肾茶水提物抗抑郁作用的实验研究论文_雷双媛1,吴苏礼1,李,光3,刘,斌1,刘国良1

肾茶水提物抗抑郁作用的实验研究论文_雷双媛1,吴苏礼1,李,光3,刘,斌1,刘国良1

雷双媛1 吴苏礼1 李 光3 刘 斌1 刘国良1 王志刚1* 耿 放2*

(1.黑龙江中医药大学 黑龙江 哈尔滨 150040)

(2.哈尔滨师范大学 黑龙江 哈尔滨 150025)

(3.药用植物研究所云南分所 景洪 666100)

【摘 要】目的:研究肾茶水提物抗抑郁作用及可能机制。方法:灌胃给予肾茶水提物后,采用小鼠悬尾实验、小鼠强迫游泳实验和5-羟色氨酸诱导的小鼠甩头实验初步观察肾茶水提物的抗抑郁作用。通过结合孤养加慢性轻度不可预见性应激方法建立的大鼠抑郁模型,观察肾茶水提物对大鼠糖水偏爱度和脑组织5-羟色胺和去甲肾上腺素水平的影响。结果:肾茶水提物可以明显缩短小鼠悬尾和强迫游泳不动时间,增加5-羟色氨酸诱导的小鼠甩头次数;肾茶水提物可以增加慢性应激模型大鼠的糖水偏爱度和脑组织5-羟色氨水平。结论:肾茶水提物具有抗抑郁的活性,其作用机制可能与调节5-羟色氨水平有关。

【关键词】肾茶;抑郁症;行为学;5-羟色胺;去甲肾上腺素

【中图分类号】R285.5 【文献标识码】B 【文章编号】1003-5028(2015)6-0583-02

The Experimental Research on Anti -depression Activity of Clerodendranthus spicatus Aqueous Extract

Lei Shuangyuan1, Wu Suli1,Li Guang3, Liu Bin1, Liu Guo liang1, Wang Zhigang1*, Geng Fang2*

(1. Heilongjiang University of Traditional Chinese Medicine,Harbin 150040)

(2.Harbin Normal Universit, Harbin 150025; 3.Yunnan Branch Institute of Medicinal Plant, Chinese Academy of Medical Sciences, Jinghong 666100)

【Abstract】Objective: To study the anti-depression on mechanism of aqueous extract of Clerodendranthus spicatus. Method: The mice were given the forced swimming test, tail suspension test and head-twitches test induced by 5-hydroxytryptophane after treating with aqueous extract of Clerodendranthus spicatus by intragastric administration to observe the antidepressant effect. Rat models were established by separation and chronic unpredictable mild stress. Sucrose water preference and the levels of 5-hydroxytryptamine and norepinephrine in brain tissues were tested. Results: The aqueous extract of Clerodendranthus spicatus could reduce the mice tail suspension and forced swimming time, increase head-twitches count induced by 5-hydroxytryptophan and the chronic stress model rats sugar water preference and brain 5-hydroxytryptophan level. Conclusion: The anti-depression effects of aqueous extract of Clerodendranthus spicatus may be related to the regulation of 5-hydroxytryptophan level.

【Keywords】Clerodendranthus spicatus; Depression; Behavior; 5-hydroxytryptophan; norepinephrine.

抑郁症是一种常见的情感性精神障碍,通常表现为持续心境或情绪低落、兴趣缺乏、睡眠障碍等躯体症状的疾病,严重者甚至出现自杀行为[1]。目前治疗抑郁症多用大剂量化学药物,疗效确切,但存在副作用大,易复发等特点[2, 3]。近年来,随着植物药研究的深入,很多学者试图利用现代研究手段从传统中草药中研究和开发新型的抗抑郁制剂,并获得初步成果。现已证实具有抗抑郁活性的中药包括四逆散、酸枣仁汤、归脾汤加减变化的复方和贯叶连翘、刺五加、巴戟天、白芍等[4, 5]。

肾茶(Clerodendranthus spicatus (Thunb.) C. Y. Wu)又名猫须草,为傣药中传统药食两用品种,具有清热祛湿、利水排石的功效[6],随着研究深入还发现肾茶具有降血糖、降血脂、降压、保肝、防止老年痴呆等作用[7]。现代研究发现其主要药效成分包括酚酸类、甲氧基黄酮类及萜类等[8-10],其主要成分迷迭香酸具有较好的抗抑郁效果[11],为扩大肾茶适应症,笔者选择悬尾绝望时间和强迫游泳等多个不同动物抑郁行为模型,对肾茶水提物抗抑郁活性进行研究,为肾茶药效筛选和深入开发奠定基础,也为同类民族药物深入研究提供借鉴。

