张晓慧[1]2004年在《牛肾上腺髓质嗜铬细胞的分离纯化及其效果评价》文中研究说明尽管大量研究显示出肾上腺髓质嗜铬细胞(AMCC)移植在疼痛治疗中的显着效果,但将其作为基本治疗方法用于临床还存在许多困难,其中有限的细胞来源是AMCC 移植广泛应用的最大障碍。牛的肾上腺由于髓质细胞产量大、易分离获取而成为首选的供体来源。但利用目前通常采用的分离纯化方法得到的AMCC,不仅细胞产率、纯度低,而且工艺成本高,很难满足临床大量移植的需要。为此,本文在现有AMCC 分离纯化工艺基础上,结合本实验室的研究基础和实验条件,建立了牛肾上腺髓质嗜铬细胞(BCC)的分离纯化方法,并通过体外生物学特性及体内移植止痛的实验研究对BCC 功能进行了评价。采用胶原酶灌注、机械分离及Percoll 非连续密度梯度离心的方法获得纯化的BCC,平均每个肾上腺可得到0.7～3.1×10~8个BCC,而且存活率在99%以上,纯度大于95%。随着体外培养时间的延长,BCC 胞浆变暗、胞膜皱缩,细胞存活率及儿茶酚胺含量也逐渐下降,但葡萄糖和乳酸浓度无明显变化。说明BCC 在体外培养具有分泌儿茶酚胺功能活性,但代谢速率极低。通过对大鼠蛛网膜下腔BCC 移植镇痛效果的考察,发现ACA 微囊化BCC 对急、慢性疼痛模型大鼠都有显着的止痛作用,但BCC 移植由于产生免疫排斥反应而导致镇痛效果不明显或产生后很快消失。通过对冷冻保存前后BCC 形态、存活率、损伤及功能活性的考察,发现冷冻保存可以作为保持BCC 功能活性的有效方法,而且微胶囊可以降低冻存过程对细胞造成的损伤。总之,本论文建立的机械分离为主、胶原酶灌注消化为辅的BCC 分离方法以及Percoll非连续密度梯度离心的BCC纯化方法可以为AMCC 移植的广泛临床应用提供高产率、高纯度、高活性的充足、健康的细胞来源。
仲晓飞[2]2005年在《微囊化（ACA）牛嗜铬细胞移植治疗慢性疼痛的实验研究》文中研究说明许多疾病和创伤都伴随着疼痛存在。据 WTO 的数据显示,全球约有 22%的人正在忍受疼痛的折磨。疼痛,尤其是慢性疼痛和晚期癌痛不仅严重影响了病人的生活质量,而且给家庭和社会带来了沉重的负担。目前对慢性疼痛的治疗方法仍存在诸多不足,而且并未使疼痛得到满意的治疗。细胞移植镇痛解决现有镇痛形式诸多弊端的一种新的方法。但该方法应用于临床必须解决细胞来源短缺和受体的免疫排斥反应两大问题。 目的:采用免疫隔离技术,将同种或异种细胞微囊化包埋,然后移植于生物体内,并观察评价移植后细胞的生物活性及镇痛效果。大量的研究显示肾上腺髓质嗜铬细胞(AMCC)能够分泌产生镇痛作用的物质。牛的肾上腺髓质嗜铬细胞(BCCs)产量大﹑易分离获取,因此成为细胞供体的首选来源。本实验在目前 AMCC 分离纯化工艺基础上,建立一种高产率﹑高纯度﹑低成本的分离纯化 BCCs 的方法,并考察BCCs 等的体外功能活性。