏系数、血浆中GLU、TBIL、TG、CHOL含量、ALT、AST、ALP、LDH活性及肝组织中ADH、GSH-PX活力、MDA、GSH含量与模型组各水平相比均具有显着性差异(P<0.05或P<0.01)。结论蛹虫草基质多糖对酒精诱导的小鼠亚急性肝损伤有明显的保护作用。
郭永月[8]2013年在《黑牛肝菌多糖对小鼠酒精性肝损伤的保护作用研究》文中指出黑牛肝茵(Boletus aereus)学名枣铜色牛肝菌,属于牛肝菌科,牛肝菌属。其通体呈黑色,味道鲜美,在我国四川、云南、贵州等地广泛分布,在欧洲、非洲等地也有分布,是一种世界性珍稀食用菌。黑牛肝菌子实体营养价值较高,含有丰富的矿质元素、维生素、活性多糖、多种人体必需氨基酸。研究表明,该菌提取物具有抗病毒、抗癌及增强人体免疫力的功效,可改善高血压高血脂高血糖症状。黑牛肝菌在医药和食品保健领域表现出极大的开发潜力。本试验拟从如下叁个方面探讨黑牛肝菌对酒精诱导的急性肝损伤的保护作用。1、黑牛肝菌体外清除自由基作用。本试验采用水提醇沉法从黑牛肝菌子实体中提取出黑牛肝菌粗多糖,经Sevag法除蛋白后得到黑牛肝菌精多糖。然后分别测定了粗多糖和精多糖的生物活性物质组成及对·OH、O2-·清除作用和还原力分析。结果表明粗多糖中含有多糖、蛋白质、还原糖、总酚和黄酮,多糖含量为(622.50±1.87)mg/g,蛋白含量为(117.02±0.003)mg/g。精多糖不含黄酮和总酚,多糖含量达到(750.23±0.48)mg/g,蛋白含量只有(21.1±0.005)mg/g。黑牛肝菌精多糖经DEAE-Cellulose52离子交换柱分离纯化后,得到两种组分BAP Ⅰ和BAP Ⅱ对其中含量较多的成分BAP Ⅰ进行紫外扫描,图谱显示其不含核酸和蛋白质。粗多糖和精多糖都有一定的清除自由基的抗氧化作用,精多糖优于粗多糖。2、以黑牛肝菌精多糖(BAP)为试验材料,建立小鼠急性酒精肝损伤模型,进行功能性试验研究及病理切片观察。小鼠被随机分为空白对照组、模型组、阳性对照组(150mg/kg.bw).多糖各剂量组(100.200、400mg/kg.bw)。连续灌胃30d后,给予乙醇溶液建立动物急性肝损伤模型。结果表明,小鼠酒精灌胃后,模型组ALT、AST、 TG、 MDA水平与空白对照组相比显着升高,SOD、CAT、 GSH-Px、GSH水平显着低于空白对照组。说明酒精可造成抗氧化酶活力降低,损伤抗氧化非酶体系,导致膜脂质过氧化物升高。而BAP各剂量组可不同程度改善酒精代谢造成的损伤,降低AST、ALT. MDA水平,不同程度提高SOD、 CAT、GSH-Px活力和GSH含量。病理切片显示,模型组肝小叶中央静脉扩大,肝索排列紊乱,肝细胞明显肿胀,甚至出现肝细胞成片坏死。多糖低剂量组对改善肝细胞病理变化不明显,而中、高剂量组病理症状有较大程度改变。以上结果提示BAP可提高机体抗氧化能力,并能有效降低肝组织的损伤程度,对酒精所致急性肝损伤小鼠有明显的保护作用。3、急性酒精肝损伤小鼠肝组织超微结构的观察和相关凋亡基因Bcl-2、Bax和Caspase-3 mRNA表达。为进一步研究黑牛肝菌多糖(BAP)对酒精所致急性损伤小鼠的保护作用机理,本试验观察了小鼠急性酒精肝损伤肝组织超微结构的变化及采用荧光实时定量RT-PCR法检测了凋亡基因Bcl-2、Bax和Caspase-3 mRNA表达。超微结构表明,模型组视野内见大量脂滴,糖原增多,细胞核变形,核仁固缩,染色质分布异常,线粒体双侧膜破损,内质网核糖体脱落等现象。而在多糖组中,随着多糖剂量的增大,肝细胞内上述病变逐渐改善。模型组Bcl-2基因表达量与其他组对比显着降低,Bax和Caspase-3基因表达量显着升高。而多糖组可不同程度的使Bc1-2、Bax和Caspase-3基因表达恢复至空白对照组水平。急性酒精性肝损伤可造成小鼠肝细胞超微结构的病变,导致Bcl-2基因表达下调,Bax、Caspase-3基因表达上调,促进肝细胞的凋亡,引起肝损伤。黑牛肝菌多糖可以通过调节Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA的表达,对小鼠急性肝损伤起到保护作用。
