（1苏州大学附属第三医院 江苏 常州 213000）
（2常州市第一人民医院儿科 江苏 常州 213003）
【摘要】 目的：探讨EV71病毒性脑炎患儿外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞频率变化及其临床意义。方法：选取我院明确诊断EV71病毒性脑炎患儿90例，其中重症患儿25例，危重患儿65例，并设立健康对照组患儿30例。于病情确诊后的第一日抽取静脉全血5ml，采用流式细胞仪对其血清CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)细胞频率，同时检测患者WBC、CPR以及血糖等生化指标。结果：在EV-71病毒感染的患儿中，Treg细胞水平明显升高，而且这种情况可能随着病情的加重，而有逐渐增加的趋势；CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞频率与白细胞呈显著正相关，但与CRP、血糖之间无明显相关。结论：EV71病毒可能是通过升高CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞频率对人体的细胞免疫进行抑制，导致病情的进一步发展，其中严重程度可能与外周WBC水平呈显著正相关。
【关键词】 肠道病毒71型；手足口病；流式细胞术
【中图分类号】R725 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）08-0039-02
EV71 children with viral encephalitisPeripheral blood CD4+CD25+Foxp3+regulatory T cells frequency changes and its clinical significance
Zeng Zhaoye.Third Affiliated Hospital,Medical College of Suzhou University,Jiangsu 213000,China;
Wang Yongqing.First People′s Hospital of Changzhou, Jiangsu Province,Changzhou 213003, China
【Abstract】Objective:To investigate the EV71 children with viral encephalitis peripheral blood CD4 + CD25 + Foxp3 + regulatory T cells frequency changes and its clinical significance.Selection methods: our hospital 90 cases of children viral encephalitis EV71 diagnosis, including 25 cases of children with severe, critically ill children with 65 cases, and set up the health control group 30 cases of children.Extract on the first day after diagnosis of venous blood 5 ml, using flow cytometry instrument on the serum levels of CD4 + CD25 + Foxp3 + regulatory T cells (Treg) cell frequency, at the same time testing the WBC, CPR and blood glucose in patients with biochemical indicators.Results: in EV - 71 children with virus infection, the level of Treg cells increased significantly, and this situation might as the illness is aggravating, and there was a trend toward increased gradually;Frequency of CD4 + CD25 + Foxp3 + Treg cells and white blood cells was significantly positive correlation, but with no obvious correlation between CRP and blood sugar.Conclusion: EV71 virus could be elevated by frequency of CD4 + CD25 + Foxp3 + Treg cells inhibit the cellular immunity of human body, lead to the further development of the disease, severity of may and peripheral WBC level was significantly positively related.
【Key words】 Enterovirus 71；Hand-foot-mouth disease；Flow Cytomentry
肠道病毒71型（EV71）是导致手足口病的主要病毒之一，好发于1～5岁患儿，在本病的早期主要表现为手、足和口腔等出出现疱疹，随着疾病的发展，可进一步造成心肌、大脑损伤，甚则引起死亡。目前国内外研究多集中在病原学、流行病学的研究，对本病的治疗和发病机制尚不明确，临床上更是缺少一个有效的特异性的疗效评价指标。CD4+CD25+Treg是近年来被新确定的T细胞亚群之一，国外研究显示病毒性脑炎患儿外周血中CD4+CD25+Treg可抑制CD8+CTL对病毒性脑炎特异性的免疫应答，并与病毒性脑炎的发生和发展的关系密切，近年来国内的学者对此也进行了相关研究，但得出的结果却不尽相同。本研究正是基于此认识，采用流式细胞分析仪检测了不同程度EV 71病毒性脑炎患儿外周血中的CD4+CD25+Foxp3+T细胞的数量及频率，对Treg在病毒性脑炎变化机制中的作用和与疾病进展的相关性进行初步的探讨与研究。
1.材料和方法
1.1 一般资料
选取我院感染科自2012年7月至2014年6月期间就诊患儿共90例，所有患儿均经过我院PCR实验室RT-PCR检测EV71病毒阳性，根据病情分重症组、危重症组，其中重症组患儿65例，危重症组患儿25例。并由我院儿童保健科提供正常儿童30例作为对照组。所有研究对象均征得患儿家长同意并签订知情同意书。
1.2 纳入及排除标准
纳入标准：所有患儿均参照2008年中华人民共和国卫生部颁布的《手足口病诊疗指南》进行诊断，重症和危重症患儿诊断标准参照2011年版《肠道病毒71型感染重症病例临床救治专家共识》进行分组区分。
排除标准：①无神经系统症状的手足口病患者；②合并其他颅内疾病者；③不能排除其他颅内感染者；④不符合上述诊断标准者⑤不同意进入本次实验研究者；⑥途退出本次实验者。
1.3 检测方法
所有患者使用无菌采血针采集静脉血约5ml，肝素钠抗凝摇匀，充分混合后，常温下放置4～6小时后采用流式细胞仪收集细胞进行分析检测，具体操作方法参见说明书。血糖、WBC、CPR等血清学检查由我院生化实验室采用ELAS法于完成。
1.4 统计学分析
所有数据采用SPSS17.0软件分析整理，首先进行正太检验，若数据符合正太分布，则采用x-±s表示，三组间的比较采用方差分析；两个连续正太分布变量相关性分析采用Pearson检验；计数资料采用x2检验，取p＜0.05为有统计学意义。
