（1江苏省无锡药品检验所 江苏 无锡 214000）
（2无锡济民可信药业有限公司 江苏 无锡 214000）
【摘要】 目的：观察多西他赛脂质体不同剂量静注家兔体内，规定时间内体温升高情况及溶血反应。方法：家兔耳缘静脉注射多西他赛脂质体3个剂量组，记录给药后3h动物升温情况;体外不同浓度的多西他赛脂质体0.1～0.5ml在2%兔红细胞混悬液中放置15min～3h，观察对兔红细胞悬液的溶血作用及有无红细胞凝聚作用。结果：多西他赛脂质体热原检查项家兔耳缘静脉注射剂量宜为1 ml/kg;对兔红细胞没有致溶血作用和凝聚作用。结论：开展多西他赛脂质体热原检查项适用性研究，求得对家兔无毒性反应，不影响正常体温和无解热作用剂量。建立了常规体外试管法测定该品种的溶血程度。
【关键词】 多西他赛脂质体;特殊安全性;体温升高;溶血
【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）35-0147-02
1.目的
本研究按照国家药品监督管理局注射剂研制指导原则有关安全性试验项目要求进行了热原家兔耳缘静脉注射剂量探索及溶血程度研究，求得对家兔无毒性反应，不影响正常体温和无解热作用剂量。建立了常规体外试管法测定该品种的溶血程度。为临床安全用药提供参考依据。
2.材料
2.1 供试药物
多西他赛脂质体20mg/瓶（厂方提供）
2.2 实验动物
普通级，新西兰兔，体重2.5～3.0kg，由无锡市惠山江南实验动物场提供，实验动物使用许可证号：SYXK(苏)2014-0012，实验动物质量合格证号NO.201508591
2.3 实验仪器及试剂
生理盐水(0.9%氯化钠注射液) 四川科伦药业股份有限公司批号：B15051903
JK-WB-4A数显恒温水浴锅（ 上海精学科学仪器有限公司）；TT-08-33型0-4000转/分离心机（上海医疗仪器厂）
ZRY-2D 智能热原检测仪（天津市天大天发科技有限公司）
3.方法
3.1 溶血试验
3.1.1 制备2%红细胞悬液 少量玻璃珠放入洁净烧杯,将健康家兔耳缘静脉取血10ml于其中,轻轻不断摇晃10min。除去纤维蛋白原后，用滴管将血液移至刻度离心管中，以约10倍量生理盐水洗涤，离心，摇匀，除去上层液体。反复操作至上清液无色澄清为止，所得的红细胞以生理盐水配置成2%红细胞悬液，并于当天用于实验，用时摇匀。
3.1.2 测试方法 取多西他赛脂质体1支，加水20ml溶解，配置成约含多西他赛1 mg/ml的脂质体混悬液
取上述脂质体混悬液0.1，0.2，0.3，0.4，0.5ml，加入到不同试管中，用氯化钠注射液补充反应总体积至2.5ml。作为供试品管。另取新鲜蒸馏水2.5ml作为阳性对照管，氯化钠注射液2.5ml作为阴性对照管。
上述各管分别加入2%红细胞悬液2.5ml，轻轻摇匀。另向新试管中加入与各试验管内相同含量的脂质体混悬液，并加入适量氯化钠注射液使体积达到5ml，作为供试品对照管。
3.1.3 肉眼观察法 将37℃水浴3h后的各管取出,对阳性对照管、阴性对照管、每组供试品管及其供试品对照管进行颜色观察,通过肉眼来判断溶血情况。
3.2 热原实验
3.2.1实验设计 根据多西他赛注射液的使用说明书，人体最大用量75mg/m2，人体最大剂量2.43mg/kg，兔子剂量按人体剂量3～10倍计算，考虑本品的特殊性，预实验初步考虑兔子剂量按人体剂量2倍开始摸索。
取多西他赛脂质体1支，加水20ml溶解，配置成约含多西他赛1mg/ml的脂质体混悬液，按兔子剂量4.86mg/kg进行注射（照中国药典2010版附录）。
3.2.2操作程序 本法系将一定剂量的供试品，静脉注入家兔体内，在规定时间内，观察家兔体温升高的情况，以判定供试品中所含热原的限度是否符合规定。判断依据：
3.2.3判断依据 在初试的3只家兔中，体温升高0.6℃或高于0.6℃的家兔超过1只，判定供试品的检查不符和规定。
4.结果
4.1 溶血试验结果
3小时内观察，1～6管溶液红细胞下沉，上层液体无色澄明，振摇后红细胞能完全分散。供试品管和阴性对照管，供试品对照管颜色无明显差异，则表明无溶血发生。7号管红色澄明，管底无红细胞残留表明全部溶血。
4.2 热原预实验结果
按兔子剂量4.86ml/kg进行注射，初试的3只家兔中，体温升高均超过0.6℃，参照中国药典2010版附录“热原检查法”结果判断，判定供试品中所含热原的限度不符合规定。
分别按初试兔子剂量1／2，1／4（2.43ml/kg,1.22ml/kg）进行注射，记录表明在规定时间内，均未出现体温升高0.6℃的家兔。“兔子剂量1／2”：3只家兔体温升高总和为1.1℃，：“兔子剂量1／4”：3只家兔体温升高总和为0.7℃。另取6只家兔，3只为一组，重复上述操作，分别按上述剂量1／2，1／4（2.43ml/kg,1.22ml/kg）进行注射，记录表明在规定时间内，均未出现体温升高0.6℃的家兔。“兔子剂量1／2”：3只家兔体温升高总和为0.7℃，“兔子剂量1／4”：3只家兔体温升高总和为0.1℃。
兔子在热原实验温度测定结束后，另饲养2～7天，观察是否有任何异常行为或疾病的迹象。其中按剂量4.86 ml/kg进行注射的3只家兔7天内均出现不同程度的厌食脱毛现象。按剂量2.43ml/kg进行注射的6只家兔,1只在观察期内出现明显的食欲减退，体重减轻现象。按剂量1.22ml/kg进行注射的6只家兔, 观察期内未出现任何异常行为和疾病的迹象。
4.3 供试品热原检查项验证
按兔子剂量1.22ml/kg进行注射，进行3批多西他赛注射液热原检查项验证，原始记录表明在规定时间内，均未出现体温升高0.6℃的家兔。每组3只家兔体温升高总和均低于1.3℃。供试家兔在热原实验温度测定结束后，观察周期内均未出现任何异常行为或疾病的迹象。
5.结论
多西他赛注射液，无溶血及红细胞凝聚现象。考虑到本品的特殊性，多西他赛脂质体热原检查项家兔耳静脉注射剂量宜为1ml/kg。
6.讨论
本实验采用的方法简便、准确、可靠，严格遵照相关指导原则指标建立了常规体外试管法测定该品种的溶血程度。检测多西他赛注射液未出现阳性结果，说明多西他赛注射液无溶血作用。开展了多西他赛脂质体热原检查项适用性研究，求得对家兔无毒性反应，不影响正常体温和无解热作用剂量。
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[4]徐叔云，卞如廉.药理实验方法学，第3版[M].北京:人民卫生出版社.
论文作者:陆骏1,钱文菁2,林芳2
论文发表刊物:《医药前沿》2016年12月第35期
论文发表时间:2017/1/3
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