殷勤伟[1]1988年在《对鸡胚脊髓运动神经元生长与分化的规律和调控的研究》文中研究表明本研究工作从鸡胚神经正常发生和实验性调节发生条件这两个角度出发，在细胞水平，亚细胞水平和分子水平上对其腰段脊髓运动神经元生长和分化的规律和调控机制进行了较系统的探讨。 (一)长期以来，对胚胎脊髓运动神经元树突发生和直接反射孤的组建过程一直不清楚。本实验应用CB-HRP逆行标记方法，首次对鸡胚腰段脊髓运动神经元的树突生长、分化的全过程以及反射孤的组建过程等进行了观察。实验结果表明：(1) 运动神经元的胞体和树突在胚5至13天期间为指数倍增式生长，在13天至生后1天中为直线增长方式。二者的转变点可以作为神经系统胚期及胎期划分的参考指标。追踪运动神经元树突主干和分枝的出现时序，可见到在胚10天前主要为树突主干从胞体向各方位芽生，10天后树突才出现广泛分枝。此外，还可看到树突的聚集、束化、分束和束化消退等过程。作者提出胚胎期树突束化的演变规律是树突发生轨道的反映，它可能在早期运动神经元的电活动的扩布和同步、营养物质通过树突转运，调节过量运动神经元死亡等方面有着重要的生物学意义，(2)；在胚胎脊髓中可在第5天，第10天和第12天分别直接观察到出现的三种不同感觉纤维投射到脊髓背角，分别形成间接反射孤、直接反射孤和呈网状分叉复杂的反射通路。其中直接反射孤组建过程的发现为电生理的间接推断提供了形态学证据。 (二)至今，对生前树突束化的演变和白质树突上突触分布的
刘芬[2]2004年在《NT-4、IGF-I在脊髓可塑性及针刺促进脊髓可塑性中关系的探讨》文中认为目的：探讨NT-4和IGF-I在正常猫、部分去背根猫及针刺部分去背根猫的L_6背根节(手术侧和非手术侧)和脊髓Ⅱ板层(L_3、L_5、L_6)与背核(L_3)表达的时空变化，以了解该两因子在脊髓可塑性及针刺促进脊髓可塑性中的关系。 方法：成年健康雄猫25只随机分为5组：即正常组，备用根术后7天组与14天组(动物行单侧部分去背根手术，即切除一侧L_1-L_5、L_7-S_2背根节，保留L_6为备用根)、针刺备用根术后7天组与14天组(动物行单侧部分去背根术后针刺)。动物于术后7天、14天分别处死，取正常组一侧、两备用根组手术侧与非手术侧、两针刺组针刺侧与非针刺侧的L_6背根节及各组L_3、L_5、L_6节段脊髓，-20℃恒冷箱切片，片厚20μm，分别用兔抗NT-4(1：200)、兔抗IGF-Ⅰ(1：200)抗体行免疫组化ABC法染色。观察、计数并比较各组背根节、脊髓实验侧Ⅱ板层(L_3、L_5、L_6)和背核(L_3)中NT-4、IGF-Ⅰ的分布、含量及时空变化。进行组间多个样本均数比较的单因素方差分析、q检验和组内两样本均数比较的配对t检验。 结果：1．NT-4与IGF-Ⅰ在部分去背根组和针刺组备用DRG的表达变化 1．1 NT-4和IGF-Ⅰ在成年猫L_6 DRG的大、中小神经元均有表达。去部分背根后7天，备用DRG(术侧)中NT-4阳性神经元数比正常组显著减少(P＜0.05)，但较非术侧明显增多(P＜0.05)；至术后14天，术侧备用DRG NT-4阳性神经元比正常组、7天组和非术侧均减少(P＜0.05)。IGF-Ⅰ在术后7天，术侧DRG阳性细胞数比正常组显著减少(P＜0.05)，与非术侧比无差异(P＞0.05)；术后14天，术侧DRG阳性神经元数与术7天组比无差异(P＞0.05)，但明显少于非术侧者(P＜0.01)。 1．