（1海南制药厂有限公司；海南五指山572200；2广东农工商职业技术学院；广东广州510416）
摘要：以胆木叶、胆木树茎、胆木树皮、大枝茎、大枝皮、小枝茎和小枝皮为原料，通过无水乙醇和水两种溶剂提取，分别得到提取液。测定其对DPPH结合能力反映其自由基清除活性。药材的7个部位均具有清除自由基和抗氧化活性。水提取液清除DPPH自由基能力强弱顺序为：胆木叶＞小枝皮＞大枝皮＞胆木树皮＞大枝茎＞小枝茎＞胆木树茎；水提取液总还原力测定中抗氧化性强弱顺序为：胆木叶＞小枝皮＞大枝皮＞胆木树茎＞胆木树皮＞大枝茎＞小枝茎。醇提取液清除DPPH自由基能力强弱顺序为：大枝皮＞胆木叶＞小枝皮＞胆木树皮＞胆木树茎＞大枝茎＞小枝茎；醇提取液总还原能力测定中抗氧化性强弱顺序为：胆木叶＞大枝皮＞小枝皮＞胆木树皮＞胆木树茎＞大枝茎＞小枝茎。
关键词：胆木；叶；枝茎；皮；抗氧化性
胆木是黎族民间的常用抗菌药，胆木浸膏糖浆、胆木注射液、胆木饮片等已在临床应用多年，疗效确切。实际生产中多以胆木的茎作为原料入药，消耗量大，致使胆木药材资源供应不足，而其它部分则丢弃不用。研究证明胆木叶的不同溶剂提取物也有抗氧化作用[1]。
1. 实验部分
1.1 材料、试剂及仪器
原料采自七年树龄的胆木，采集地为海南五指山市，采集时间2015年11月。
1-二苯基-2-苦基苯肼(DPPH)，购自上海蓝季科技发展有限公司，三氯乙酸、三氯化铁、铁氰化钾、无水乙醇、二水合磷酸二氢钠、十二水合磷酸氢二钠，均为分析纯。
电子天平CP124S，集热式恒温加热磁力搅拌器DF-101S，紫外分光光度计GoldSpectrumlab 54，台式离心机H1650-W，循环水式真空泵SHZ-D(Ⅲ)。
1.2 胆木药材不同部位水提取液及醇提取液的制备
分别取0.25g剪碎（10目）的胆木各部位材料，加入25ml水，于90℃水浴加热0.5h，加入25ml无水乙醇于90℃水浴加热0.5h，趁热抽滤分别得到各部位的水提取液及醇提取液。随后将提取液分别稀释、浓缩，得到0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2mg/ml梯度浓度的溶液。
1.3 胆木药材不同部位抗氧化能力的测定
1.3.1 清除DPPH自由基法：配制浓度为0.2mmol/L的DPPH。取1ml蒸馏水加入1mlDPPH，混合均匀静置10min后在517nm处测得其吸光度为A1；取不同浓度的水提取液(醇提取液)1ml，加入1mlDPPH测得其吸光度为A2，取不同浓度的水提取液(醇提取液)1ml加入1ml无水乙醇测得其吸光度为A3。做三个重复。清除率计算公式为[2]：R1={A1-(A2-A3)}/A1×100%
1.3.2 总还原能力测定法：取不同浓度的水提取液(醇提取液)0.25ml，依次加入1ml磷酸缓冲液(0.2mol/L，pH6.6)，随后加入1ml浓度1%的铁氰化钾，混匀后50℃水浴20min，向反应液中加入0.5ml浓度10%的三氯乙酸，4000r/min离心10min，取上清液1ml，依次加入1ml蒸馏水，浓度为0.1%的三氯化铁混匀。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆在700nm处测得其吸光值为A1；将不同浓度的水提取液(醇提取液)替换成Vc，测得其吸光值为A2；将不同浓度的水提取液(醇提取液)替换成无水乙醇，测得其吸光值为A3，还原力计算公式为[3,4]：R2 =(A1-A3)/A2×100%
2. 结果与分析
2.1 DPPH自由基清除率的测定
