（2宁夏回族自治区水产技术推广站 宁夏 银川 750001）
【摘要】目的：研究与分析miRNA-210对人乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法：选取来院就诊与治疗的患有乳腺癌疾病的患者20例，选取时间为2016年8月－2018年8月，对患者的乳腺癌组织、癌旁组织、乳腺癌细胞MDA-MB-231以及正常乳腺细胞等组织采取real-timePCR检测，观察miR-210的表达情况。同时将miR-210inhibitor转染至MDA-MB-231细胞中，采取Lipofectamine 2000，对miR-210采用荧光显微镜进行检测，检测转染效率。对细胞采取Transwell法来检测其迁移和侵袭情况。结果：乳腺癌组织、MDA-MB-231细胞与癌旁组织、正常乳腺细胞等组织中的miR-210表达水平差异较大，前者的表达水平显著较高，差异具有统计学意义（P＜0.05）。miR-210inhibitor转染效率为（88.28±2.99）%，经过转染后，其细胞的增殖能力较转染前显著下降，且细胞的迁移和侵袭能力受到明显抑制。结论：miRNA-210对人乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响较大，可以明显减弱其能力。
【关键词】miRNA-210；人乳腺癌细胞；增殖；迁移；侵袭
【中图分类号】R737.9 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2019）22-0018-02
Effects of miRNA-210 on the proliferation, migration and invasion of human breast cancer cells
Huang Qi 1, Wang Fang 2, Tian Jinhai 1, Yu Jingjing 1, Wang Jia 1, Wang Libin 1(communication author)
1 Ningxia Medical University General Hospital, Yinchuan, Ningxia 750004, China
2 Ningxia Hui Autonomous Region Aquatic Technology Promotion Station, Yinchuan, Ningxia 750001, China
【Abstract】Objective To study and analyze the effects of miRNA-210 on the proliferation, migration and invasion of human breast cancer cells. Methods 20 patients with breast cancer were selected from August 2016 to August 2018. The expression of miR-210 was observed in breast cancer tissues, pericancerous tissues, breast cancer cells MDA-MB-231 and normal breast cells. At the same time, miR-210 inhibitor was transfected into MDA-MB-231 cells. Lipofectamine 2000 was used to detect miR-210 using a fluorescence microscope to detect the transfection efficiency. Transpell method is used to detect the migration and invasion of cells. Results The expression level of miR-210 in breast cancer tissue, MDA-MB-231 cells and other tissues was significantly different from that of normal breast cells. The expression level of the former was significantly higher and statistically significant(P & lt; 0.05). The transfection efficiency of miR-210 inhibitor was(88.28 ± 2.99) %. After transfection, the cell's value-added capacity decreased significantly compared with that before transfection, and the cell's migration and invasion ability were significantly inhibited. Conclusion MiRNA-210 has a great influence on the proliferation, migration and invasion of human breast cancer cells, and can obviously weaken its ability.
【Key words】MiRNR-210; Human breast cancer cells; Proliferation; Migration; Invasion
miRNA是机体内的一种短链RNA，该物质在经过转录后可以对相关细胞的周期、凋亡、侵袭、血管生成以及迁移等过程进行水平调节，从而对其细胞的增殖、迁移和侵袭等过程产生影响。本文分析miRNA-210对人乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响，现报道如下。
1.资料与方法
1.1 一般资料
选取来院就诊与治疗的患有乳腺癌疾病的患者20例，研究对象选取时间为2016年8月－2018年8月。本次研究通过道德伦理委员会的批准，且经过患者的同意，并签署知情同意书。
1.2 方法