2针刺备用根7天组，针刺侧DRG内NT-4阳性神经元数较正常组和术后7天组显著减少(P＜0.05)，较相应非针刺侧多(P＜0.05)；针刺14天组，针刺侧DRG阳性神经元数比术后14天和非针刺侧显著增高(P＜0.01)，且恢复至正常水平。IGF-Ⅰ在针刺备用根7天，硕士研究生学位论文N科、IGF-l在脊翻可塑性及针刺促进脊做可塑性中关系的探讨针刺侧DRG阳性神经元数较术后7天组显著增加(P<0.05)，但仍低于正常水平，且与相应非针刺侧无差异(P>.05):针刺14天，针刺侧DRG阳性神经元比术后14天亦增多 (P<0.01)，且恢复至正常水平，但较相应非针刺侧者少(P<0.05)。与针刺7天组比较，针刺侧DRG NT-4和IGF一I阳性神经元在针14天时均比针7天时显著增多(P<0.05)。2.NT~4、IGF一I在部分去背根组和针刺组脊髓n板层和背核的表达变化 2.1 NT一4和IGF一在成年猫脊髓n板层及背核的神经元和胶质细胞中均有表达。在术后两时相，L3背核IGF一I阳性神经元先减少后增加(P<0.05)，.且在术后14天时恢复至正常水平(P> .05);该两因子在L3、Ls、L6脊髓n板层的表达则无显著性差异(P>0.05)，且与正常组亦无差异(P>0 .05)。 2.2针刺7天，针刺侧脊髓L6n板层NT-4阳性神经元数较术后7天组及正常组显著增加(P<0.01)。针14天时，LS、L6n板层阳性神经元数较正常组及术后14天组相应节段均显著增加(P<0 .01)。针刺后L3背核NT一4阳性神经元数无显著性变化(P>.05)。工GF一工在针刺7天组，L6ll板层内阳性神经元较术后7天组及正常组显著增加(P<0.01)，L3背核阳性神经元数较术后7天组增多(P<0.05)，且恢复至正常水平;针刺14天组，L6n板层和L3背核阳性神经元均较术后14天组及正常组增多(P<0.01)。Lsn板层NT-4阳性神经元和L3背核IGF一I阳性神经元在针后14天时均比针后7天时显著增多(P<0.05)。 结论:部分去背根致备用背根节NT-4阳性神经元数进行性下降，而针刺可逆转这种下降，使针刺侧DRG内NT一4阳性神经元数经历了一个先减少后增加的双向式变化，且针刺后脊髓LS、L6ll板层NT一4阳性神经元数增加。提示NT一4与针刺促进脊髓可塑性有关。IGF一I表现为术后备用DRG阳性神经元数下降，但并未随时间变化而进行性减少，而针刺两时相均可显著增加术侧/针刺侧DRG内阳性细胞数，同时针刺亦促进L6n板层和背核IGF一工表达。提示针刺后IGF一I在背根节、脊髓L6ll板层和背核的表达变化可能与针刺促进脊髓可塑性有关。部分去背根术和针刺备用背根对非术侧和非针刺侧DRG两因子的表达亦有影响。提示非术侧和非针刺侧背根节NT一4和IGF一工亦可能参与了脊髓可塑性和针刺促进脊髓可塑性。
何玉琴[3]2004年在《鸡胚腺垂体激素特异性细胞的发生及蛋白转录因子Isl-1对其表达的调控性研究》文中进行了进一步梳理本文以不同发育时期鸡胚腺垂体为研究对象，采用免疫组织化学技术和免疫荧光标记法，对鸡胚腺垂体激素特异性内分泌细胞和蛋白转录因子Isl-1细胞的个体发生、发育和分布规律以及蛋白转录因子Isl-1与垂体特异性激素细胞类型发育表达的调控关系进行了系统的研究。结果证明：在鸡胚发育过程中，垂体激素特异性内分泌细胞发生的时间和顺序依次为：促黄体生成素（LH?）