葛丽[9]2011年在《韭菜四种活性初步研究和体外抗凝血物质分析》文中研究指明韭为百合科葱属多年生草本植物,具有一种特殊而且强烈的韭香气味,其叶子俗称韭菜,为我国特有蔬菜之一,以河北、山西、吉林、江苏、山东、安徽、河南等地产量较大。韭菜被认为有活血化瘀、止血止泻、助肝通络等功效,但是迄今为止,就韭菜在保护酒精致小鼠肝损伤方面,辅助降低高血脂症大鼠血脂方面,改善肾阳虚模型小鼠疲劳方面和体外抗凝血方面进行活性研究没有相关报道。为了证实韭菜是否有这四个功能,本实验应用韭菜粗提液对酒精性肝损伤模型小鼠肝脏,高血脂症模型大鼠血脂,肾阳虚模型小鼠疲劳和体外抗凝血进行研究,验证韭菜是否有这些功能,然后再对韭菜中活性强的功能进行研究,探究出哪类物质或者何种物质在起作用。1、韭菜对大剂量饮酒致小鼠肝损伤(32mL/kg-bw)的实验中,韭菜粗提物灌胃剂量为2.8850g/kg-bw,实验周期为7天。实验周期结束后,发现韭菜粗提物明显改善小鼠肝脏颜色,降低小鼠血清中天冬氨酸转氨基酶(AST)酶活力和丙氨酸转氨基酶(ALT)酶活力；对中等剂量饮酒致小鼠肝损伤(16mL/kg-bw),实验周期结束后发现韭菜对血清和肝脏组织中AST活力和ALT活力都有降低作用,血清中AST活力和ALT活力分别下降了3.00%和3.30%,肝脏组织中AST活力和ALT活力分别下降了4.20%和6.10%。综合大剂量饮酒和中等剂量饮酒对小鼠形成肝损伤结果,韭菜对肝脏具有一定的保护作用。查阅现有的护肝资料,韭菜护肝作用与其他开发出来的护肝片相比护肝作用小,部分指标有作用,起辅助护肝作用,可以与其它护肝食品联合使用,单一使用达不到保健食品的要求。2、韭菜对食用高脂饲料形成高血脂症SD大鼠进行辅助降血脂实验中,韭菜粗提物灌胃剂量为2.8850g/kg-bw,实验周期为30天。实验周期结束后发现韭菜粗提物使大鼠血清中总胆固醇(TC)含量下降了19.80%,数据有效；甘油叁酯(TG)下降了11.80%,数据无效；高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)上升了0.028mmol/L,数据无效。实验结果显示只有TC数据有效,但是TG,TC和HDL-C叁项中必须有两项为阳性,才能说明具有降血脂效果,所以韭菜可以作为复配材料与其他物质共同作用达到辅助降血脂效果。3、韭菜对腹腔注射氢化可的松溶液致肾阳虚型小鼠(60mg/kg/d)实验中,韭菜粗提物灌胃剂量为2.8850g/kg·bw,实验周期为15天。实验结束后发现韭菜粗提物能够减缓肾阳虚型小鼠体重下降的幅度,延长肾阳虚型小鼠负重游泳时间,延长了3.22%；对肾阳虚型小鼠负重游泳30min后测定小鼠血清中血清尿素氮(BUN)、乳酸脱氢酶(LDH)和肝脏组织中(SDH),BUN下降了3.22%,LDH上升了0.70%,SDH上升了3.10%,实验结果显示韭菜粗提物灌胃剂量为2.8850g/kg-bw有轻微的抗疲劳效果,但是不够理想,可以作为复配材料与其他物质进行增加肾阳虚模型小鼠抗疲劳耐力,或加大韭菜剂量达到抗疲劳效果。