刘孟元[1]1993年在《两种与生育有关的人精子膜蛋白基因的研究》文中提出精子细胞膜(简称“精子膜”)蛋白在受精过程中占有十分重要的地位，尤其是对精子运动、精卵识别、融合及早期胚胎发育等起着重要的作用。因此精子膜蛋白的研究一直受到人们的极大关注。我们在国际上较早地开展了这一方面的工作。目前已分离纯化了数种家兔和人的精子膜蛋白，并制备了其单克隆抗体，利用抗体表位筛选法从大鼠和人睾丸表达型λgtll cDNA库中筛选获得了数种相应的精子膜蛋白的cDNA片段，并进行了核苷酸的序列分析。 本研究是在本实验室以前工作的基础上，对两种人精子膜蛋白基因做进一步的研究，是精子膜蛋白研究课题中部分工作的继续。论文分为两部分： 1．人精子膜YWK-Ⅱ抗原的cDNA克隆、序列分析及其同源性比较 本实验室过去曾用抗人精子单克隆抗体YWK-Ⅱ，从大鼠睾丸λgtll表达型cDNA库中筛选获得一个eDNA片段—RSD-2。为了进一步研究人精子中编码该蛋白基因的特征，本研究又以RSD-2为探针对人睾丸λgtll cDNA库进行筛选。所获得的7个阳性克隆其插入子的大小分别为：R171：1.2kb，R321：0.7kb，R514：0.5kb，R642：1.0kb，R721：1.8kb，R915：1.4kb和R921：1.6kb。 选择其中一个克隆(R921)进行研究，首先绘制其插入子的限制性内切酶酶切物理图谱，制备测序亚克隆进行DNA序列测定分析。核苷酸序列测定根据Sanger双脱氧终止法原理，同时使用了同位素掺入的人工测序和荧光素标记的全自动测序两种方法，对各个测序片段重复测定以保证测序结
储文明[2]1993年在《两种与生育功能有关的蛋白基因BSD-84及BED-20在人染色体上的定位及其在杆状病毒-昆虫体系中的表达》文中研究指明编码人84KD的精子蛋白cDNA克隆BSD-84，及编码人20KD的睾丸蛋白cDNA克隆BED-20已经分别从人的睾丸lambda gt11 cDNA表达文库中筛选出来。为了确定这两个基因在染色体的位置，一个1.35kb的BSD-84-Bam HI cDNA片段与另一个1.65kb的BED-20-BamHI片段被用作探针，分别与人的染色体进行原位杂交。原位杂交采用~3H标记的放射自显影法及地高辛标记的酶联分析法。由于涉及原位杂交的因素很多，因而本文对原位杂交过程中的某些因素进行了探索。实验的主要结论如下： (1) 84KD的精子蛋白基因定位于人1号染色体的1P35-36。通过放射自显影后的250个R-带的人中期染色体分裂相分析，有1257个杂交银颗粒(信号)被统计，其中有22.3％的银颗粒位于1号染色体上，经统计学处理P＜0.005，具有极显著性差异。其中位于1号染色体的银颗粒有40％位于1P35-36区。地高辛原位杂交结果与此结论相符，用杂种体细胞杂交分析也旁证了这个结论。 (2) 人20KD睾丸蛋白定位于14号染色体的q31-末端。通过检查放射自显影后的87个R-带中期分裂相及56个不分带的中期分裂相，320个银颗粒(R-带染色体上)及192个银颗粒(非显带染色体上)被统计，结果在14号染色体上的分布比例分别为11.56％与11.62％。经统计学处理均具有极显著差异(P＜0.005)。用地高辛检测的原位杂交结果及用杂种体细胞杂交分析的结果也证明了上述结论。在14号染色体上分布的所有银颗粒中有5％集中在q31-末端。 (3) 除了两个特异的杂交峰，在1与14号染色体外的其它染色体上均无特异的杂交峰出现，统计学处理没有显著差异(P＞0.05)。 (4) 用5-Brdu掺入到染色体中，在杂交前用紫外光照射，无特异性杂交信号出现。提示紫外光照后使染色体DNA发生了断裂。
参考文献：
[1]. 两种与生育有关的人精子膜蛋白基因的研究[D]. 刘孟元. 中国协和医科大学. 1993
[2]. 两种与生育功能有关的蛋白基因BSD-84及BED-20在人染色体上的定位及其在杆状病毒-昆虫体系中的表达[D]. 储文明. 中国协和医科大学. 1993