江荣林[1]2002年在《抗IL-5抗体和Eotaxin对哮喘小鼠嗜酸性粒细胞迁移的影响》文中提出研究背景：哮喘是由多种细胞参与的气道慢性炎症性疾病，并伴有可逆性气流阻塞、气道粘液高分泌及气道高反应性。其中嗜酸性粒细胞(Eos)在哮喘的发病中起了重要的作用，有学者甚至称哮喘气道慢性炎症为“气道Eos性炎症”。目前研究表明小鼠哮喘抗原激发后Eos发生有规律的自骨髓、经血液循环向气道迁移的反应，故又有“哮喘源自骨髓”一说。但对Eos上述迁移的机制尚不明了，普遍认为Eos自骨髓向肺组织的迁移受多种细胞因子与趋化因子共同调控。其中最受关注的是白介素-5(IL-5)与嗜酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)。研究证明IL-5在从骨髓动员Eos及诱导Eos生长、分化、增殖、激活中具有重要作用，过量表达IL-5的哮喘模型转基因小鼠可引起血和肺组织Eos浸润及气道炎症。Eotaxin为Eos特异性趋化因子，对Eos具有高度选择性，可诱导Eos募集在组织中。对于两者的相互作用至今尚无定论。近年来哮喘的免疫治疗越来越受重视，其中通过阻断IL-5或Eotaxin而抑制嗜酸性粒细胞迁移已成为目前研究的热点。 研究假设：哮喘在抗原激发后Eos发生有规律的自骨髓、经血液循环到气道的迁移，骨髓Eos生成增加，而且这些变化与肺局部和／或循环中主要的Eos造血信号——IL-5和／或趋化信号——Eotaxin的作用密切相关。因此，通过应用抗IL-5单克隆抗体可抑制Eos从骨髓到气道的迁移。目前对Eotaxin促使Eos从血液中募集到肺组织内的作用已基本定论。然而，Eotaxin对Eos的募集作用是否必须依靠IL-5的存在尚有争论。本研究通过经鼻联合应用抗IL-5单克隆抗体和Eotaxin，观察在抗IL-5单克隆抗体阻断了IL-5的作用后，Eotaxin是否仍然能够发挥其对Eos的募集作用，肺组织内募集的Eos是否仍然增加。 本课题利用小鼠哮喘模型对上述假设进行了探讨。 研究方法：选择C57BL16小鼠，年龄6－吕周，体重18－22克，雄性。以卵 蛋白（OVA）作为抗原进行二次腹腔注射致敏和叁次雾化吸入激发。同时设立 阴性对照组（即以生理盐水代替OVA作为抗原）。在最后一次抗原激发后48 ，J’时分别测定支气管肺泡灌洗液（BALF＼外周血＊B）和骨髓（BM）中炎 症细胞反应，以及肺组织内Eos的浸润。在此基础上，在每次OVA澈发前2 小时分别应用抗IL－5单克隆抗体、联合应用抗IL－5单克隆抗体（每次OVA激 6 发前二小时）和Eotaxin（最后一次OVA激发剐、时）鼻腔内滴注给药，以探 讨局部应用这些药物对哮喘小鼠E。s迁移的影响。 研究结果：OVA抗原激发后48’J’时小鼠的BALF、PB及BM中的E朋 分另为34．89土8．59X10‘／双肺（32．75士7．12o）、205．15士16．IX10’／ml（3．20土 0．63％）、1．25士0刀8X106／股骨（5．45上0．5％），细支气管和肺组织中有大量EoS 浸润，均较阴性对照组明显增加；在OVA激发前经鼻滴入抗IL．5单克隆抗体 则使OVA抗原激发后的BALF、PB及BM中的EoS数分别为0．74士0．35X旷／ 双肺（0．95士0．slo）、30．47士13．73X10’hal（．90士0．37％）、0．49土0．04X10‘／股骨 ＊．70土0．27％人 细支气管和肺组织内未见E加浸润，均较单纯OVA致敏激 发组明显减少：而在OVA激发前后经鼻联合滴入抗IL5单克隆抗体和＊OaX h 后，BALF、PB、BM中的EoS数分别为0．99士0．19X10‘／双肺门刀士0．18％）、 16．70士吕．14X10’／ml（0．50士0二二％）、0．32X106／股骨 豆．50士0．18％），细支气管和 肺组织中只有少许E。S散在，均较OVA激发者明显减少，而与应用抗IL－5单 克隆抗体组的BALF、PB、BM中的Eos数及细支气管、肺组织内的E。s浸润 基本一致。 结论：1．气道内应用抗IL－5单克隆抗体能显着抑制哮喘小鼠在吸人抗原 激发后Eos在骨臼中增殖并释放入血液循环和向支气管、肺组织中募集的过 程。2．EotaXin对EOS趋化和募集的促进作用必须依赖ths的存在。