细胞—第4.5天，糖蛋白激素α亚单位（Common α）细胞—第6.5天，生长激素（GH）细胞—第9.5天，促肾上腺皮质激素（ACTH）细胞、促卵泡剌激素（FSHβ）细胞和促甲状腺激素（TSHβ）—第10.5天，催乳素（PRL）细胞—第14.5天；这些特异性内分泌细胞发生开始时的数目很少，随胚龄增加而明显增加，细胞体积增大，细胞浆增多，细胞着色程度加深，细胞增殖、分化和功能活动在胚胎的中后期最为活跃；各类细胞的平均直径，从大到小依次为：GH细胞，PRL细胞，TSHβ细胞，ACTH细胞和促性腺激素细胞；在胚胎时期，激素阳性细胞率（激素细胞占腺垂体细胞总数的百分比），从多到少，依次为，LHβ细胞（42.77%），Common α细胞（41.82%），PRL细胞（18.85%），GH细胞(18.60%)，FSH细胞（15.35%），ACTH细胞（11.02%）和TSH细胞(10.75%)；激素特异性细胞在发育过程中，ACTH细胞和PRL细胞全部分布于腺垂体前叶，GH细胞全部分布于腺垂体后叶，LHβ细胞和Common α细胞广泛分布于腺垂体的前、后两叶，FSHβ细胞分布于前、后叶，后叶细胞数明显多于前叶，TSHβ细胞主要分布于腺垂体前叶的外侧缘，明显可见有少量细胞分布于后叶背侧缘。TSHβ细胞的特殊分布突破了前人关于TSHβ细胞仅仅分布于腺垂体前叶的研究结论。鸡胚腺垂体蛋白转录因子Isl-1细胞发生在胚胎发育的早期—第6.5天；Isl-l阳性细胞率，在胚胎发育的第6.5天至第10.5天显著增加（P<0.05），第10.5天增加到整个孵化期的最大值，第12.5天至出生，Isl-l阳性细胞率无显著变化（P>0.05），但Isl-1细胞核染色程度逐渐变淡；Isl-1细胞分布于整个腺垂体后叶，前叶阳性细胞数量少。以上研究结果阐明，Isl-1细胞的增殖、分化过程和功能活动主要发生在发育的第10.5天以前，在胚胎早期和中期，Isl-1参与垂体细胞的增殖和分化，在后期，Isl-1参与维持已分化细胞表型和垂体内<WP=8>分泌细胞功能活动； Isl-1细胞在垂体内的分布特点揭示，Isl-1决定垂体细胞的位置发育。为进一步分析Isl-l在发育的胚胎腺垂体细胞中的作用，本研究应用免疫组织化学双染技术对Isl-l在垂体激素特异性细胞类型的表达、分布进行了共存定位研究。研究结果首次证明： Isl-l表达在鸡胚腺垂体LHβ、TSHβ和FSHβ细胞核中，在鸡胚腺垂体的GH细胞、ACTH细胞和PRL细胞内均未见到Isl-l的表达；垂体蛋白Isl-1表达在LHβ、TSHβ和FSHβ细胞的时间和顺序依次为：Isl-l+/ LHβ+双染细胞—第6.5天，Isl-l+/TSHβ+双染细胞—第10.5天，Isl-l+/FSHβ+双染细胞—第14.5天。胚胎发育的第14.5天，Isl－1表达在激素细胞类型的双染细胞率，最多的是Isl-l+/FSHβ+双染细胞（64.30％），其次是Isl-l+/LHβ+双染细胞（63.07％）和Isl-l+/TSHβ+双染细胞（49.82％）；在整个胚胎发育期间，腺垂体后叶的Isl-l+/LHβ+细胞和Isl-l+/FSHβ+细胞数明显多于腺垂体前叶。综上研究阐明：在发育的鸡胚腺垂体中，Isl-l以特定时间和空间的方式表达在LHβ、TSHβ和FSHβ细胞核中，它对鸡胚垂体特异性激素细胞的分化、增殖和表型的维持发挥着重要作用；蛋白转录因子Isl-l在调控这三种垂体激素中是一个重要的调节因子。 Isl-l可能作为分子信号，共同调控垂体的个体发生和LHβ、TSHβ和FSHβ细胞的增殖和分化，并维持着这些已分化激素细胞的表型和正常的分泌功能。