当向DPPH自由基溶液中加入自由基清除剂时，深紫色会被还原成黄色。选择清除率为50%时的抗氧化剂浓度IC50作比较指标，该值越小，其抗氧化性越强。由表2-1中胆木药材各部位水提取液的IC50值可看出，胆木药材各部位水提取液清除DPPH自由基能力强弱顺序：胆木叶＞小枝皮＞大枝皮＞胆木树皮＞大枝茎＞小枝茎＞胆木树茎。由表2-2中胆木药材各部位醇提取液的IC50值可得出，胆木药材各部位醇提取液清除DPPH自由基能力强弱顺序：大枝皮＞胆木叶＞小枝皮＞胆木树皮＞胆木树茎＞大枝茎＞小枝茎。
从图2-1也可看到各浓度下不同部位所对应的DPPH清除率大小，以及随着浓度的增加，DPPH清除率的增加。水提取液及醇提取液的结果都显示：胆木叶、大枝皮和小枝皮的DPPH清除率都很高，强于其余四个部位（图2-1，图2-2）。结合表2-1及表2-2的数据，可看到胆木叶、大枝皮和小枝皮的IC50数值之间无显著差异。
2.2 总还原能力（铁氰化钾还原率）的测定
在偏酸性的环境下，往不同浓度的样品中加入铁氰化钾后，铁氰化钾的Fe3+会被样品还原，生成Fe2+；没反应的铁氰化钾被加入的三氯乙酸反应生成沉淀，Fe2+与后面加入的三氯化铁生成普鲁士蓝，在700nm处有最大吸光值。表2-3反映了胆木各部位材料水提取液还原力大小，顺序依次为：胆木叶＞小枝皮＞大枝皮＞胆木树茎＞胆木树皮＞大枝茎＞小枝茎。而各部位醇提取液的还原力大小顺序为：胆木叶＞大枝皮＞小枝皮＞胆木树皮＞胆木树茎＞大枝茎＞小枝茎（见表2-4）。
总还原能力的测定结果中（图2-3，图2-4），无论是水提取液还是醇提取液，不同浓度下胆木叶的还原力均是最高的，枝皮次之。从表2-3，表2-4可看到，与测定DPPH清除率结果一致，胆木叶、大枝皮和小枝皮之间的还原力无显著差异。同时在水提取液测定总还原力中，胆木树皮和胆木树茎的还原力是没有显著差异的，大枝茎和小枝茎的还原力也是没有显著差异的；在醇提取液测定中还原力中，则是胆木树皮、胆木树茎和大枝皮之间还原力没有显著差异。
3 .结果与讨论
以胆木药材七个部位的材料为原料，分别进行水提取和醇提取，得到的提取液都具有清除自由基和抗氧化活性。水提取液清除DPPH自由基能力强弱顺序为：胆木叶＞小枝皮＞大枝皮＞胆木树皮＞大枝茎＞小枝茎＞胆木树茎；水提取液总还原力测定中抗氧化性强弱顺序为：胆木叶＞小枝皮＞大枝皮＞胆木树茎＞胆木树皮＞大枝茎＞小枝茎。醇提取液清除DPPH自由基能力强弱顺序为：大枝皮＞胆木叶＞小枝皮＞胆木树皮＞胆木树茎＞大枝茎＞小枝茎；醇提取液总还原能力测定中抗氧化性强弱顺序为：胆木叶＞大枝皮＞小枝皮＞胆木树皮＞胆木树茎＞大枝茎＞小枝茎。比较以上结果，胆木叶、大枝皮和小枝皮的抗氧化性差异不显著，均强于其余四种材料，胆木树皮次之，胆木树茎、大枝茎和小枝茎抗氧化性较前四者弱。大枝茎与胆木树茎的自由基清除和抗氧化活性接近，生理部位接近，最可能用做胆木药材。
参考文献：
[1] 张伟敏，肖健雄，符致坚，蒋盛军，胆木叶提取物的抗氧化活性研究，林产化学与工业，2009（8），（29）：82-86
[2] 黄进，杨国宇，李宏基，熊程辉，李留安，吴玉臣，抗氧化剂作用机制研究进展，自然杂志，2004（2）：74-78
[3] 王晓宇，杜国荣，李华火，抗氧化能力的体外测定方法研究进展，食品与生物技术学报，2012（3）
[4] 孙文静，不同杀青方式制备桑叶茶及其体外抗氧化作用研究：硕士学位论文，西南大学，2014
论文作者:李正能1 洪永雪1 林汝君1 林芬丹2
论文发表刊物:《医师在线》2017年9月下第18期
论文发表时间:2017/12/7
标签：胆木论文; 提取液论文; 小枝论文; 树皮论文; 浓度论文; 自由基论文; 能力论文; 《医师在线》2017年9月下第18期论文;