白城医学高等专科学校 吉林白城 131300
摘要：[目的]优化酶解法提取五味子有效成分提取工艺。[方法] 含量测定采用高效液相色谱法，本实验以正交设计进行优选，采用五味子醇甲量为衡量指标。[结果]其最佳工艺条件为：酶解时间60min，纤维素酶用量为1.0%，酶解温度为40℃。
关键词：五味子；五味子醇甲；纤维素酶
五味子是木兰科植物干燥成熟的果实，具有收敛固涩、益气生津、补肾宁心的功效。五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素及五味子乙素等是五味子主要的活性成分[1]。研究提取五味子主要活性成分的方法有较大差异，提取方法形式各异，提取方法最多的是水煎煮提取法。由于采用水煎煮提取法提取五味子醇甲得率偏低，现在广泛采用醇提取法提取，但与水提取法相比较，醇提取法有提取成本较高，后续处理过程复杂等诸多缺点。
纤维素是植物细胞壁的主要成分，是胞内有效成分溶出的主要屏障，利用纤维素酶对细胞壁进行酶解，有利于胞内有效成分的溶出。采用酶解法提取五味子有效成分，可较温和地溶解五味子细胞壁，使细胞内有效成分迅速释放出来，不仅能减少操作工序，降低生产成本，而且能增高提取率[2-3]。
1 仪器、药材、试剂
1.1仪器
安捷伦1260高效液相色谱仪；RE-52AA型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；98-1-B型电子调温电热套（天津市泰斯特仪器有限公司）；DK-98-1型电热恒温水浴锅（天津市泰斯特仪器有限公司）。
1.2药材、试剂
五味子，白城合力医药药材公司采购；纤维素酶（吉林省昆仑生物科技有限公司，批号：20150917，酶活力单位900u/g）；五味子醇甲对照品（中国药品生物制品检验所，批号：818-9401）；甲醇为色谱纯；其他试剂均为分析纯。
2五味子醇甲提取工艺优化
2.1 溶液的配制
对照品溶液的制备
精密称量五味子醇甲对照品3.2mg于10ml容量瓶中，然后用甲醇将其溶解并稀释至刻度，震荡摇匀，作为照品溶液备用，浓度为0.32mg/ml。
样品溶液的制备
称取五味子药材10g，将其置至于250ml烧杯中，向烧杯中加入10倍量的水，再加酶，回流提取1h，过滤，同等条件，重复一次，合并两次提取液，浓缩至25ml，蒸干，残渣用20ml甲醇采取超声震荡处理30min将其溶解，离心，取上清液，定容至25ml。
2.2 系统适用性试验
按照上述色谱条件，得五味子醇甲对照品、样品色谱图，按数值计算其理论塔板数（n）均大于2000。实验证明该色谱条件下，被分离样品分离较好。
2.3 线性关系的考察
分别精密量取对照品溶液1，2，4，6，8，10?L，以对照品峰面积（y）与进样量（x）做线性回归，其回归方程为y = 649998x - 25996，r = 0.9998，试验结果表明，在1ug～10ug范围内进样量与峰面积线性关系良好。
2.4 精密度考察
精密量取对照品溶液，重复进样5次，每次10 ?L，测定结果为RSD =0.28%，表明精密度良好。
2.5 稳定性考察
精密量取同一供试品溶液，分别于0，4，8，12，16 h，进样10 ?L，测定结果为RSD=0.54%，说明供试品溶液在16 h内较为稳定。
2.6 重现性考察
精密称取同一批次样品5份，按供试品溶液制备方法操作，分别进样10 ?L，测定结果RSD为0.79%，说明该方法重现性良好。
3 工艺优化
3.1 试验方案的设计
采用正交设计试验，以样品中五味子醇甲总量为评价指标，优选五味子酶解法提取的最佳工艺。在酶解法工艺中，酶解时间，酶用量，酶解温度是影响五味子提取率的主要因素。因此，选用L9（34）正交设计安排实验。因素水平设置见表1。
3.2 结果分析
以各实验组五味子醇甲的含量为指标进行分析，方差分析结果见表3。表3结果表明，因素A、C对五味子醇甲提取量无显著性影响，B因素对五味子醇甲提取量有显著性影响，进一步进行多水平均值检验，结果见表4。表4结果表明，A1与A2、A3间均无显著性差异，A2与A3之间有显著性差异，且A3 > A1 > A2，考虑到实际生产，故选择A1；B1与B2、B3间均有显著性差异，B2与B3间无显著性差异，且B3 > B2 > B1故应选择B2；C1、C2、C3间均无显著性差异，考虑实际生产，故选择C1，故最佳提取工艺为A1B2C1，即酶解时间60min，纤维素酶用量为1.0%，酶解温度为40℃。
4结论
4.1 酶解法提取五味子醇甲的最佳工艺条件为，酶解时间60min，纤维素酶用量为1.0%，酶解温度为40℃。
4.2 蛋白质是酶的主要成分，其活性与温度、酸碱度等息息相关，本文仅讨论了酶解时间，酶解温度和酶的用量三个因素对提取五味子醇甲的影响。
4.3实验证明采用酶解法提取五味子中五味子醇甲，对提取设备无特殊要求，简便、高效，可探索用于工业化大生产。
参考文献：
[1] 明海泉，夏光成.五味子研究进展.中成药，1988，19（5）：37-41.
[2] 傅博强，谢明勇，周鹏，等.纤维素酶法提取茶多糖，无锡轻工大学学报，2002，7（21）：4.
[3] 宋波，邓晓皋，施雷霆.纤维素酶的研究进展.上海环境科学，2003，22（7）：491-495.
论文作者:岳显文
论文发表刊物:《健康世界》2016年第10期
论文发表时间:2016/7/18
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