李秋玲[4]2018年在《Wnt3a过表达对脊髓连合纤维投射及神经元迁移的影响》文中研究表明背景在脊髓发育过程中,产生于背部的连合纤维沿固定轨迹投射到脊髓对侧,而神经元从神经上皮祖细胞区域迁移到正确的位置,才能形成正确的组织结构和神经回路,发挥脊髓信息传递的功能。Wnt3a作为Wnt家族的重要成员,参与多种细胞功能,包括自我更新、增殖、分化以及迁移。有关Wnt3a在脊髓损伤修复方面的功能已有研究,但其在胚胎脊髓发育过程中功能(如调控神经元迁移、连合纤维投射等)研究国内外尚属空白。目的1.研究Wnt3a异位表达对脊髓连合纤维投射及神经元迁移的影响。2.探索Wnt3a过表达对神经细胞及相关分子表达的影响。方法1.通过RNA提取、PCR扩增、酶切和连接等常规分子生物学技术将Wnt3a基因克隆到pCAGGS-EGFP载体上,再进行菌落PCR和酶切验证,最后进行基因测序。2.利用脂质体转染技术将Wnt3a过表达载体(pCAGGS-EGFP-Wnt3a)转入SH-SY5Y细胞,提取蛋白,再利用Western blot技术检测Wnt3a表达情况。另外,利用鸡胚活体原位电转基因技术将pCAGGS-EGFP-Wnt3a转入E2.8鸡胚脊髓中,E4取材切片,通过免疫荧光检测Wnt3a表达情况。3.将pCAGGS-EGFP-Wnt3a或pCAGGS-EGFP转入E2.8鸡胚脊髓中,E6时取绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)阳性胚胎,一部分材料进行组织切片,每组至少5个材料,利用免疫荧光检测Wnt3a,Pax7,Map2和MNR2的表达情况,同时利用GFP示踪检测Wnt3a异位表达后对神经元形态及迁移的影响。另一部分材料用于神经元的提取培养,检测体外条件下Wnt3a异位表达对神经元形态的影响。4.将pCAGGS-EGFP-Wnt3a或pCAGGS-EGFP转入SH-SY5Y细胞,利用免疫荧光检测Tubulin的表达,并观察细胞形态变化;提取蛋白,利用Western blot技术检测β-catenin,CyclinD1,C-myc,PCNA,Caspase3和Bcl-2的表达情况。结果1.菌落PCR,酶切验证以及基因测序结果表明成功构建了pCAGGS-EGFP-Wnt3a载体。2.pCAGGS-EGFP-Wnt3a转染的SH-SY5Y细胞的Western blot及脊髓切片免疫荧光结果表明,Wnt3a在SH-SY5Y细胞和脊髓中表达量增加。3.在E6鸡胚脊髓中,Wnt3a异位表达后,连合纤维未投射到对侧,绝大多数GFP阳性神经元滞留在VZ区,且无法伸出突起或伸出较短的突起。免疫荧光结果表明,Map2阳性表达区域减少,MNR2阳性神经元数量明显减少且大部分滞留在VZ区,而Pax7的表达没有明显差异。脊髓神经元分离培养的结果显示,pCAGGS-EGFP-Wnt3a转染的神经元呈球形或伸出较短的突起。4.pCAGGS-EGFP-Wnt3a转染的SH-SY5Y细胞的Tubulin免疫荧光结果显示,绝大部分细胞无法伸出突起或突起变短;Western blot的结果表明实验组中β-catenin,C-myc以及PCNA的表达量明显增加,Bcl-2的表达量下调,而CyclinD1和Caspase3的表达量没有明显差异。结论1.Wnt3a异位表达抑制脊髓连合纤维投射;2.Wnt3a异位表达调节神经元形态进而影响迁移;3.Wnt3a通过β-catenin信号通路调控细胞增殖与凋亡。
