张霞, 魏彦明, 杨其名, 程富胜, 程世红[1]2003年在《实验性脾虚证大白鼠酶组织化学研究》文中研究指明将 4 5只大白鼠随机分成 3组 ,即实验组、治疗组及对照组 ,每组 1 5只。以利血平致大白鼠脾虚证模型 ,分阶段捕杀动物 ,取肝脏、胃、十二指肠 ,用酶组织化学方法测定酸性磷酸酶 (ACP)、碱性磷酸酶 (AL P)、葡萄糖- 6 -磷酸酶 (G- 6 - Pase)活性的变化。结果表明 :实验组、治疗组、正常对照组各酶活性均发生了变化 ,在第 7天、第 1 4天时组内各酶存在着动态学上的变化。治疗组各酶活性接近正常对照组 ,说明四君子汤具明显的治疗作用
张霞[2]2001年在《实验性脾虚证大白鼠的酶组织化学研究》文中指出实验选用Wistar大白鼠45只，随机分为正常组、利血平组（脾虚证模型组）、利血平与四君子汤组（简称四君子汤组治疗组），每组为15只。实验第7天和第14天分别扑杀各组动物，取肝脏、肌肉、胃、十二指肠组织经一定处理后，做相应的组织化学染色，采用组织学半定量法对其糖原、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、琥珀酸脱氢酶、葡萄糖-6-磷酸酶、ATP酶进行研究，并做H.E染色观察病理组织学变化。实验结果表明： 在第7天，正常对照组的糖原、酸性磷酸酶、碱性磷酸酶，葡萄糖-6-磷酸酶显着高于利血平和四君场组（P＜0.01），在第14天，四君汤组以上各指标接近正常对照组，利血平组仍显着高于正常对照组和四君子汤组（P＜0.01）。琥珀酸脱氢酶在第7天时利血平组和四君子汤显着高于正常对照组（P＜0.01），到第14天时，四君子汤组恢复至接近正常对照组（P＞0.05），利血平组仍然显着高于其它组（P＜0.01）。H.E染色观察利血平组以程度不等萎缩变性为主，而四君子汤组从第7天到第14天，以上变化逐渐恢复并接近正常。说明利血平所致大白鼠实验性脾虚证时上述各种酶及组织结构发生异常变化，健脾益气方四君子汤具有调理和改善以上各指标的功能。
张霞, 魏彦明, 陈怀涛[3]2004年在《大鼠实验性脾虚证动物模型糖原和琥珀酸脱氢酶的组织化学研究》文中指出为了研究脾虚证时组织化学的变化及四君子汤对其的影响,选用Wistar大鼠,以利血平复制脾虚证动物模型,实验设正常对照组、脾虚组、脾虚治疗组,每组15只,于第7d、第14d分别扑杀各组动物,取肝脏、十二指肠、胃和肌肉组织,分别应用PAS法和Lojda法染色,组织学半定量法观察糖原和琥珀酸脱氢酶的变化。实验结果表明:第7d时,脾虚组和脾虚治疗组肝脏和肌肉组织中的糖原含量显着低于对照组(P<0.01),各组织中琥珀酸脱氢酶含量则显着高于对照组(P<0.01);第14d时,脾虚组糖原含量反而显着高于对照组和脾虚治疗组(P<0.05～0.01),琥珀酸脱氢酶含量仍明显高于对照组和脾虚治疗组(P<0.050.01)。说明脾虚证的病理变化过程与机体糖原和琥珀酸脱氢酶等的组织化学变化有一定的联系,健脾益气方剂四君子汤对脾虚证模型大鼠的组织学变化有较好的调节作用。
杨洪申[4]2011年在《胃肠宁对脾虚证模型大鼠消化机能的影响》文中研究表明为探讨胃肠宁对脾虚证大鼠消化机能和抗氧化作用的影响。本试验采用苦寒泻下法和利血平法分别建立大鼠脾虚证模型。以血管活性肠肽(VIP)、p物质(SP)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、淀粉酶(AMS)、D-木糖、白细胞介素-1?(IL-1 ?)、白细胞介素-10(IL-10)、肝脏和十二指肠的组织学变化为评价指标,研究胃肠宁对苦寒泻下法所致的脾虚模型大鼠胃肠功能变化的影响。