材料与方法

1 实验材料

1.1 动物

雄性KM小鼠,体重18~22g,雄性SD大鼠,体重180~220g;均由北京维通利华公司提供,许可证号:SCXK(京)2007-0001。

1.2 药物

受试药物:肾茶购于安徽毫州药材市场。肾茶水提物制备方式:肾茶粉碎后过20目筛,加10倍量水加热回流2h,提取两次,合并煎液,水浴上蒸干获得浸膏,使用时加水溶解并稀释至所需浓度。

阳对药物:盐酸氟西汀,礼来苏州制药公司,批号1037A。

1.3 试剂

5-羟色氨酸(5-Hydroxytryptophan,5-HTP),Simga公司,批号:AV41425;帕吉林,Simga公司,批号:P8013;大鼠5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)试剂盒,去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)试剂盒,南京建成生物科技有限公司,批号:201403。

1.4 仪器

玻璃烧杯,四川蜀牛玻璃仪器有限公司;小鼠悬尾挂架(自制);ZYY018型计时器,深圳市同力兴有限公司;MC-246电子温度计,欧姆龙有限公司;大鼠行为观察敞箱(自制);902型超低温冰箱,美国Thermo公司;Elx酶标仪,美国伯腾仪器有限公司。

2 实验方法

2.1 肾茶水提物对抑郁模型小鼠行为学的影响

2.1.1 分组和给药

ICR小鼠50只,随机分成5组,每组10只,肾茶高、中、低剂量组,阳性对照组和空白对照组。肾茶高、中、低剂量组分别灌胃(ig)给予肾茶水提物,剂量折合生药量为7.2,3.6,1.8g?kg-1?d-1,阳性对照组ig给予盐酸氟西汀0.5%羧甲基纤维素钠混悬液,剂量为2.5mg?kg-1?d-1。各组均按照10mL?kg-1体重给药,空白对照组给予0.5%羧甲基纤维素钠,连续给药14d。给药过程中,因操作失误,阳性对照组和肾茶水提物低剂量组各有1只小鼠死亡,后补充动物重复实验,以补充数据。

2.1.2 小鼠悬尾实验

末次给药30min后,将小鼠尾部距离尾尖2cm处以医用胶带固定于自制挂架上,头部距离实验台面5cm,不同动物之间设置隔板,避免互相干扰。悬挂时,勿使小鼠尾部扭曲折叠,观察时长为6min,记录后4min后小鼠不动时间[12]。

2.1.3 小鼠强迫游泳实验

末次给药后30min,小鼠置水深20cm,直径19cm的玻璃烧杯中,水温28℃,观察6min,记录后4min内小鼠累积不动的时间。所谓不动包括以下状态:在水中停止挣扎,或呈漂浮状态,仅露出鼻孔保持呼吸,可有细小的肢体运动以保持头部浮在水面[13]。

2.1.4 5-HTP诱导小鼠甩头实验

实验第14d先腹腔注射帕吉林(100mg?kg-1),30min后灌胃给药,1h后腹腔注射5-羟色胺酸(10mg?kg-1),15min后开始观察,记录2min内小鼠甩头次数,每10min记录一次,记录60min内甩头总次数。

2.2 肾茶水提物对慢性应激抑郁模型大鼠的影响

2.2.1 分组及给药

取经过含糖饮用水训练并且旷场实验合格的48只SD大鼠,分为6组,每组8只。

期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆肾茶高、中、低剂量组分别ig给予肾茶水提物,剂量折合生药量为5.4,2.7,1.4g?kg-1?d-1,阳性对照组ig给予盐酸氟西汀0.5%羧甲基纤维素钠混悬液,剂量为1.9mg?kg-1?d-1,模型组和空白对照组给予10mL?kg-10.5%羧甲基纤维素钠混悬液;给药持续21天。

2.2.2大鼠慢性应激抑郁模型的建立

除空白组外,造模大鼠单独饲养,在21d内随机安排以下刺激12℃冰水游泳5min、45℃热烘5min、夹尾1min、潮湿饲养、禁食24h、禁水24h,每种刺激重复3次,每日给予1种。

每次禁水24h后,进行双瓶糖水偏爱实验,测试大鼠1h内液体消耗,计算糖水偏爱度:糖水偏爱度=糖水消耗/总液体消耗×100 %。末次给药30min后,大鼠断颈处死,冰盘上取脑,分离前额皮质,称重后制备成10%冰生理盐水溶液,-80℃保存,待测。