陈菁[5]2005年在《联合应用神经营养因子对周围神经再生的影响及其可视化研究》文中提出神经营养因子(Neurotrophic Factors,NTF)是机体产生的调控神经细胞存活、生长、分化的一类可溶性蛋白质,周围神经损伤后内源性神经营养因子的不足是导致神经再生障碍及功能恢复不良的重要原因,联合应用多种外源性神经营养因子促进神经再生已逐步成为进一步提高神经修复疗效的重要方法。但目前有关多种神经营养因子的联合应用还存在需要进一步研究的问题:其一是不同种类的外源性神经营养因子之间的配方以及使用的时间和剂量问题。各种神经营养因子对神经元的作用具有一定选择性和交叉性,选择适当的神经营养因子组合才能发挥协同作用,产生复合生物学效应。此外,由于周围神经损伤后不同神经营养因子的表达变化差异很大,有的表达增加,有的表达降低,且增加(或降低)的幅度和时相有所不同,必须根据各种因子在损伤后表达的变化特点有针对性地确定该因子使用的时间和剂量,才能最大效率地促进神经再生。其二是不同神经神经因子表达的检测问题。以往由于不同的研究者所采用的实验动物、损伤模型、表达检测方法和定量方法各不相同,对不同神经营养因子的表达,其结果之间的可比较性受到影响,甚至针对同一种神经营养因子在神经再生过程中的变化趋势,不同研究者的实验结果也不尽相同。因此,在相对一致的条件下同时检测多种神经营养因子的共表达对准确了解神经再生过程中各种神经营养因子的变化规律尤为重要。其三是再生神经结构重建的评价问题。现有的二维平面观察难以准确、完整地反映再生神经组织的解剖结构。针对上述三个问题,本课题以三种典型的神经营养因子NGF(nerve growth factor,神经生长因子)、CNTF(ciliary neurotrophic factor,睫状神经营养因子)和GDNF(glial cell line- derived neurotrophic factor,胶质细胞源性神经营养因子)为研究对象,基于大鼠背根神经节感觉神经元(dorsal root ganglion neurons,DRGn)、脊髓前角运动神经元(spinal motor neurons,SMN)与雪旺细胞(Schwann cells,SCs)共同培养模型建立多种神经营养因子共表达的可视化和数量化的检测分析方法,探明三种神经营养因子共表达的变化规律;在此基础上根据NGF、CNTF和GDNF共表达的变化特点,确定联合应用外源性NGF、CNTF和GDNF促进大鼠坐骨神经再生的合理给药方式,并通过体内外实验阐明并验证联合应用外源性NGF、CNTF和GDNF对周围神经再生的协同促进作用;最后从方法学角度探讨周围神经组织显微结构的三维成像技术,从而更为准确地评价神经营养因子对再生神经结构恢复的促进作用。经过上述研究获得如下结果和结论:(1)多种神经营养因子在活细胞条件下的
刘佳利[6]2005年在《雌激素、雄激素对鸡胚背根神经节和垂体发育的作用及相关机制的研究》文中研究表明性激素(包括雄激素和雌激素)参与成年动物垂体激素分泌和中枢神经系统的发育和功能调节。但是,性激素对胚胎发育过程中外周神经和内分泌系统的调节功能和相关的作用机理尚不清楚。本研究通过体内实验、体外实验研究了性激素对鸡胚垂体细胞和鸡胚外周神经元的增殖、分化的调节功能,通过在体注射性激素受体的特异抑制剂来研究性激素对外周神经元作用的相关机理,并通过检测鸡胚和绵羊胚胎垂体发育过程中雌激素受体的变化对雌激素调节内分泌细胞的作用机理进行了比较研究。