以超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、一氧化氮合酶(NOS)、乳酸脱氢酶(LDH)、碱性磷酸酶(AKP)、胆碱脂酶(AchE)和肌酸激酶(CK)、肝脏、十二指肠和结肠的组织学变化为评价指标,研究胃肠宁对脾虚大鼠消化机能、能量代谢和抗氧化能力的影响。结果:1.与正常对照组比较,利血平法所致的脾虚模型组大鼠LDH、AchE、CK、SOD、GSH-Px、NOS含量明显降低(p<0.01, p<0.005, p<0.005, p<0.05, p<0.05, p<0.05),而AKP、MDA含量明显升高(p<0.05);与脾虚模型组相比,胃肠宁组大鼠血清中LDH、AchE、CK、SOD、GSH-Px、NOS含量显着升高(p<0.05),而AKP、MDA含量显着降低(p<0.05);脾虚证模型组大鼠的肝组织发生广泛性颗粒变性和空泡变性,十二指肠粘膜上皮微绒毛明显减少,大量炎性细胞浸润,杯状细胞数量明显减少;与脾虚模型组比较,胃肠宁组肝和十二指肠病理性变化明显减轻。2.与正常对照组比较,苦寒泄下法所致脾虚模型组大鼠血清中琥珀酸脱氢酶、淀粉酶、D-木糖、VIP、IL-10均有明显降低趋势(p<0.05),而IL-1?、SP有明显升高趋势(p<0.05);与脾虚模型组大鼠比较,胃肠宁治疗组大鼠血清中琥珀酸脱氢酶、淀粉酶、D-木糖含量均明显升高(p<0.05),IL-10,IL-1?变化不明显(p>0.05),回肠始段SP含量降低(p<0.05),VIP(p<0.05)升高;脾虚模型组大鼠肝组织未出现明显病理性改变;十二指肠上皮细胞明显脱落,大量炎性细胞浸润,肠腺组织结构未出现明显病理变化,但结肠内肥大细胞数量明显减少。与脾虚组相比,胃肠宁组大鼠十二指肠病理变化明显减轻,结肠肥大细胞数量增多。GSH-Px、NOS含量显着降低。胃肠宁组大鼠肝组织中SOD、GSH-Px、NOS含量也显着升高,MDA含量显着下降。胃肠宁组大鼠与脾虚模型组相比,肝和十二指肠病理变化明显减轻。胃肠宁对脾虚证时自由基代谢紊乱、脏器损伤具有良好的调节作用。2.苦寒泄下法造模时,胃肠宁治疗组大鼠血清中琥珀酸脱氢酶、淀粉酶、D-木糖含量均明显升高,回肠始段SP含量明显降低,VIP明显升高。胃肠宁组十二指肠、结肠组织未出现明显的病理性变化。以上研究表明,胃肠宁对脾虚证大鼠肠道机能紊乱具有一定的治疗作用。
崔家鹏[5]2003年在《脾虚证大鼠心、肺、空肠组织PKC和心、肝、脑组织MAPK活性变化及补益脾胃方药作用机制的实验研究》文中研究指明随着时代的前进，中医现代化已经成为中医药学发展的主要方向，而证的实质的研究是中医迈向现代化的起点。现代科学认为，细胞是生物体的结构和功能的基本单位，生物细胞具有极其复杂的生命活动，这些生命活动都与生物信号分子所携带的信息在细胞内的传递有关。因此从中医证的细胞信号转导系统的变化规律入手来探讨中医证的实质，具有重要的意义。 脾在五行中属土，在五脏阴阳中属阴中之至阴。脾主运化，统血，升清，输布水谷精微，为气血生化之源、后天之本。脾虚证主要指脾气、脾阳或脾阴不足所呈现之各种证候，分为脾气虚证、脾阳虚证和脾阴虚证。中国历代医家对脾的位置、形态、重量和生理功能进行了描述，并且对脾虚证的病因和病机进行了探讨。对脾虚证信号转导系统方面的研究已为学术界所关注。虽然近几年有一些脾虚证信号转导系统方面的研究报道，但是大多集中在信号转导的某一个孤立的环节上，并且其中以信号转导通路作为目的的研究非常少。 本项研究在已往研究的基础上，通过对脾虚动物心、肝、脾、肺、肾等主要脏器组织及空肠、脑组织蛋白激酶C(PKC)及分裂原激活的蛋白激酶(MAPK)活性变化的研究，探讨脾虚状态下细胞信号转导的规律，进一步揭示脾虚的病理实质和健脾方药的作用机制，从而为脾实质的研究提供客观依据。 主要的研究内容包括： 1．