（1.昌图县动物卫生监测预警中心，辽宁昌图 112599；
2.昌图县畜产品安全监察所，辽宁昌图 112599）
摘 要：猪精液常温保存技术在人工授精中被广泛应用。常温保存的效果受诸多因素影响，尤其与稀释剂配方密切相关。通过适当控制稀释精液的PH值，使精子处于弱酸性环境下，既不危害精子，又能有效的抑制精子的运动，一旦环境温度和 pH 值恢复到正常，精子又将重新恢复其原有的运动和代谢水平，并能保持正常的受精能力。本试验采用不同配方的稀释液，以生理盐水为对照，对猪精液在相同的理化条件下进行稀释处理，然后测定其精子活率，再通过数据比较，从而筛选出可以在较长保存时间内维持精子较高活率的稀释剂配方。结果表明，利用稀释液Ⅰ和稀释液Ⅱ保存的精子活率达35%以上,显著优于其他组（p<0.05）。
关键词：猪精液；常温保存稀释液；精子活率
精子的活率和运动能力与精子结构和功能的完整性紧密相关，可以对精子潜在的授精能力作出预测。正常的精子运动是在生理状态下完成受精过程的基础。正常的受精过程需要有正常的或好的精子功能和正常的精子结构, 而精子许多不同的功能状况以及结构的变化，可以通过精子运动的不同改变而加以体现。
1.材料与方法
1.1 稀释液的配制
本试验所用稀释液在试验开始前一天配制分装并保存在4℃的冰箱中待用。其配方如表1所示。
表1 猪精液常温保存稀释液配方
注：以生理盐水作为对照组，青霉素在稀释精液前单独添加。
1.2 新鲜精液的稀释与处理
采集杜洛克猪的精液60ml，用毛巾包裹后浸入盛有41℃温水的保温瓶中并迅速运回实验室，以减少温度变化对精液品质的影响。
在精液稀释前将分装的稀释液和生理盐水放入37℃水浴锅中升温备用，稀释精液前分别加入青霉素并使之溶解。通过对原精液的精子活率和精子密度进行测定以判定是否达到试验要求。具体过程为将一滴原精液滴在一张预热的显微镜载玻片上，制作压片进行观察。精子活力应在80％以上，才能进行下一步稀释。精子的密度主要用目测法，即分为高、中、低三级：精子头部间距小于精子体长时为高密度，等于精子体长时为中密度，大于精子体长时为低密度。本试验要求精子密度为中密度以上。
将通过鉴定的精液分为5组进行稀释。具体操作为首先用针管（不带针头）吸取5ml原精液分别加入5离心管内，分装时动作要快但不宜过猛；然后分别用5种已升温的稀释液对其进行等温等倍稀释，稀释液温度应与精液温度基本一致，以免精子因温度突变而活力降低；稀释时，将稀释液沿瓶壁缓缓注入精液中，为使其混合均匀可轻轻晃动，但不能搅拌；稀释完毕后，立即封口并粘贴标签。最后用干毛巾将其包裹并放入17℃恒温箱中保存。
1.3 精子活率的评定
每隔12h测定4种稀释液和生理盐水中精子的活率。从5组离心管中吸取稀释后的精液一滴于载玻片上并加盖盖玻片，使其间充满精液且不存留气泡。置于400倍的显微镜下观察测定，可见精子有3种活动类型：直线前进运动、旋转运动和原地摆动。观察记录200个精子中直线运动的数量，并求出精子活率。
2.结果与分析
2.1 数据处理
每个处理组和对照组均设置3个重复，结果用平均值±标准差表示。所有数据采用SPSS分析。
2.2 不同常温保存稀释液对猪精子活率的影响
不同常温保存稀释液对猪精子活率的影响见表2。
表2 不同常温保存稀释液对猪精子活率的影响（N=3，%）
注：同行肩注不同字母代表差异显著（p<0.05）。
根据表2分析得出：经24h保存后，稀释液I和稀释液Ⅱ保存的精子活率显著优于稀释液Ⅲ、稀释液Ⅳ和生理盐水（P<0.05），稀释液I和稀释液Ⅱ的精子活率无显著差异（P<0.05）；稀释液Ⅳ显著优于释液Ⅲ和生理盐水（P<0.05）；生理盐水保存的精子活率最差。经48h和72h保存的精液，精子活率整体下降，各稀释液的相对保存效果与24h相同。
3.结论
稀释液I和II常温保存的精液，经过72 h保存后精子活率可达35%以上，表明稀释液I和II具有较高的保护精子的能力。
论文作者:朱艳1,万单1，郭宏伟1
论文发表刊物:《科技新时代》2019年8期
论文发表时间:2019/10/14
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