取得的主要研究结果包括下列几方面: 一、外源雌激素能显著地促进鸡胚早期的细胞增殖和细胞凋亡来影响背根神经节(dorsal root ganglia, DRG)神经元的发育过程。外源性雄激素能够促进C5DRG和C2DRG的细胞增殖,但抑制其细胞凋亡。雌、雄激素对DRG神经元的发育过程的影响具有剂量依赖性,大剂量的外源激素作用减弱,C5DRG和C2DRG对雌激素的作用表现出不同的敏感性。 二、雌、雄激素受体特异性抑制剂它莫西芬(TAM)和佛他胺(FLU)并不能阻断雌、雄激素对C2和C5DRG细胞增殖和凋亡的影响,而免疫组织化学结果表明雌激素受体、雄激素受体和芳香化酶在C2DRG与C5DRG中并无表达。上述结果说明,雌、雄激素通过非基因组机制来对早期鸡胚C2和C5DRG的细胞增殖和凋亡发挥作用,且雄激素直接作用于DRG细胞,而并非转化为雌激素再发挥其作用。 三、鸡胚发育过程中其腺垂体一直存在细胞增殖,随着胚胎发育进程,增殖细胞细胞阳性比率逐渐下降,至新生鸡下降至22%。鸡胚腺垂体中增殖细胞的分布并无明显的区域性。在成年鸡垂体中存在大量增殖细胞,且主要分布于腺垂体远侧部前叶,双标记方法证明,增殖细胞主要为催乳素细胞中。一定剂量E2处理早期鸡胚后,鸡胚拉特克氏囊(RP)中有丝分裂细胞及S期细胞数目明显增加。10nM的外源雌激素明显促进第10.5天鸡胚垂体细胞增殖。 四、鸡胚发育至第6.5天时,仅在RP腹侧有少量雌激素受体α(ERα)阳性细胞。随着胚胎发育的进程,ERα阳性细胞比率逐渐升高,并分布于整个腺垂体,但在远侧部后叶分布多于前叶。免疫组织化学双标记的结果证明,ERα在垂体中所表达的细胞类型主要是合成黄体生成素(LH)的促性腺激素细胞,其细胞比率随发育进程逐渐升高,在出壳鸡垂体中达到了57%。另在鸡胚发育后期有少量促甲状腺激素(TSH)细胞和催乳素(PRL)细胞也表达ERα。但整个鸡胚垂体发育过程中生长激素(GH)细胞和促肾上腺皮质激素(ACTH)细胞中并未检测到ERα的表达。外源雌激素能够促进鸡胚垂体ERα的发生。在成年鸡垂体中约24%的细胞表达ERα,雌雄个体间并无明显差异。免疫组织化学双标记的结果证明,ERα在成年鸡垂体中所表达的细胞类型主要是LH细胞,而产蛋母鸡中双标记细胞显著高于成年公鸡。成年鸡垂体中的其他激素细胞中并不表达ERα。AR与垂体激素免疫双标记结果证明PRL细胞和GH细胞均不表达AR,AR主要存在于LH细胞、TSH细胞和ACTH细胞中。ERα与AR的双标记结果证明二者并不在同一细胞中表达。 五、胎羊垂体中ERα的表达变化规律与鸡胚垂体中ERα的变化规律相似,不同发育时期胎羊垂体中几乎所有的ERα阳性细胞均表达Islet-1,提示绵羊胎儿垂体中Islet-1可能参与调节ERα的发生和表达,Islet-1可能通过与ERα共同作用来调节促性腺激素细胞和促甲状腺激素细胞的增
王特为[7]2004年在《针刺对备用DRG生长的影响及内源性c-fos、c-jun和GDNF、NT-4的作用初探》文中进行了进一步梳理目的：建立成年猫背根节体外培养技术，探讨部分背根切除和针刺对备用背根节(DRG)生长的影响及内源性c-fos、c-jun和GDNF、NT-4对备用DRG的作用。 方法：成年健康雄猫10只。随机分2组，每组5只：正常对照组、针刺备用根模型组(行双侧部分去背根手术，切除双侧L_1-L_5，L_7-S_2 DRG，保留L_6为备用根，针刺一侧备用DRG外周支配区内的两组穴位：足三里和悬钟，伏兔和三阴交。