观察了脾虚证大鼠心脏、肺脏及空肠组织的PKC活性及其部分亚型表达的变化。 采用底物磷酸化法和免疫印迹法，检测了脾气虚证、脾阳虚证和脾阴虚证大鼠心脏、肺脏及空肠组织的细胞浆PKC、细胞膜PKC、细胞总PKC活性及细胞膜PKC／细胞总PKC的比值，同时观察了脾阳虚证大鼠上述叁种组织PKCα、PKCβ-Ⅰ和PKCε三种亚型的表达。经统计学处理，比较脾虚证不同证候不同组织PKC活性。通过摘要观察探讨脾阳虚证不同组织PKC。、PKCp一I和PKC。叁种亚型的表达的变化趋势。 2.观察了补益脾胃方药对脾虚证大鼠心脏、肺脏及空肠组织的PKC活性及其部分亚型表达的影响 应用导师李德新教授拟定的补脾气、温脾阳和滋脾阴方药分别对脾气虚证、脾阳虚证和脾阴虚证大鼠进行治疗，并观察其对心脏、肺脏和空肠组织PKC活性和亚型表达的影响。 3.观察了脾虚证大鼠心脏、肝脏及脑组织的MAPK活性及MAP刀ERKI，2亚型表达的变化。 采用免疫沉淀法和免疫印迹法，检测了脾气虚证、脾阳虚证和脾阴虚证大鼠心脏、肝脏及脑组织的MAPK活性及脾阳虚证、脾阴虚证大鼠ERKI和ERKZ两种亚型的表达，同时观察了叁种证候大鼠心脏及脑组织中此两种亚型的表达。经统计学处理，比较脾虚证叁种证候不同组织MAPK活性。通过观察探讨亚型表达的变化趋势。 4.观察了补益脾胃方药对脾虚证大鼠心脏、肝脏及脑组织的MAPK‘活性及MAPK了ERK 1，2亚型表达的影响 5.观察了脾虚证大鼠心脏组织的PKC活性与MAPK活性变化的相互关系。 6.观察了补益脾胃方药对脾虚证大鼠心脏组织的PKC活性与MAPK活性变化相互关系的影响。 研究结果表明:脾虚证大鼠各组织PKC和MAPK活性发生一系列改变，补脾方药对其的影响亦很显着。具体如下: 1.各模型组不同组织PKC活性存在不同变化: (1)叁种脾虚证模型中心脏组织的细胞浆PKC活性均明显升高，升高程度依次为:脾阳虚证模型组>脾阴虚证模型组>脾气虚证模型组，其升高程度无显着性差异。脾气虚证模型组和脾阴虚证模型组大鼠心脏组织的细胞膜PKC活性均显着升高，其中脾阴虚证模型组升高程度有大于脾气虚证模型组的趋势。各模型组心脏组织的细胞总PKC活性均明显升高，升高程度依次为:脾阴虚证模型组>脾气虚证模型组>脾阳虚证模型组，升高程度无显着性差异。正常对照组细胞浆明显高于细胞膜，叁种脾虚证模型组细胞膜PKC活性与细胞浆PKC活性之间均无显着性差异。脾气虚证组和脾阴虚证模型组PKCm用Kq的比值均显着升高。脾阴虚证模型组增高程度有大于脾气虚证模型组的趋势。脾阳虚证模型组无明显变化。 (2)脾阳虚证模型组和脾阴虚证模型组肺脏组织的细胞浆PKC活性均显着降低。脾阳虚证模型组降低程度有大于脾阴虚证模型组的趋势。脾阳虚证模型组和脾阴虚证模型组细胞膜PKC活性均显着性升高，脾阳虚证模型组升高程度有大于脾阴虚证模型组的趋势。脾气虚证模型组有升高趋势。叁种脾虚模型组肺组织细胞总PKC活性均有降低趋势。正常对照组细胞膜PKC活性显着低于细胞浆。脾阳虚证和脾阴虚证大鼠细胞膜PKc活性均显着高于细胞浆。脾阳虚证和脾阴虚证PKcm/P Kct比值均显一7一摘要着升高，脾阳虚证模型组升高程度有大于脾阴虚证模型组的趋势。 ③叁种脾虚模型组空肠组织的细胞浆PKC活性均无改变。叁种脾虚模型组细胞膜PKC活性均显着升高。其中脾气虚证模型组升高程度有大于脾阴虚证模型组的趋势，脾阴虚证模型组升高程度有大于脾阳虚证模型组的趋势，而脾气虚证模型组升高程度显着大于脾阳虚证模型组。叁种脾虚模型组空肠组织的细胞总PKC活性均明显升高。其中脾气虚证模型组升高程度有大