选用海藻酸钠和壳聚糖两种容易获得的天然高分子材料,制备出强度佳﹑生物相容性好的海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠(ACA)微胶囊,将获得的 BCCs 包埋,考察微囊化的 BCCs 的体外生物活性,并通过对慢性疼痛模型的镇痛实验来评价 ACA 微胶囊的免疫保护作用和 ACA 微囊化 BCC 的镇痛效应 ,以此来评价 ACA 微囊化BCCs 移植镇痛的安全性﹑可行性及有效性。 方法:1﹑采用胶原酶灌注﹑机械分离和 Percoll 非连续密度梯度离心的方法获得 BCCs。2﹑采用酪氨酸羟化酶(TH)免疫组化染色的方
高宝柱, 肖琅, 杜智[3]2002年在《微囊肾上腺髓质嗜铬细胞蛛网膜下隙移植治疗晚期癌痛病人的疗效观察》文中研究表明目的:观察微囊肾上腺髓质嗜铬细胞移植到晚期癌痛病人蛛网膜下隙后的镇痛效果,并检测血儿茶酚胺浓度变化。方法:选择15例晚期癌症伴剧烈疼痛的病人,将经过提取、分离、纯化并以微囊包裹的牛肾上腺髓质嗜铬细胞移植到病人的蛛网膜下隙,移植后采用VAS法评价镇痛效果,并观察移植前后血中儿茶酚胺浓度变化、哌替啶用量改变及副作用。结果;移植后病人疼痛明显缓解,移植前后VAS有显着性差异(P<0.01) 显效率为26.7％,有效率为60％,总有效率为86.67％) 移植后血儿茶酚胺浓度与移植前相比具有显着性意义(P<0.01)移植后哌替啶用量明显低于移植前(P<0.01).结论:采用微囊肾上腺髓质嗜铬细胞蛛网膜下隙移植可明显缓解晚期癌痛病人疼痛,且副作用少。
王振福, 薛毅珑, 钟大光, 崔忻, 李新建[4]2000年在《微囊化牛肾上腺髓质嗜铬细胞脑内移植治疗偏侧帕金森病样猴的行为及神经生化效应》文中提出目的 :观察微囊化牛肾上腺嗜铬细胞 ( BCC)脑内移植对偏侧帕金森病 ( PD)样猴的行为和脑组织液中单胺类物质含量的影响 ;评价微胶囊的免疫隔离效果。方法 :以海藻酸钠 -多聚赖氨酸 -海藻酸钠 ( APA)为材料包裹BCC。右侧颈内动脉注射甲基 -苯基 -四氢吡啶 ( MPTP)诱发 PD样猴模型。将微囊化、非囊化 BCC或空微囊分别植入 PD样猴右侧尾状核和壳核 ,观察 PD样猴行为、尾状核及壳核微透析液中单胺类物质的变化。结果 :囊化组 ( n=6)和非囊化组 ( n=2 )移植后 1周开始 PD样猴左侧上肢活动明显增加 ,阿朴吗啡 ( Apo)诱发的异常旋转次数减少。非囊化组猴在移植 1～ 2个月后主动行为及 Apo诱发的异常旋转圈数逐渐退回到移植前水平 ;而移植囊化BCC6只 PD样猴的异常行为纠正效果 ,在观察的 7个月内仍存在。空囊组 ( n=1) PD样猴异常行为无变化。移植前 PD样猴右侧壳核、尾状核细胞外液中 DA、DOPAC和 HVA水平较左侧明显降低 ( P<0 .0 5 )。移植后 2、 7个月时 ,囊化组右侧壳核、尾状核细胞外液中 DA、DOPAC和 HVA水平较移植前明显提高 ( P<0 .0 5 ) ,但仍低于左侧的水平。结论 :PD样猴脑内移植 BCC后异常行为明显改善 ,微囊组的纠正效果明显优于非囊化组 ,其移植区 DA及其代谢产生明显增加。 APA微囊具有良好的免?