4、10kg韭菜用70%乙醇60℃浸提所得的粗提液减压浓缩得到浸膏,浸膏用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行分相萃取,冷冻干燥后得到石油醚萃取相575g,乙酸乙酯萃取相60g、正丁醇萃取相361g和水萃取相1840g。韭菜在体外抗凝血研究中,韭菜中正丁醇萃取相能够明显降低正丁醇的抗凝血作用,说明正丁醇萃取相中含有促进血浆凝集物质；水萃取相能够明显延迟血浆凝集。水萃取相醇沉后醇沉上清和沉淀进行抗凝血活性实验,其浓度为0.0760g/mL(相当于0.3916g/mL干韭),韭菜醇沉上清和沉淀均能抑制血浆凝集,醇沉上清抗凝血效果更强。醇沉上清过活性炭柱,用系列比例的去离子水和乙醇洗脱,体外抗凝血实验结果显示,95%乙醇洗脱抗凝血活性最强,95%乙醇洗脱后得到样品8.86g。95%乙醇洗脱下来的样品过Sephadex LH-20得到8个组分,分别为S1, S2, S3, S4, S5, S6, S7, S8。S组分进行体外抗凝血实验,浓度为0.0760g/mL,结果显示S2组分抗凝血活性最强,S1,S3,S5,S6,S8次之。血浆与S2溶液比例为20∶1进行抗凝血实验时,血浆2h不发生凝集；血浆与S2溶液比例为40∶1时,血浆8.32分钟发生凝集。对S组分中抗凝血活性成分进行显色分析,有机酸分析显示阳性,甾类物质显示阴性,在365nm下显示为蓝色荧光,根据显色结果结合文献,判断水相中抗凝血成分可能为苯丙酸类物质。
刘晨[10]2018年在《鸟苷酸发酵工艺优化及肝保护功效研究》文中研究表明鸟苷酸,又名5′-鸟嘌呤核苷酸(Guanosine-5′-monophos-phate,GMP),是组成核酸的五种核苷酸之一,具有特殊的香菇样鲜味,在食品工业主要作为食品添加剂和用作调味品的原料。鸟苷酸亦具有高度生物活性,具有调节机体营养代谢、提高机体免疫力及辅助抗肿瘤等功效,但关于其是否具有肝保护功效尚未见文献报道。本课题首先以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)变异菌株为出发菌株,进行鸟苷发酵工艺优化。其次,复制小鼠四氯化碳(Carbon tetrachloride,CCl_4)、酒精性及刀豆蛋白A(Concanavalin A,Con A)急性肝损伤模型,进行鸟苷酸对小鼠急性肝损伤肝保护功效的初步筛选。最后,复制CCl_4小鼠急性肝损伤模型,观察鸟苷酸对其肝损伤的保护功效,探讨其肝保护功效的抗氧化应激和抗凋亡机制,为保健食品与肝病治疗药物的筛选提供理论依据。主要结果如下:1、对发酵培养基及发酵条件进行单因素优化试验以及叁因素叁水平正交试验,确立了最优发酵培养基配方(%):葡萄糖12.0;酵母粉1.6;玉米浆粉0.2;谷氨酸钠1.0;磷酸氢二钾0.2;氯化钙0.2;碳酸钙2.0;硫酸铵2.0;硫酸镁0.05。最佳发酵条件:摇瓶种子培养时间12 h,接种量10%,发酵温度36℃,pH 7.0-7.2,发酵时间72 h。按照优化后发酵培养基及发酵条件进行发酵,鸟苷浓度最高可达到10.6 g/L,较优化前提高了71%。2、CCl_4、酒精急性肝损伤模型的模型组谷丙转氨酶(Aanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(Aspartate aminotransferase,AST)水平较正常对照组极显着升高(P<0.01),表明CCl_4、酒精性急性肝损伤小鼠模型复制成功;与模型组比较,GMPNa_2 250、125、62.5 mg/kg组小鼠血清ALT、AST活性下降极显着(P<0.01),提示鸟苷酸对CCl_4、酒精性急性肝损伤小鼠肝功能有较好的改善作用。