1.2.1 Real-timePCR法 首先提取总RNA（乳腺癌组织），并且将提取后的RNA进行反转，反转为cDNA［1］。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆miR-210细胞的上游引物序列为CTGTGCGTGTGACAGCGGCTGA，通用引物 Uni-miR real-time PCR引物为miR-210细胞的下游引物。随后模版选取cDNA，内参选取U6B，同时进行扩增，扩增后需要设置3个复孔［2］。
1.2.2 miR-210inhibitor转染至MDA-MB-231细胞中 将miR-210 inhibitor、miRNA inhibitor NC粉末（具有FAM 荧光标记）进行离心处理，在离心处理完毕后将其配置成溶液，浓度为20μmol/L。在进行转染前的1d铺设24孔板，以此来提高溶液的融合度，一般融合度需要提高至30～50%。上述操作完毕后，将无抗生素（500μL）的培养基加入培养板中，随后可以混合miRNA和 Lipofectamine 2000，20min室温孵育。在MB-231细胞中加入混合物进行摇匀，在37℃下进行孵育［3］。
1.2.3 Transwell法 迁移：在转染后的48h进行试验，加入1300μL完全培养基加入24孔板中，随后将其放置于培养箱中进行过夜放置，对细胞密度进行调节，同时加入200μl含0．2% BSA 的无血清细胞悬液，将1300μL完全培养基加入下层孔板中，随后将其置于37℃中进行培养，随后进行封片处理，并且进行计数。
侵袭：在转染后的48h进行试验，按照1：8稀释基质胶与无血清培养基1d后铺于小室上，随后对细胞密度进行调节，同时加入200μl含0．2% BSA 的无血清细胞悬液至每孔中，将1300μL完全培养基加入下层孔板中，随后进行封片处理，并且进行计数。
1.3 统计学方法
采取统计学软件SPSS19.0进行数据处理，以P＜0.05表示差异具有统计学意义。
2.结果
2.1 miR-210表达水平
miR-210在乳腺癌组织中的表达水平为（9.53±4.82），癌旁组织为（1.0±0.18），MDA-MB-231细胞为（6.04±1.74），正常乳腺细胞为（1.0±0.15），故乳腺癌组织、MDA-MB-231细胞与癌旁组织、正常乳腺细胞等组织中的miR-210表达水平差异显著，具有统计学意义（P＜0.05）。
2.2 miR-210inhibitor转染效率
miR-210inhibitor转染效率为（88.28±2.99）%，结果说明miR-210 inhibitor已成功转染至MDA-MB-231 细胞。故经过转染后，其细胞的增值能力较转染前显著下降。
2.3 抑制细胞增殖情况
转染miR-210inhibitor细胞的克隆集落数为（17.39±2.98）个，而转染miR-INC 组细胞的克隆集落数为（31.76±3.93）个，具有统计学意义（P＜0.05）。迁移试验结果显示，转染miR-210inhibitor细胞的迁出细胞数量为（291.00±43.13）个，而转染miR-INC 组细胞的迁出细胞数量为（1137.39±89.48）个，侵袭试验结果显示，转染miR-210inhibitor细胞降解基质胶且迁出细胞数量为（131.63±32.02）个，而转染miR-INC 组细胞降解基质胶且迁出细胞数量为（647.89±31.22）个，故经过转染后，其细胞的迁移和侵袭能力受到明显抑制。
3.讨论
根据大量数据显示，乳腺癌疾病已经成为危害妇女身心健康的主要恶性肿瘤之一，且该类疾病的发病率呈现上升的趋势。随着我国医疗技术的进步，对于该类疾病的治疗出现了一种新形式，即分子靶治疗。而分子靶治疗需要一个有效的靶点，而miRNA便成为了诊断与治疗的有效靶点。根据大量研究数据显示，位于肿瘤相关基因组的区域和杂合型丢失区、脆性位点、扩增区或断裂点区的miRNA超过一半，这些miRNA均可以作为抑癌基因或者致癌基因进而发挥作用，引发患者癌细胞的增殖、迁移以及侵袭等进程。目前，在转录后水平调控基因的表达是miRNA的已知功能，可以作为负调控因子来参与基因的表达过程。同时有部分研究数据显示，miRNA的作用靶点可以作为抑癌基因处于患者机体内的扩增区来下调miRNA的表达，进而发挥抑癌基因样作用。同时其靶点还可以作为癌基因，当此基因表达水平显著升高时，可以对细胞恶性转化作用产生抑制的作用。而在人乳腺癌细胞中，很多miRNA会出现异常表达的情况，在细胞的不同阶段表达出不同的作用。miR-21会在乳腺癌患者机体内的癌细胞中表达上调，其可能的靶基因为抑癌基因TPM1、PDCD4等。而miR-10b可以会对机体内的HOXSD10产生抑制的作用从而达到促进转移乳腺癌细胞的作用，除此之外，在乳腺癌中miR-206还会与其表达水平以及ER的表达呈现负相关的关系。同时有部分研究显示，组织的miRNA表达谱与乳腺癌患者的外周血循环miRNA表达谱有着较为密切的关联，同时还与淋巴结转移、预后，肿瘤临床分期有着密切的关系。故在临床诊断乳腺癌疾病中可以添加miR-210等指标来进行诊断，提升疾病的诊断率。
miRNA在临床上不仅具有较高的诊断价值，还可以作为一种新型的靶向治疗手段，机体内的miRNA可以对乳腺癌患者的原癌基因以及抑癌基因的表达进行有效调控，而根据大量文献显示，采取miRNA来作为治疗靶点可以起到更佳有效的效果，特别是针对于单一的癌基因或者抑癌基因，目前在临床试验阶段已经加入了与miRNA功能相类似的小干扰RNA的相关药物，现阶段，已经有部分报道显示，在机体细胞中转入miRNA的阻断剂可以将肿瘤转移的靶基因表达有效促进，并且可以对转移灶的形成有效防止。
综上所述，miRNA-210对人乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响较大，可以明显减弱其能力，本文研究结果也证实了miRNA-210的作用。
【参考文献】
[1]张楠,李少遊,巩雅宁,等.miRNA-210对人乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响[J].中国肿瘤生物治疗杂志,2013,20(3):289-294.
[2]王正光.miRNA-210及其靶基因EFNA3对恶性外周神经鞘瘤(MPNST)的增殖和侵袭能力的机制研究[D].中南大学,2014.
[3]苏洁之,梁庆模.microRNA干扰抑制MTDH的表达对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和侵袭能力的影响[J].医学研究杂志,2017,46(5):84-90.
论文作者:黄琦1,王芳2,田进海1,于晶晶1,王嘉1,王立斌
论文发表刊物:《医药前沿》2019年22期
论文发表时间:2019/9/23
标签：转染论文; 细胞论文; 乳腺癌论文; 基因论文; 乳腺论文; 癌细胞论文; 组织论文; 《医药前沿》2019年22期论文;