针刺频率98次／分，时间为30分钟，每15分钟时交换电极，每天针刺1次，每次针刺一组穴位，两组穴位交替进行，动物术后存活7天)。两组动物在无菌条件下取出双侧L6 DRG，分别经0.25％胶原酶(pH 7.4由DMEM配制)消化3小时，经离心漂洗，最后加入神经元培养液制成5-10×10~5的单细胞悬液，接种于包被有多聚赖氨酸和层粘连蛋白的48孔板中，入37℃ 5％CO_2恒温培养箱中进行体外培养。24h全量换液，同在针刺侧L6 DRG的一部分培养孔内分别加含抗c-Fos、c-Jun和GDNF、NT-4抗体1∶100培养液，作为抗体封闭组。分别于1、3、5、7天250倍下每组随机测量30个视野的细胞突起长度。用抗NSE抗体行免疫细胞化学ABC法染色进行鉴定。将所得的数据用spss统计软件包进行多个样本均数间比较的方差分析、q检验。 结果：1d：正常组，只有少数细胞有生长锥或者有突起生长，突起平均长度为26.58±10.05μm；备用根组，有一半左右的细胞有生长锥的出现或突起生长，突起平均长度为53.84±13.97μm；针刺组，大部分细胞有生长锥的出现或有突起生长，突起的平均长度为72.92±16.35μm。各组神经突起长度经统计学分析P＜0.05。但由于标准差太大，故实际意义不大。 3d：正常组，有突起生长的细胞增多，突起平均长度约为56.66±16.52μm，部分细胞的突起开始相互连接；备用根组，大部分细胞有突起生长，突起平均长度约为106.64±17.02μm，大多数细胞突起开始连接成网状，神经网络开始形成；针刺组，硕士研究生学位论文针刺对备用DRG生长的影响及内源性c-fos、c-jun和GDNF、NT-4的作用初探其突起平均长度约133.56士15.67林m，可见多数细胞的突起相互连接成网状，神经网络初步形成。以上三组突起长度经统计学分析P<0.05。对于24h后加有各抗体的(抗c一Fos、c一Jun、GDNF、NT-4抗体)各组细胞而言，与相应针刺组相比较无明显差异。 5d:正常组，突起平均长度约为85.86士18.40林m，大部分细胞的突起相互连接，神经网络初步形成;备用根组，突起平均长度约为138.56士12.27林m，神经网络形成;针刺组，其突起长度约为胞体195.22士14.29林m，形成完整的神经网络。以上三组突起长度经统计学分析P<0.05。对于加有抗体的各组，与针刺组相比较p>.05，尽管此时无统计学意义，但各抗体组细胞突起的平均长度开始小于针刺组。 7d，正常组，突起平均长度为106.64士14.99拼m，形成较为完整的神经网络;备用根组，突起平均长度约为155.36士15.16林m，形成完整的神经网络:针刺组，其突起长度约为205.44士19.76林m，神经网络密集而清晰。以上突起长度三组经统计学分析P<0.05。对于加有抗体的各组细胞突起长度分别如下:抗c一Fos抗体组1 85.68土15.50林m、抗e一Jun抗体组178.54士16.15林m、抗GDNF抗体组155.68士15.06协m、抗NT-4抗体组1 91.14士17，38林m，各组l’edp>0.05。针刺组与抗NT-4抗体组ltijp>0.05，而针刺组与其余三抗体组间p<0.05。 培养的DRG细胞经抗NSE抗体行免疫细胞化学ABC法。可见95%以上NSE阳性反应的细胞为典型的体外培养的DRG神经元;另有极少数NSE阳性的类成纤维型细胞。 结论:我们建立了一种体外培养成年猫DRG神经元的可靠方法。部分去背根术后，各时间段备用DRG神经元的突起比正常DRG长(P<0.05)，提示部分背根切断致DRG生长活性增加。针刺备用根后，DRG神经元突起比备用DRG组长(P<0.05)，提示针刺促进DRG神经元的生长，进而促进脊髓可塑性。从各抗体组的生长状况与针刺组比较发现:cjun、c一fos、GDNF可能分别在DRG和脊髓可塑性中发挥了一定的作用。而NT-4在DRG生长中发挥的作用却不明显。
