大庆华科股份有限公司药业分公司 黑龙江大庆 163316
摘要：目的：建立高效液相色谱法测定注射用盐酸头孢吡肟中N-甲基吡咯烷含量测定的方法。方法：采用Metrosep C4-100/4.0色谱柱（4.0*100mm，5um），流动相为0.01mol/L硝酸溶液-乙腈（99：1），流量为0.5 mL/min，柱温为35℃，电导检测。结果：在选定的色谱条件下，主成分能与各杂质峰良好分离，N-甲基吡咯烷的质量浓度在0.0088～0.088mg•mL-1范围内与其峰面积积分值呈良好的线性关系（r=0.9998），平均回收率为96.17%，其RSD=1.42%（n=9）。结论：本方法简便、准确、灵敏，可有效控制注射用盐酸头孢吡肟产品质量。
关键词：注射用盐酸头孢吡肟；N-甲基吡咯烷；电导检测；高效液相色谱法
前言：盐酸头孢吡肟是β-内酰胺类药物，属第四代头孢菌素类抗生素，具有很好的抗菌作用，临床上抗菌活性较高的一种广谱抗菌药物。注射用盐酸头孢吡肟为盐酸头孢吡肟与精氨酸制成的无菌粉末，。N-甲基吡咯烷是制造盐酸头孢吡肟的一种原料，为盐酸头孢吡肟的合成中间体，同时也是主要的降解产物，作为一种杂质存在，对人体和环境有潜在毒害。用高效液相色谱法兼离子色谱检测注射用盐酸头孢吡肟中的N-甲基吡咯烷，可以定量控制其限量，很好地控制产品质量。
1 仪器与试药
Waters 1515高效液相色谱仪（美国） Waters432电导检测器 电子天平：Sartorius BS-21S、梅特勒XS3DU Empower 2工作软件 低温光照仪：LS-3000
注射用盐酸头孢吡肟（大庆华科药业分公司）批号：20130517、20130518、20130519，规格：按C19H24N6O5S2计1.0g；乙腈为色谱纯，硝酸为优级纯，水为超纯水，其余试剂为分析纯；N-甲基吡咯烷，纯度99.8%，批号：20101102；头孢吡肟对照品：中国药品生物制品检定所；按头孢吡肟计含量83.5%，使用前不需干燥处理；批号：130524-200903；精氨酸对照品：中国药品生物制品检定所；含量100.0%，供含量与鉴别用，使用前105℃干燥3小时；批号：140685-201003
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性
用Metrosep C4-100/4.0色谱柱（4.0*100mm，5um）；以0.01mol/L硝酸溶液-乙腈（99：1）为流动相；流速为每分钟0.5ml；柱温为35℃；电导检测。取本品及N-甲基吡咯烷适量，加0.01mol/L硝酸溶液溶解并稀释制成每1ml中含头孢吡肟5mg和N-甲基吡咯烷25µg的混合溶液。另取N-甲基吡咯烷适量，加0.01mol/L硝酸溶液溶解并稀释制成每1ml中含N-甲基吡咯烷15µg的溶液作为对照品溶液。取混合溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，用于供试品溶液中N-甲基吡咯烷色谱峰的定位。精密量取N-甲基吡咯烷对照品溶液20μl注入液相色谱仪，计算数次进样结果，其相对标准偏差不得过5.0%。
高效液相色谱图
2.2 色谱条件的确定
参照上述条件分别配制精氨酸1mg/ml、N-甲基吡咯烷25μg/ml、头孢吡肟对照品5mg/ml、样品（含头孢吡肟5mg/ml）、混合溶液（每1ml中含头孢吡肟5mg和N-甲基吡咯烷25µg的混合溶液）及0.01mol/L硝酸溶液。取上述溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明本品空白溶剂、精氨酸和头孢吡肟均不影响N-甲基吡咯烷的测定。
2.3 专属性
2.3.1 辅料：取本品精氨酸适量，加0.01mol/L硝酸溶液稀释制成相应浓度的辅料溶液。
2.3.2 原样：取本品（约相当于头孢吡肟125mg），置25ml量瓶中，加0.01M硝酸溶液溶解并稀释至刻度。
2.3.3 光照破坏：取本品（约相当于头孢吡肟125mg）置紫外光（254nm）下照射2时，置25ml量瓶中用0.01M硝酸溶解稀释至刻度。
2.3.4 酸破坏：取本品（约相当于头孢吡肟125mg），置25ml量瓶中，加0.1M盐酸溶液1ml放置2小时后加0.1M氢氧化钠1ml中和用0.01M硝酸溶解稀释至刻度。
2.3.5 高温破坏：取本品（约相当于头孢吡肟125mg），置25ml量瓶中，于105℃烘箱中放置2小时，取出冷却，用0.01M硝酸溶解稀释至刻度。
2．3.6 碱破坏取本品（约相当于头孢吡肟125mg），置25ml量瓶中，加0.1M氢氧化钠溶液1ml放置2小时后加0.1M盐酸1ml中和用0.01M硝酸溶解稀释至刻度。