王建泽, 张力华, 周毅, 李仿尧, 石锦屏[6]1996年在《健脾散对脾虚证治疗机理的研究》文中研究表明以大黄塑造大鼠脾虚证模型，采用细胞线粒体结构与功能改变为观察指标，选用治疗脾虚证的经典方四君子汤作为对照，对民间常用中草药方剂健脾散治疗脾虚证的作用机理进行研究，结果表明：健脾散治疗脾虚证的主要机理与四君子汤相似，是促进脾虚证大鼠胃底腺壁细胞和十二指肠粘膜吸收细胞的线粒体功能的恢复，从而使脾虚症状消失。
王洪海[7]2007年在《四君子汤 柴疏四君汤 柴胡疏肝散作用于脾虚证大鼠模型的生物效应比较》文中研究说明“方证相关”是中医辨证论治和方剂学中的重要逻辑命题。方剂的功用不仅与方药配伍有关,还与其所作用的证之间具有一定的适配性,即方剂效用大小在相当程度上取决于所作用对象的病机与其方药配伍关系之间的针对性,方与证之间存在有关联程度大小的问题。但到目前为止,还没有人能从实证意义上为“方证相关”提供系统的科学证据。基于上述背景,本文以在内涵上具有一定关联的方剂和证候为切入点,运用关联排他和异方同证的研究方法较为系统地探查了中医“方证相关”命题的客观真实性。本研究首先依据中医关于脾虚证的病因病机学说、临床表现和其涉及到现代相关疾病的病理生理的变化特点,采用复合病因造模法复制脾虚证大鼠模型,通过神经-内分泌-免疫系统中的多指标观察,以获得模型的中医证候及部分生物学特点;在此基础上,比较观察具有健脾、疏肝和疏肝健脾功用的四君子汤、柴胡疏肝散和柴疏四君汤叁方对该模型的作用异同,探讨同一脾虚证条件下叁方效用的差异,以获得叁方与脾虚证之间可能存在的关联性及其关联性现代内涵。之后,观察了四君子汤对脾虚证模型甲状腺轴、血液流变学、能量代谢等其它方面的效应,了解方证相应条件下的四君子汤的作用效应谱其可能涉及到的生物学基础。最后,运用基因芯片技术探查了脾虚证模型及四君子汤对模型作用的全基因表达,进一步分析探讨脾虚模型和四君子汤作用的分子机制。全文分为文献综述和实验研究两大部分。文献综述部分主要对脾虚证动物模型复制研究进展及存在问题、四君子汤的实验研究与临床应用、基因芯片技术在中医药领域中的研究与应用现况等叁个方面进行综述。实验研究部分主要包括脾虚证大鼠模型的复制及评价;四君子汤、柴胡疏肝散及柴疏四君汤对脾虚模型的影响;四君子汤对模型中甲状腺轴、能量代谢、血液流变学的调节作用;脾虚证大鼠模型相关基因表达谱及四君子汤对其影响的初步探查四方面。研究一脾虚证大鼠模型的建立方法:将大鼠随机分为对照组和脾虚模型组,每组40只。模型组大鼠采用过度劳倦加饮食失节的方法。模型大鼠每日下午2:00置于盛有温水的塑料钢化桶中游泳10min;隔日喂食(隔日禁食,隔日足量给食),连续3w。于造模第22d开始,停止上述造模因素,自然饲养条件下观察1w。分别于造模的第1、2、3、4w取材,用间苯叁酚法测尿D-木糖排泄率,用高效液相色谱-电化学法检测单胺神经递质,用试剂盒放免法检测血清GAS、IL-1β、IL-2、IL-6、TNFα;血浆MTL、SS、VIP、NPY、SP、β-EP、ACTH、CORT;下丘脑CRH的含量。结果:1.外观行为学观察:脾虚模型组大鼠造模2w后开始出现毛发不泽、枯乱;少动、拱背、眯眼、扎堆、兴奋性差;嗜睡、倦卧;饮食明显减少;便溏;体重显着降低。造模第3w变化最为明显,停止造模1w后上述变化未见明显改善。2.胃肠功能:脾虚模型大鼠尿D-木糖排泄率于第2w开始明显降低,3w时降低最为明显,第4w虽有恢复,仍显着低于对照组;与对照组相比,脾虚模型大鼠血清GAS水平于第1、2w无明显变化,第3w明显下降,第4w明显升高;血浆MTL水平第1、4w明显升高,第2、3w明显降低;血浆SS水平3w时明显升高,4w时恢复原来水平;血浆VIP水平第2w明显升高,第3w徒然降低,4w时无明显差异;血浆NPY水平于2、3w时明显降低,4w时无明显差异;血浆SP水平3w时显着升高,4w时有降低趋势;血浆β-EP水平前叁周与对照组相比无明显差异,4w时明显降低。