2.3 统计学方法

所测定指标均采用均数±标准差( ± s)表示,使用SPSS19.0软件中的方差分析(ANOVA)进行检验,P<0.05作为差异具有显著性意义。

3 结果

3.1 肾茶水提物对抑郁模型小鼠行为学的影响

如表1所示,肾茶水提物高剂量组明显缩短小鼠悬尾不动时间,与空白对照组比较差异具有显著性意义(P<0.01)。肾茶水提物高剂量组和阳性对照组均能明显缩短小鼠强迫游泳不动时间,与空白组比较差异具有显著性意义(P<0.05或P<0.01);但是肾茶高剂量组效果差于盐酸氟西汀,差异显著(P<0.01)。肾茶水提物各剂量组明显增加5-HTP诱导的小鼠甩头次数,与空白对照组比较,差异具有显著性意义(P<0.01或P<0.05)。

表1 肾茶水提物对抑郁模型小鼠的影响( ± s,n=10)

组别剂量/g?kg-1悬尾不动时间/s游泳不动时间/s甩头次数

空白对照组-101.4±11.3116.7±19.29.2±1.8

阳性对照组2.570.3±12.0a66.4±9.4a15.6±3.9a

肾茶水提物7.282.0±12.1a84.4±7.5bc14.5±1.5a

3.695.7±7.399.1±13.813.0±2.5a

1.898.2±11.310.34±15.512.4±3.0b

注:与空白对照组比较, aP<0.01,bP<0.05;与阳性对照组比较,cP<0.01。

3.2 肾茶水提物对慢性应激抑郁模型大鼠的影响

肾茶水提物高、低剂量组和盐酸氟西汀组均增加大鼠糖水偏爱度,与模型组比较,差异具有显著性意义(P<0.01或P<0.05);肾茶水提物高、中剂量组可以增加大鼠脑组织5-HT水平,但是对NE水平影响不明显。见表2。

表2 肾茶水提物对慢性应激抑郁模型大鼠的影响( ± s,n=8)

组别剂量/g?kg-1糖水偏爱度5-HTNE

空白对照组-0.86±0.08250.49±14.12588.89±20.47

模型组-0.63±0.11192.04±11.54539.81±23.50

阳性对照组1.90.80±0.08a241.11±16.36a596.76±14.66a

肾茶水提物7.20.79±0.10a215.52±25.08b548.71±25.34

3.60.73±0.12213.94±25.47b546.38±37.75

1.80.73±0.07b204.72±24.44541.69±26.59

注:与空白对照组比较, aP<0.01,bP<0.05。

4 讨论

小鼠悬尾实验和强迫游泳实验为抗抑郁初筛模型,方法简单,易于重复,被广泛应用于抗抑郁药物的初筛。本文中建立上述两个模型通过与阳性对照药盐酸氟西汀对比,初步确定了肾茶水提物具备抗抑郁的活性。

脑内单胺类递质异常,在抑郁症的发病过程中起着重要作用:如去甲肾上腺素、5-HT等功能不足[14]。在5-HTP致小鼠甩头实验中,帕吉林和5-HT的前体物质5-HTP同时给予,可造成突触间5-HT浓度上升,激动5-HT2A受体,产生甩头反应[15]。本研究中,肾茶水提物可以增加小鼠甩头次数,认为肾茶水提物抗抑郁活性可能与增加5-HT浓度或5-HT2A受体敏感性有关。

孤养加不可预见轻度刺激建立的抑郁模型大鼠,长时间地接受温和应激刺激,食物消耗和饮水量减少,反映了内源性抑郁症的中心症状,即快感缺失,具有很高的应用价值[16]。本研究中,肾茶水提物可以增加大鼠糖水偏爱度,具有明确的抗抑郁作用,脑内单胺类递质测定结果表明,肾茶水提物可以增加大鼠脑内5-HT水平,与小鼠甩头实验结果一致。因此认为,肾茶水提物发挥抗抑郁作用与调节脑内5-HT水平相关。

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课题项目:

黑龙江省教育厅科学技术研究项目(12541758)

通讯作者:

耿放,(1981-),女,副教授,主要从事中药药效物质基础研究,E-mail: gengfang1980@163.com;

王志刚,(1976-),男,副教授,主要从事中药体内代谢研究,1161578816@qq.com

论文作者:雷双媛1,吴苏礼1,李,光3,刘,斌1,刘国良1

论文发表刊物:《河南中医》2015年6月供稿

论文发表时间:2015/10/19

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