精密量取各液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，试验结果表明，本品在各破坏条件下，都产生不同程度的降解；杂质峰与主成分峰分离良好，溶剂和精氨酸在此条件下没有干扰。
2.4 线性考察
取N-甲基吡咯烷 22mg置100ml的容量瓶中用0.01M硝酸溶解稀释至刻度，作为制备液0.22mg/ml。分别制备液1.00、2.00、3.00、5.00、10.00ml置25ml容量瓶中用0.01M硝酸溶液溶解稀释至刻度作为各浓度梯度的供试液。分别精密量取各浓度梯度的供试液20μl进样，记录色谱图。绘制回归曲线y = 4E+07 x + 11011（r2=0.9998，n=5），由结果可见，本品N-甲基吡咯烷测定的色谱条件，于0.0088～0.088mg/ml浓度范围内呈良好线性
2.5 精密度试验
取本品标准曲线项下的第三份溶液作为供试品溶液，连续进样六次，记录峰面积，结果的 ＲSD = 0.37%（n = 6），结果表明本法进样精密度较好。
2.6 重复性试验
取本品（约相当于头孢吡肟125mg），置25ml量瓶中，用0.01M硝酸溶液溶解稀释至刻度，作为供试品溶液，平行配制6份供试品溶液；另取N-甲基吡咯烷适量用0.01M硝酸溶液定量稀释制成每1ml中含N-甲基吡咯烷25μg的溶液，作为对照品溶液。分别测定N-甲基吡咯烷含量，考察本法的重复性，RSD=0.98%，结果表明本法重复性良好。
2.7 稳定性考察
取本品（约相当于头孢吡肟125mg），置25ml量瓶中，用0.01M硝酸溶液溶解稀释至刻度，作为供试品溶液，分别于0、1、2、4、6小时进样考察本品溶液的稳定性。结果表明本品N-甲基吡咯烷测定溶液在棕色瓶和白色瓶中均不稳定，建议临用新配。
2.8 加样回收率试验
取本品适量，按N-甲基吡咯烷限量的80%、100%、120%配制。取本品（约相当于头孢吡肟125mg），置25ml量瓶中，最为供试品溶液；另取N-甲基吡咯烷0.110g置100ml容量瓶中用水溶解稀释至刻度作为母液，分别取母液0.8、1.0、1.2ml各3份分别置供试品溶液中用0.01M硝酸溶液溶解稀释至刻度，进样。计算回收率。结果见表1
试验结果表明，按N-甲基吡咯烷限量在80%～120%时，本品N-甲基吡咯烷测定方法的回收率良好。
2.9 样品含量测定测定
取三批装量差异项下内容物，混合均匀，精密称取适量（约相当于头孢吡肟125mg），置25ml量瓶中，加0.01M硝酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液（20分钟内进样），精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另精密称取N-甲基吡咯烷适量，用0.01mol/L硝酸溶液定量稀释制成每1ml中含N-甲基吡咯烷25μg的溶液，作为对照品溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算，样品（20130517，20130518，20130519）含N-甲基吡咯烷分别为0.15%、0.15%、0.17%，
试验结果表明：三批样品N-甲基吡咯均小于0.2%。结果符合标准规定。
3 讨论
本实验所测得N-甲基吡咯烷的含量均低于0.20%，远低于标准规定0.5%，符合标准要求。上述色谱条件下，样品中L-精氨酸及空白样等因素对分离无干扰，保证了样品的分离效果。根据相关资料调节了乙腈的比例，相应调节HNO3溶液的浓度，分离效果都不如本条件下测定。而且样品溶液稳定性不好，需临用新制，马上进样分析，保证不降解。流动相使用超纯水，试剂用色谱纯或优级纯，排除其他离子干扰。本实验所采用方法及色谱条件下测定N-甲基吡咯烷含量，分离效果良好，可以控制产品质量。
参考文献：
[1] 中国药典2010年版二部.
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[3] 李亚军，刘建军，沈华． 离子色谱法测定盐酸头孢吡肟中N-甲基吡咯烷的含量.医药导报，2010，8（29）：163-164.
[4] 杨伟，杨春，王云华，王革辉． 离子色谱法测定盐酸头孢吡肟 /L- 精氨酸中 N- 甲基吡咯烷.药品检验（今日药学），2008，18（5）：28-29.
论文作者:刘斌
论文发表刊物:《基层建设》2016年6期
论文发表时间:2016/7/5
标签：头孢论文; 吡咯烷论文; 溶液论文; 甲基论文; 硝酸论文; 色谱论文; 本品论文; 《基层建设》2016年6期论文;