3.免疫系统:脾虚模型组大鼠胸腺重量于第1-3w均显着低于对照组,4w时虽有回升,但仍明显降低;脾重量于第1-4w均明显低于对照组;胸腺指数第1-3w均降低,其中第1w显着降低,4w时升至对照组水平;脾指数自造模1w后呈逐渐增加趋势,3、4w时明显高于对照组;与对照组相比,脾虚模型组大鼠血清IL-1β水平第1w明显升高,3w、4w时均显着降低;血清IL-2水平3w时明显降低,第4w明显升高;血清IL-6水平3w时明显升高,第4w明显降低;血清TNFα水平3w时明显升高,第4w明显降低。4.神经递质:与对照组相比,脾虚模型组大鼠海马5-HT水平3w时明显降低,自然恢复期显着升高;海马DA水平第1、2、3、4w均明显升高;海马NE3w时明显降低,余未见明显差异;海马HIAA3w时明显降低;海马HVA2w时明显降低;海马DOPAC从第1-4w逐渐下降,3w时明显降低。5.HPA轴:脾虚模型组大鼠肾上腺重量第1、2w与对照组接近,3、4w时显着低于对照组;肾上腺指数第1-3w上升,4w时降低至原水平,其中3w时明显升高;与对照组相比,脾虚模型组大鼠下丘脑CRH3w时明显降低,第4w显着升高;血浆ACTH第1-3w逐渐降低,3w时明显降低,4w时有所回升;血浆CORT第1-3w持续降低,4w时迅速回升,1w、3w、4w时均明显降低。结论:该模型大鼠表现出部分类似脾虚证的症状,存在小肠吸收功能障碍、胃肠功能、免疫系统、神经递质、HPA轴功能的紊乱。结果提示本模型符合中医脾虚证的表现,且存在胃肠功能紊乱和神经-内分泌-免疫网络中多环节的调节障碍。研究二四君子汤、柴疏四君汤和柴胡疏肝散对脾虚证大鼠模型的作用方法:将大鼠随机分为2组:对照组(20只),模型组(50只),模型组大鼠按上述制模方法处理3w,于造模第3w末分别从对照组和模型组随机各取大鼠10只取材。第22d停止造模,模型组大鼠随机分成脾虚模型(model)、柴胡疏肝散(CHSGS),四君子汤(SJZT)、柴疏四君汤(CSSJT)四组,每组10只。中药叁组分别按1mL/100g体重给予柴胡疏肝散、四君子汤、柴疏四君汤灌胃,连续7d,每日1次。模型组和对照组分别给予等量蒸馏水。4w末剖杀取材,用上述方法测定相关指标,并用MTT法测定脾T淋巴细胞增殖转化功能。结果:1.胃肠功能:与对照组相比,造模3w时模型组大鼠尿D-木糖排泄率显着降低,第4w时脾虚模型组大鼠尿D-木糖排泄率仍显着降低。与脾虚模型组相比,四君子汤组和柴疏四君汤组大鼠尿D-木糖排泄率显着升高,且四君子汤组显着高于柴疏四君汤组,柴胡疏肝散组无明显变化。与对照组相比,造模3w时模型组大鼠血清GAS、血浆MTL、VIP水平明显降低,血浆SS水平显着升高;第4w时脾虚模型组大鼠血清GAS、血浆MTL水平明显升高,血浆SS、VIP水平明显降低。与脾虚模型组相比,四君子汤组、柴疏四君汤组血清GAS水平显着升高,两方无明显差异,柴胡疏肝散组无明显变化。四君子汤组血浆MTL水平明显降低,柴胡疏肝散组、柴疏四君汤组无明显变化;四君子汤组、柴疏四君汤组血浆SS水平明显升高,柴胡疏肝散组无明显作用;四君子汤组血浆VIP明显升高,柴疏四君汤组无明显变化,柴胡疏肝散组明显降低;与柴胡疏肝散组比较,四君子汤组大鼠血浆VIP显着升高。2.免疫系统:与对照组相比,造模3w时模型组大鼠血清IL-1β、IL-2水平明显降低,而血清IL-6、TNFα水平明显升高。第4w时脾虚模型组大鼠血清IL-1β、IL-2、IL-6、TNFα均明显降低。与脾虚模型组相比,四君子汤组、柴疏四君汤组血清IL-1β均明显升高,两方之间无明显差异,柴胡疏肝散组无明显变化;柴胡疏肝散组血清IL-2明显降低,而四君子汤组明显升高,柴疏四君汤组未见明显变化;四君子汤组血清IL-6明显升高,柴胡疏肝散组、柴疏四君汤组有升高趋势;四君子汤组血清TNFα明显升高,柴胡疏肝散组和柴疏四君汤组均无明显变化。