【摘要】目的：探讨应用TLC法（薄层层析法）鉴别中药炮制品、生品的可行性。方法：选择质量相同的生地黄、熟地黄制备供试品液，以5-羟甲基糠醛试液（5-HMF）做对照品，点样至硅胶G薄层板，展开剂为石油醚-乙酸乙酯（1:1），利用薄层层析成像系统于紫外光（254nm）下检视，加热至显色点完全分离，以TLC图谱区分生品、炮制品，重复试验5次，并对比5-HMF、地黄化合物扩展组长度。结果：与生地黄相比，熟地黄中5-HMF含量更高、颜色更深，此外， 5-HMF、地黄化合物组扩展长度对比，差异也存在统计学意义（P＜0.05）。结论：应用TCL法可直观、准确区分中药生品及炮制品，5-HMF扩展速度与地黄化合物组区别明显，TCL法在中药生品、炮制品的鉴定中也具有可行性。
【关键词】TLC法；中药生品；炮制品；鉴别
【中图分类号】R284.1 【文献标识码】B 【文章编号】2095-1752（2017）35-0302-02
研究表明，部分中药材需经炮制后方可入药，发挥药理作用，但仅凭借炮制前后中药的外观和性状往往难以准确区分生饮片和炮制品，如何快速、准确地鉴别两者对于中医治疗而言十分关键[1]。炮制工序中一般含有加热步骤，而高温则能引发化学反应，导致新化合物的生成，5-HMF是麦拉德反应的产物之一，而麦拉德反应则是含糖中药材炮制中最为常见的化学反应，因此，含有5-HMF也是确定炮制品的关键证据。TCL可快速、准确地区分混合物，该法在各类中药化合物鉴别及鉴定中应用较多。本研究选取含糖中药材地黄，并应用TLC法鉴别了生地黄、熟地黄，以探讨TLC法鉴别生品和炮制品的可行性，现报道如下。
1.资料与方法
1.1 仪器、试剂及材料
分离用硅胶G薄层板购自上海一基实业有限公司，GoodLook-1000型全自动薄层色谱成像系统购自上海科哲生化科技有限公司，所用试剂包括乙酸乙酯、石油醚、乙醇均为分析纯，购自锦鹏化工，对照品5-HMF标准品购自上海酶联生物研究所，纯度＞98%。实验材料中药材生地黄购饮片自同仁堂药店，熟地黄按《药典》规定进行炮制。
1.2 方法
称取地黄生饮片、炮制品（熟地黄）粉各2g，溶于20ml乙醇溶液后超声处理40min，进一步过滤、浓缩成1ml供试品溶液，取5-HMF标准品0.5mg溶于1ml乙醇溶液中制成对照品液。在薄层板底部划线作为起点，用毛细玻璃管沾取各5～10μl的供试品溶液、对照组液，点样于硅胶G薄层板起点并标号，以60～90℃石油醚-乙酸乙酯混合溶液作展开剂进行TLC试验，加热至显色点完全分离后取出、晾干，利用薄层层析成像系统于紫外光（254nm）下检视，重复试验5次，TLC图谱如图1所示。
1.3 统计学处理
采用统计学软件SPSS 12.0，对两组计量资料（x-±s）做独立样本t检验，P＜0.05代表比较差异有统计学意义。
2.结果
2.1 应用TLC法鉴别中药生品与炮制品的效果
生地黄、熟地黄、5-HMF样品的TLC图谱如图1所示。
a b c
图1 5-HMF、生地黄及熟地黄样品的TLC图谱
a（生地黄）；b（5-HMF）；c（熟地黄）
2.2 TLC法鉴别中药生品与炮制品的可行性
对比结果显示，5-HMF、地黄化合物组的扩展速度具有明显差异（P＜0.05），5-HMF则是炮制过程化学反应的生成物之一，表明应用TLC法鉴别生品、炮制品具有可行性。表1。
表1 TLC图谱中5-HMF与地黄化合物组的扩展长度比较（cm，x-±s）
化学物质 扩展长度
5-HMF（n=5） 2.24±0.22
地黄化合物组（n=5）0.57±0.13
t 37.542
P 0.000
3.讨论
TLC法是用于分离混合物的化学检测手段，其原理为：在毛细现象中，不同的化合物的扩散速度不同。中药材化学成分极为复杂，部分中药化学组分甚至超过20种，TLC法常被用于中药材化合物检测和精制中。部分中药材需经过炮制后方能入药，中药生品、炮制品在药理活性上具有较大差异，若不能准确区分生品、炮制品，误将生饮片加入方剂中，可使药效大幅降低。
以地黄为例，生地黄饮片可治疗热病、生津止渴，但熟地黄则具有止血、凉血的功效，二者功效差异较大，这也说明区别生品、炮制品是中药治疗的基本要求和前提条件[2]。然而，部分中药材在炮制前后的颜色、性状上并无明显变化，难以通过肉眼鉴别，而通过液相色谱（HPLC）这种较为精确的检测方法虽然能区分中药化学组成及含量，但耗时长、效率低。TLC法操作简便、分离快速，相关研究证实中药材（特别是含糖中药如何首乌、地黄等）在高温炮制后会发生曼拉德反应，产生含量较多的特殊中间产物5-HMF，这也为利用TLC法鉴别中药生品及炮制品提供了理论基础[3]。
本研究利用TLC法进行鉴别，结果显示，与生地黄相比，熟地黄中5-HMF含量更高、颜色更深（如图1），这也表明生地黄、熟地黄的化学组分存在明显差异，这也与葛华林[4]关于利用TLC法可准确鉴别中药材是否经过炮制的研究结论一致。但葛华林的研究中同样指出，炮制品种的5-HMF的含量也与试验因素相关，本研究在相同时间内进行了重复试验，测量并比较了5-HMF、地黄化合物组扩展长度，结果显示，从数据上看，扩展5min后，5-HMF扩展平均长度为（2.24±0.22）cm，地黄化合物组扩展长度（由地黄化合物组扩散顶点至起始点长度）为（0.57±0.13）cm，表明5-HMF、地黄化合物组扩展长度间对比差异存在统计学意义（P＜0.05），这也进一步证实了TLC法鉴别的可行性。
综上所述，应用TCL法可直观、准确区分中药生品及炮制品，5-HMF扩展速度与地黄化合物组区别明显，TCL法在中药生品、炮制品的鉴定中也具有可行性。
【参考文献】
[1]谢小明.中药炮制品和生品采用TLC法鉴别的可行性与有效性[J].中国医药指南，2015，13(13):55-55.
[2]康新奇.牡丹皮及其不同炮制品的紫外光谱鉴别方法[J].中国现代药物应用，2015，9(18):281-282.
[3]钟恋，汪云伟，等.地黄酒炖过程化学成分及“味”的关系[J].中成药，2015，37(5):1041-1044.
[4]葛华林.应用TLC法鉴别区分中药生品与炮制品的探讨[J].药物与人，2014，27(2S):4-4.
论文作者:丁洁
论文发表刊物:《医药前沿》2017年12月第35期
论文发表时间:2018/1/11
标签：地黄论文; 熟地黄论文; 生地黄论文; 化合物论文; 中药论文; 薄层论文; 中药材论文; 《医药前沿》2017年12月第35期论文;