周豪丽[8]2007年在《bFGF在成年大鼠脊髓全横断损伤后尾侧脊髓的表达变化》文中指出目的：探讨成年大鼠脊髓全横断损伤后不同时相碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及其mRNA在脊髓损伤位点尾侧的表达变化。方法：成年SD大鼠50只，随机分为：假手术组、脊髓全横断损伤(T_(13)-L_1完全横断脊髓)后3天组、7天组、14天组和21天组。每组10只动物(5只用于免疫组化，5只用于RT-PCR)，术后3天、7天、14天及21天作BBB评分及皮层体感诱发电位的检测。分别取尾侧的脊髓，行免疫组织化学ABC法染色和RT-PCR的检测。光镜下观察各组脊髓内bFGF的分布及脊髓全横断损伤后损伤位点尾侧不同时间bFGF在脊髓腹角、背角及Ⅷ、Ⅸ板层的阳性细胞数的变化。bFGF目的条带用凝胶成像系统软件进行分析，以β-Actin为内参，测定目的条带的光密度值。采用单因素的方差分析及LSD-q检验进行显著性检验。结果：(1)运动功能评价显示：脊髓全横断后，大鼠双后肢运动功能的BBB评分在损伤后3天评分为0，然后逐渐升高至7天为0.78±0.25，14天为2.41±0.72，21d达3.55±0.50。BBB评分经统计学处理显示，随时间的延长运动功能有部分恢复，且有显著性差异(P＜0.05)。(2)．感觉功能评价显示：皮层体感诱发电位在损伤各组均未检测到。(3)．免疫组化结果显示：在损伤位点尾侧，腹角和Ⅷ、Ⅸ板层阳性神经元数在术后7天明显增多且达高峰(P＜0.05)，此后维持在高于假手术组水平至21天。与腹角比较，背角bFGF阳性神经元数在损伤后3天至21天均较假手术组明显降低(P＜0.05)。(4)．RT-PCR显示：在损伤位点尾侧，bFGFmRNA的水平术后3天组较假手术组明显增高(P＜0.05)，14天又回到假手术组水平，并维持至21天。结论：(1)脊髓全横断损伤后，大鼠后肢运动功能从7天至21天有部分的恢复，而感觉功能没有任何的恢复。提示在脊髓全横断损伤后，感觉功能在短期内很难恢复，而运动功能却随着时间的延长有部分自主功能的恢复。(2)在损伤位点的尾侧，腹角和Ⅷ、Ⅸ板层bFGF阳性神经元数在损伤后7天明显增多并达高峰，而后维持在高于假手术水平至21天。而在损伤位点的尾侧背角，各损伤组的阳性神经元数在损伤后3天至21均较假手术组明显下降。在损伤位点尾侧脊髓，bFGF mRNA的水平在术后3天明显增高，14天又回到假手术组水平。以上结果提示内源性bFGF的表达可能与全横断损伤后脊髓的可塑性有关。
参考文献：
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[7]. 针刺对备用DRG生长的影响及内源性c-fos、c-jun和GDNF、NT-4的作用初探[D]. 王特为. 昆明医学院. 2004
[8]. bFGF在成年大鼠脊髓全横断损伤后尾侧脊髓的表达变化[D]. 周豪丽. 昆明医学院. 2007