脾虚模型大鼠脾T淋巴细胞增殖转化功能显着低于对照组;与脾虚模型组相比,柴胡疏肝散组和柴疏四君汤组大鼠脾T淋巴细胞增殖转化功能均显着降低,四君子汤组显着升高,并显着高于柴胡疏肝散组和柴疏四君汤组。3.神经递质:与对照组比较,造模3w时模型组大鼠海马5-HT、NE含量明显降低,而海马DA含量显着升高。第4w时脾虚模型组大鼠海马5-HT、NE含量明显降低,而海马DA含量明显升高。与脾虚模型组相比,四君子汤组大鼠海马5-HT的含量明显升高,柴胡疏肝散组、柴疏四君汤组有升高的趋势,但作用不及四君子汤组明显;叁组大鼠海马DA的含量明显降低,以四君子汤组降低的值接近对照组DA水平,以柴疏四君汤组的降幅最明显;叁组大鼠海马NE水平均明显升高,叁组之间无明显差异。4.HPA轴:与对照组相比,造模3w时模型组大鼠垂体ACTH、血浆ACTH、CORT水平明显降低。第4w时脾虚模型组大鼠垂体ACTH水平有降低趋势,血浆ACTH、CORT明显降低。与脾虚模型组相比,叁组垂体ACTH水平无明显变化,四君子汤组、柴疏四君汤组血浆ACTH明显升高,以柴疏四君汤组作用最明显,但四君子汤组升高值接近对照组水平,柴胡疏肝散组无明显变化;叁组血浆CORT水平明显升高,以柴疏四君汤组作用明显。结论:脾虚模型大鼠表现有胃肠功能、免疫系统、神经递质、HPA轴等方面的异常变化;被观察的叁方均具有不同程度的调节作用,其中四君子汤能明显降低模型大鼠血浆MTL、海马DA;升高模型大鼠血清GAS、IL-1β、IL-2、IL-6、TNFα、海马5-HT、NE、血浆SS、VIP、ACTH、CORT及脾T淋巴细胞增殖转化功能。柴胡疏肝散能明显降低模型大鼠血浆VIP、血清IL-2、海马DA及脾T淋巴细胞增殖转化功能;能明显升高模型大鼠海马NE、血浆CORT。柴疏四君汤能明显升高模型大鼠血清GAS、IL-1β、血浆SS、ACTH、CORT、海马NE;能明显降低模型大鼠海马DA及脾T淋巴细胞增殖转化功能。结果提示,四君子汤在调节脾虚模型胃肠功能、神经-内分泌-免疫网络异常改变方面优于柴胡疏肝散、柴疏四君汤;较之于柴胡疏肝散和柴疏四君汤二方,四君子汤与中医脾虚证之间具有更大的关联性。研究叁四君子汤对脾虚证大鼠模型的其他作用方法:将大鼠随机分为对照组(20只)和模型组(30只)。模型组按上述方法制模,于造模第3w末分别从对照组和模型组随机各取大鼠10只取材,第4w停止造模,模型组大鼠随机分成脾虚模型组(model)、四君子汤(SJZT)两组,每组各10只。四君子汤组按1mL/100g体重给予灌胃,连续7d,每日1次。脾虚模型组和对照组分别给予等量蒸馏水。于4w末剖杀取材,放免法检测血清TSH、T3、T4和血浆TXB2、6-keto-PGF1a;高效液相法检测肝组织能荷;全自动生化分析仪检测血清LDL、CK、P-AMY;比色法检测肝组织Na+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase、Ca2+-ATPase;血液粘度测试仪测定血流变。结果:1.甲状腺轴:与对照组相比,造模3w时模型组大鼠血清TSH、T3、T4均明显降低。4w时脾虚模型组大鼠血清TSH、T3、T4仍均明显降低;与脾虚模型组相比,四君子汤组大鼠血清TSH、T3、T4均明显升高。2.肝组织能荷:与对照组相比,模型组大鼠3w时肝组织ATP、ADP、EC显着升高,AMP显着降低;4w时脾虚模型组肝组织ATP、ADP、EC和AMP值仍明显升高或降低。与脾虚模型组相比,四君子汤组大鼠肝组织EC明显升高,AMP明显降低。3.