陆庆国[5]2001年在《APA微囊性能观测和制备反应质控的实验研究》文中研究指明国内外的研究及本研究组前期的研究已表明APA微囊具 有良好的免疫隔离性能。但欲将APA微囊发展成为较成熟的 组织/细胞移植用免疫隔离膜，必须要求（1）微囊膜能截割 大分子量（＞ 150kDa）的物质通过，以发挥免疫隔离作用；（2） 微囊生物相容度高：除囊材料外，微囊需呈规则球型、表面 光滑；（3）用于体内移植的微囊膜须具有一定的机械和化学 强度；（4）包囊过程及囊化后对细胞活率影响小：体积微小 的微囊使营养物和代谢物的扩散死腔减小，有利于囊内细胞 的存活；（5）需在整体实验中了解APA微囊的毒性作用及长 期效应。 本实验针对上述问题，采用加拿大SUN氏静电微囊制作 仪制备微囊进行研究。通过观察APA微囊制备过程中部分物 理参数和化学因素（频率、泵速、针径、SA浓度、PLL浓度、 PLL作用时间、SC液化时间）与微囊质量性能的关系，进一 步提出优化的APA微囊制备条件。通过观测不同类型APA微 囊膜通透性，了解APA微囊膜截割分子量范围及较佳的微囊 －3－ 中 文摘要 类型。在体外实验条件下测定MA微囊的机械强度和化学强 度。将大剂量APA微囊植入动物体内，观察对宿主体重要脏 器的毒性作用。观察包囊及培养对牛’肾上腺嗜铬细胞（肌CS） 存活率的影响。建立MA微囊化 BC＊的低温保存条件。进 一步了解 APA微囊化 BCC S移植于偏侧帕金森病样猴脑纹状 ． 体内的长期效应。 实验研究结果表明频率越高、泵速越低、针径越小，制 作的微囊体积越小；采用所优化的制备条件，可制备出性能 较佳的APA微囊，囊内细胞的活率较高。电镜观察发现，微 囊膜具有半透膜性质的表面形态，在峻状突起中有孔状结 构。利用激光扫描共聚焦显微镜和 FI TC标记的一系列分子 量的葡聚糖测定了”A微囊的通透性，结果显示”A微囊膜 可阻止大分子免疫活性物质和免疫细胞进出微囊，而允许小 分子营养物质和细胞分泌的活性物质通过，可起到免疫隔离 作用。利用机械振荡法测定了不同类型APA微囊的机械强度； 利用不同PH值的磷酸盐缓冲液检测APA微囊的化学强度。 表明APA微囊的强度主要与聚赖氨酸和海藻酸钠形成的膜结 构有关，按优化条件制备的微囊具有较高的机械强度；APA 微囊在生理酸碱度hH6．9刁．4）的环境中，可保持高的完 好率；提示 APA微囊可适于人体的移植的要求。 实验表明采用优化的包囊条件，包囊过程对囊内细胞的 损伤小。实验观测了不同降温梯度和保存条件对APA微囊化 BCCS的影响，初步建立了低温保存”A－BCCS的方法。习APA －4－一 中文摘要微囊植入小鼠背部皮下和腹腔内，对宿主重要脏器无明显的毒副作用。 将空微囊植入小鼠背部皮下或腹腔，移植后4个月大部分微囊保持完好。将 APA乃CC s植入小鼠背部皮下或腹腔，移植后2个月大部分微囊保持完好，但移植后4个月时部分微囊被包绕或破损。 实验继续对脑内移植MA微囊化肌C的偏侧叩猴的行为和脑组织液神经生化指标进行长期观察，结果表明移植囊化 BCC 2 4个月时，PD猴的自发行为和诱发旋转行为仍得到不同程度的改善，PD猴移植区脑组织液中儿茶酚胺类物质含量增加。 本研究提出了制备APA微囊的优化条件；了解了APA微囊的形态结构和性能特征；证明大剂量的APA微囊植入对宿主体无明显毒性；提示可采用低温条件保存”A士CCS；表明APAoCCS脑内移植可较长期地改善PD样猴。通过进一步完善，APA微囊技术可望为异基因细胞移植治疗相关疾病提供一个新的途径。
参考文献：
[1]. 牛肾上腺髓质嗜铬细胞的分离纯化及其效果评价[D]. 张晓慧. 中国科学院研究生院（大连化学物理研究所）. 2004
[2]. 微囊化（ACA）牛嗜铬细胞移植治疗慢性疼痛的实验研究[D]. 仲晓飞. 大连医科大学. 2005
[3]. 微囊肾上腺髓质嗜铬细胞蛛网膜下隙移植治疗晚期癌痛病人的疗效观察[J]. 高宝柱, 肖琅, 杜智. 天津医药. 2002
[4]. 微囊化牛肾上腺髓质嗜铬细胞脑内移植治疗偏侧帕金森病样猴的行为及神经生化效应[J]. 王振福, 薛毅珑, 钟大光, 崔忻, 李新建. 军医进修学院学报. 2000
[5]. APA微囊性能观测和制备反应质控的实验研究[D]. 陆庆国. 军医进修学院. 2001
标签：生物学论文; 基础医学论文; 肾上腺论文; 肾上腺髓质论文; 细胞免疫论文; 科学论文; 海藻酸钠论文; 科普论文; bcc论文; apa论文;