2.结果
2.1 各组患儿一般资料比较
重症患儿组、危重患儿组以及健康对照组的年龄和性别比例，将统计学比较发现无显著性差异（p＞0.05），具有可比性，各组患儿基本资料详见表1。
2.4 各组患儿CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞频率与血糖之的相关性分析
在健康患儿体内CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞频率与血糖无显著相关性（r=0.082，p=0.298），在重症患儿组CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞频率与血糖呈正相关（r=0.135，p=0.047），但考虑本组病例数较多，尽管统计学分析有显著性差异，但其相关系数较小，提示存在二类误差可能，故认为两者无显著性差异。在危重患儿组CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞频率与血糖无显著性相关（r=0.017，p=0.786）。
3.讨论
近年来，我国手足口病的发病呈明显增高趋势，与之相关的重症及危重症病毒性脑炎患儿也随着上升，这使其相应的死亡率也上升明显，且有逐年增加的趋势[1]。分析其中原因，有学者认为这种情况可能与个体中含有敏感基因有关，敏感基因的存在增加了人体对本病易感性；但也有学者认为本病的发生与EV-71病毒本身有关，这种病毒相对于其他肠道病毒有更强致病力 [2-4]。目前引起患儿死亡的主要原因为EV-71病毒感染后导致的颅内感染，因此今早发现和明确颅内感染情况，并尽早采取有效的干预措施，是降低死亡率的关键所在。但其引起颅内感染的机制目前尚未明确，国外的学者通过对患儿尸体解剖发现，下丘脑、脊髓、脑干、齿状核为本病的主要感染部位，在对其进一步病理研究，结果发现本病毒具有较强的 噬神经性，这也是神经细胞凋亡/变性死亡的主要原因，而神经细胞的病变累积，最终导致患儿死亡[5-7]。因此寻找EV71病毒造成神经系统损伤的具体机制成为治疗本病的关键。
本研究结果显示，三组间外周CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞频率具有显著性差异（p＜0.05），在进一步的两两比较中发现，危重患儿组CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞频率明显高于重症患儿及健康对照组（p＜0.01），重症患儿组显著高于健康对照组（p＜0.01），差异具有统计学意义。上述结果提示，在EV-71病毒感染的患儿中，Treg细胞水平明显升高，而且这种情况可能随着病情的加重，而有逐渐增加的趋势。众所周知，Treg具有抑制了NK细胞和NKT细胞的活性以及数量的作用而了NK细胞和NKT细胞具有细胞免疫的作用，若两者的功能和数量受到抑制，将进一步加重病情的变化[8-9]。有研究发现EV-71病毒感染的患儿中，其血常规白细胞计数以及血糖与疾病的预后呈线性相关，病情越重，其白细胞和血糖水平升高越明显。为明确两者的之间关系，我们进行的线性相关分析，结果发现，在EV71病毒性脑炎患儿中，CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞频率与白细胞呈显著正相关，但与CRP、血糖之间无明显相关，这与上述观点存在差异，其中机制需进一步探讨。
综上所述，EV71病毒可能是通过升高CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞频率对人体的细胞免疫进行抑制，导致病情的进一步发展，其中严重程度可能与外周WBC水平呈显著正相关。
【参考文献】
[1] 杨秀惠, 严延生. 手足口病的病原学研究进展[J].传染病信息,2008, 21(3): 129.
[2] Celtik C, Acunas B, Oner N, et al. Neuron specific enolase as a markerof the severity and outcome of hypoxic ischemic encephalop-athy [J]. Brain & Development, 2004, 26: 398-402.
[3] Wang SM, Lei HY, Huang MC, et al. Modulation of cytokine pro-duction by intravenous immunoglobulin in patients with enterovirus 71-associated brainstem encephalitis [J]. J Clin Viral, 2006, 3(3):47-52.
[4] Schmidt NJ, Lennette EH, Ho HH. An apparently new enterovirus isolated from patients with disease of the central nervous system [J]. J Infect Dis, 2008, 129(3): 304-309.
[5] Ooi M，Wong S，Mohan A，et a1．Identifi cation and validation of clin-ical predictors for the risk of neurological involvement in children with hand，foot，and mouth disease inSarawak[J]．BMC Infect Dis，2009，9：3.
[6] Chang LY, Hsiung CA, Lu CY, et al. Status of cellular rather thanhumoral immunity is correlated with clinical outcome of enterovi-rus 71 [J]. Pediatr Res, 2006, 60(4): 466-471.
[7] Gong XJ，Zhou W Zhu N，et a1．Excessive pmhfflammatory cytokine and chemokine responses of human monocyte-derived maerophages to enterovirus 71infection．BMC Infectious Diseases 2012，12：224.
[8] Yang G, Liu A, Xie Q, et al. Association of CD4+CD25+Foxp3+ regulatory T cells with chronic activity and viral clearance in patients with hepatitis B. Int Immunol, 2007, 19(2):133-140.
[9] Nan XP, Zhang Y, Yu HT, et al. Circulating CD4+CD25high regulatory T cells and expression of PD-1 and BTLA on CD4+ T cells in patients with chronic hepatitis B virus infection. Viral Immunol, 2010, 23(1):63-70.
论文作者:曾昭烨1 王永清2
论文发表刊物:《医药前沿》2015年第8期供稿
论文发表时间:2015/7/1
标签：患儿论文; 细胞论文; 脑炎论文; 频率论文; 血糖论文; 病毒论文; 重症论文; 《医药前沿》2015年第8期供稿论文;