血清及肝组织酶:与对照组比较,3w时模型组大鼠血清LDH、CK显着降低,P-AMY显着升高,肝组织Na+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase、Ca2+-ATPase活力均显着降低;4w时脾虚模型组血清LDH明显降低,P-AMY仍明显升高,CK有回升趋势,肝组织Na+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase、Ca2+-ATPase活力仍明显降低。与脾虚模型组相比,四君子汤组大鼠血清LDH明显升高,P-AMY明显降低,CK无明显变化,肝组织Ca2+-Mg2+-ATPase、Ca2+-ATPase活力均显着升高,Na+-K+-ATPase活力无明显变化。4.血液流变学及TXB2、6-keto-PGF1a:与对照组相比,模型组大鼠3w时150/s、38/s、10/s、5/s切变率下的全血粘度和还原粘度均呈不同程度显着升高,红细胞压积显着升高,聚集指数显着降低,血浆TXB2、6-keto-PGF1a及其比值均明显升高;4w时各切变率下的全血粘度和还原粘度仍显着升高,聚集指数显着降低,红细胞压积和变形指数均无明显差异,血浆TXB2、6-keto-PGF1a均较3w时升高,其中6-keto-PGF1a明显升高,其比值明显降低。与脾虚模型组相比,四君子汤组大鼠150/s、10/s、5/s切变率下的全血粘度明显降低,150/s切变率下的还原粘度明显降低;红细胞压积、聚集指数、变形指数均无明显差异;血浆TXB2明显降低,6-keto-PGF1a显着降低,TXB2/6-keto-PGF1a明显升高。结论:脾虚证模型存在甲状腺功能、能量代谢、血液流变学及TXB2/6-Keto-PGF1a的异常改变;四君子汤可明显升高脾虚模型组大鼠血清TSH、T3、T4、LDH、肝组织EC、Ca2+-Mg2+-ATPase、Ca2+-ATPase活力及TXB2/6-keto-PGF1a,明显降低模型大鼠血清P-AMY、肝组织AMP、全血粘度、还原粘度、血浆TXB2、6-keto-PGF1a。结果表明,四君子对脾虚模型大鼠出现的甲状腺功能、酶学、血液流变学异常具有一定的调节作用。研究四脾虚证大鼠模型相关基因表达及四君子汤对其的影响方法:将大鼠随机分为对照组(20只)和模型组(30只)。模型组按上述方法制模,于造模第3w末分别从对照组和模型组随机各取大鼠10只在无菌条件下取脾脏。第4w停止造模,造模组动物随机分成脾虚模型(model)、四君子汤(SJZT)两组,每组各10只。四君子汤组按1mL/100g体重给予四君子汤灌胃,连续7d,每日1次。模型组和对照组分别给予等量蒸馏水。同前法于第4w末在无菌条件下剖取脾脏,进行脾脏RNA的提取、样品RNA荧光标记、杂交与清洗、芯片扫描、图像采集与数据分析;主要利用http://www.biorag.org/中的功能基因库对获得的差异基因进行功能查询。结果:与对照组相比,造模3w时脾虚模型组大鼠差异表达基因有70条,其中上调基因有6条,下调基因有64条;其中涉及到已知功能基因有RSK、Mpo、Epx_predicted、Ear11、Rn30000067、Rn30023859、Rn30000254、Hsd17b2、Serpinb10、Serpinb2、Rn30014199、Ppbp、Rn30003138、Rhag、Rn30014371、Ngp_predicted、Arl4、Gnaz、Depdc1_predicted、Gp5、Neu2、Rn30016562。与脾虚模型组比较,四君子汤组差异表达基因有446条,其中上调基因有201条,下调基因有245条;其中涉及到已知功能基因主要有Map3k1、Pla2g1b、Gprk2l、IL9、Akt2、Pik3r1、Nfkbia、Abcb9、Abcb3、Pnlip、Pnliprp1、Pnliprp2、Gp2、RGD1310132、RGD1565722、Iiig9。