Con A急性肝损伤模型的模型组小鼠血清ALT、AST活性较正常对照组极显着升高(P<0.01),表明Con A急性肝损伤小鼠模型复制成功;与模型组比较,GMPNa_2 250、125、62.5 mg/kg组小鼠血清ALT、AST活性下降,但统计学比较无显着性差异,提示鸟苷酸对Con A急性肝损伤小鼠肝功能改善作用不明显。3、模型组小鼠血清ALT、AST水平较正常对照组极显着升高(P<0.01),表明CCl_4急性肝损伤小鼠模型复制成功;与模型组比较,GMPNa_2 250、125 mg/kg组小鼠血清ALT、AST活性极显着下降(P<0.01),同时小鼠肝组织病理切片显示GMPNa_2 250 mg/kg组小鼠肝组织较模型组明显改善,提示鸟苷酸对CCl_4急性肝损伤小鼠肝功能有较好的改善作用。GMPNa_2 250 mg/kg组可极显着升高CCl_4肝损伤小鼠肝组织超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione Peroxidase,GSH-Px)及总抗氧化能力(Total antioxidative capacity,T-AOC)水平,降低丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量(P<0.01),提示鸟苷酸肝保护作用与其抗氧化应激有关。GMPNa_2 250 mg/kg组可极显着下调CCl_4肝损伤小鼠肝组织含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cysteinyl aspartate specific proteinase 3,Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2Associated X Protein,Bax)mRNA和蛋白表达水平,上调B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/lewkmia-2,Bcl-2)mRNA和蛋白表达水平(P<0.01),提示鸟苷酸的肝保护作用与其抗凋亡作用有关。
参考文献：
[1]. 对酒精性肝损伤有保护作用的功能性食品的初步研究[D]. 刘佳. 重庆大学. 2004
[2]. 土庄绣线菊水浸液的保健功能研究[D]. 刘红微. 内蒙古农业大学. 2012
[3]. 枳椇果梗发酵特性及其果醋功能性研究[D]. 向进乐. 西北农林科技大学. 2012
[4]. 杨梅黄酮对酒精性肝氧化损伤的保护作用及其机制研究[D]. 李培培. 华中农业大学. 2010
[5]. 新型乐陵金丝小枣原汁的活性成分分析及抗氧化和保肝作用的研究[D]. 杨梅. 山东大学. 2016
[6]. 苏麻油中α-亚麻酸的分离纯化与护肝功能研究[D]. 黄杰秋. 贵州大学. 2017
[7]. 蛹虫草基质多糖的提取及对酒精所致肝损伤的保护作用[D]. 王雪. 南京师范大学. 2015
[8]. 黑牛肝菌多糖对小鼠酒精性肝损伤的保护作用研究[D]. 郭永月. 南京师范大学. 2013
[9]. 韭菜四种活性初步研究和体外抗凝血物质分析[D]. 葛丽. 浙江工商大学. 2011
[10]. 鸟苷酸发酵工艺优化及肝保护功效研究[D]. 刘晨. 河南工业大学. 2018
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