程胜[2]2015年在《白介素-23和白介素-21在支气管哮喘气道炎症中的作用研究》文中研究表明第一部分支气管哮喘小鼠模型的建立以及不同激发方式对气道炎症的影响目的：探讨滴鼻和雾化两种不同代表性激发方式对小鼠支气管哮喘模型气道炎症的影响,为研究和优化支气管哮喘动物模型提供理论依据。方法：选择6-8周龄雌性BALB/c小鼠采用鸡卵清蛋白(OVA)进行致敏,分别采用滴鼻和雾化两种不同方式进行激发,复制哮喘模型,观察支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数和细胞分类计数,采用ELISA方法检测BALF上清中IL-4、IL-13含量,常规病理切片HE染色观察肺内炎症情况。结果：滴鼻组小鼠BALF中白细胞总数最高,其次为雾化组小鼠；且滴鼻组小鼠嗜酸性粒细胞总数及中性粒细胞总数亦明显高于雾化组与正常组,差异比较有统计学意义(P<0.05)。滴鼻组小鼠BALF中IL-4、IL-13水平明显高于雾化组与正常组小鼠,差异比较有统计学意义(P<0.05)；雾化组小鼠BALF中IL-4、IL-13水平高于正常组小鼠,差异比较有统计学意义(P<0.05)。滴鼻组肺组织炎症最明显,可见上皮细胞破坏,杯状细胞增生,支气管和血管周围有大量炎症细胞浸润,以嗜酸性粒细胞和淋巴细胞为主。雾化吸入组炎症程度较轻,正常对照组无明显炎症改变。结论：雾化吸入和经鼻滴入的激发方式都可以成功制作出支气管哮喘模型,经鼻滴入方式可以引起肺部更加明显的炎症浸润及细胞因子表达,为哮喘研究提供更好的选择。第二部分.阻断IL-23通路通过降低Tc17细胞浸润改善支气管哮喘小鼠肺部炎症目的：Tc17细胞是产生IL-17的CD8+T细胞,并被发现参与过敏性哮喘的发病。IL-23通过调控Th17细胞参与IL-17相关炎症反应。本部分研究探讨IL-23是否对Tc17细胞也有免疫调控作用。方法：6-8周龄雌性BALB/c小鼠根据致敏/激发/干预的不同分为4组：1)阴性对照组,2)哮喘组,3)IL-23中和抗体干预组,4)同型对照抗体干预组。IL-23中和抗体和同型对照抗体在激发前气道内给予。气道反应性通过FlexiVent、鼠肺功能仪测定。观察支气管肺泡灌洗液中白细胞总数和分类计数,肺组织炎症和粘液分泌分别通过HE染色和PAS染色进行观察。制作肺组织单细胞悬液,用流式细胞术检测Tc17/Th17细胞浸润,ELISA方法检测肺组织匀浆IL-17水平。结果：IL-23中和抗体干预后降低了哮喘小鼠气道高反应性、BALF中白细胞总数和嗜酸性粒细胞、中性粒细胞。IL-23抗体干预也降低了肺组织Thl7和Tc17细胞浸润比例以及IL-17水平。结论：作为IL-23/Th17细胞轴的补充,IL-23/Tc17细胞轴也参与支气管哮喘的发病。第叁部分IL-21对支气管哮喘气道炎症的影响研究目的：细胞因子,尤其是Th2型细胞因IL-5和IL-13已经证实在支气管哮喘发病中起重要作用。IL-21对免疫系统有重要作用,但在过敏性疾病发展中的作用目前研究中尚有不一致之处。本部分研究以在体干预方式探讨IL-21对支气管哮喘气道炎症的影响。方法：使用卵清蛋白OVA诱导的小鼠支气管哮喘模型,通过ELISA方法检测其肺泡灌洗液(BALF)中IL-21浓度。比较正常对照组、哮喘组及IL-21干预组之间的BALF细胞学、肺组织病理学及血浆IgE水平。OVA诱导的过敏性鼻炎及IL-21干预作为阳性对照,比较IL-21对嗜酸性粒细胞鼻粘膜浸润的影响。结果：哮喘组小鼠BALF中IL-21浓度低于正常对照组。哮喘组和IL-21干预组在BALF细胞学、肺组织病理学和血浆IgE水平上未见显着差异。作为阳性对照的过敏性鼻炎组经IL-21干预后鼻粘膜嗜酸性粒细胞浸润减少。结论：外源性单独给予IL-21可能对过敏性肺部炎症无改善作用。
参考文献：
[1]. 抗IL-5抗体和Eotaxin对哮喘小鼠嗜酸性粒细胞迁移的影响[D]. 江荣林. 浙江大学. 2002
[2]. 白介素-23和白介素-21在支气管哮喘气道炎症中的作用研究[D]. 程胜. 华中科技大学. 2015