结论:脾虚证模型存在部分基因的异常表达,涉及细胞因子调节、细胞内信号转导、酶催化活性、能量代谢、蛋白质合成等多个方面;四君子汤对脾虚的基因表达具有广泛作用,其中涉及到对MAPK信号通路、甘油磷脂代谢、G蛋白偶联受体信号系统、JAK-STAT信号通路等多个方面。结果提示,多个基因的异常表达可能是中医脾虚证的分子基础,而脾虚证治方则对包括与脾虚证相关的基因在内的多个基因发挥复杂的调节作用。综上,采用游泳劳倦和饮食失节复合法复制出的脾虚证模型,表现出少动、乏力、食欲减退、消瘦、大便稀溏等脾虚证的类似症状,伴有胃肠功能、神经-内分泌-免疫、血液流变学、能量代谢等多系统的功能紊乱,并存在部分基因的异常表达。结果提示,中医脾虚证可能是一个以多组基因表达异常为基础、涉及神经-内分泌-免疫网络中多环节调节障碍的综合征。四君子汤、柴胡疏肝散和柴疏四君汤叁方对脾虚证模型的神经-内分泌-免疫方面有一定的调节作用,其中四君子汤对脾虚模型胃肠激素、免疫因子、神经递质方面均有很好的调节作用;柴胡疏肝散对神经递质有调节作用,能使降低的VIP、IL-2、脾T淋巴细胞增殖转化功能再度降低;柴疏四君汤主要对神经递质、HPA轴有调节作用。四君子汤在调节脾虚模型神经-内分泌-免疫、胃肠功能方面明显优于柴胡疏肝散和柴疏四君汤。对叁方治疗效应谱和作用强度的综合评价表明,四君子汤对脾虚模型的疗效最好,柴疏四君汤次之,柴胡疏肝散较差,四君子汤与脾虚证的关联性最大。四君子汤还对模型中存在的甲状腺功能、血液流变学、能量代谢等方面的异常有一定的改善作用,对模型的多个基因的表达具有广泛影响。结果提示,四君子汤可能在多系统不同功能纬度和整体-组织-细胞-基因不同结构层次上对脾虚证发挥调节作用而呈现出中医的整体综合功效。本课题从同证异方的角度对中医脾虚证及相关方剂作用的生物学基础进行了较为全面的探查,不仅为揭示中医“方证相关”这一逻辑命题进行了有益的方法学探索,而且为认识“方证相关”及其科学内涵提供了一定的客观实证。
卓缘圆[8]2010年在《电针对脾虚证幼鼠中枢神经细胞保护作用的研究》文中指出近年来中医对脾虚证进行了大量有价值的探索性研究工作,脾虚证不仅对消化系统、免疫功能等方面带来损害,还对中枢神经系统造成影响,如脾虚可引起脑内神经元、神经递质、神经营养因子、信号转导、基因表达等相关的改变,还可以影响脑神经细胞的分化和增殖,改变组织的重塑能力,从而引起皮质和海马等脑组织的结构的改变,进而影响脑功能。针刺疗法在脾虚证的治疗中有很好的疗效,具有一定的临床和实验基础,因而我们设想,对于脾虚证引起的脑神经细胞损害,是否能够通过纠正脾虚证,改善脾虚的状态,从而有效地保护损伤的神经细胞,促进脑神经功能的恢复。基于此种设想及参阅大量文献,本课题以神经干细胞的增殖和分化为切入点,从文献研究与实验研究两方面,探讨电针治疗对脾虚证引起神经细胞损伤的保护作用和机制。1、目的：观察脾虚证幼鼠侧脑室下区、海马齿状回区的细胞结构和神经干细胞增殖、分化情况,同时观察这两个脑区碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及其mRNA的表达,以及电针足叁里、叁阴交穴位对细胞结构、神经干细胞增殖、分化和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及其mRNA表达的影响,以期从神经干细胞角度揭示电针对脾虚证幼鼠中枢神经保护作用的途径和机制,为针灸治疗脾虚证引起的中枢神经细胞损伤提供理论和实验依据。2、方法：SPF级幼年健康雄性SD大鼠192只,鼠龄为4周龄,体重55±5g。适应环境饲养3天后开始实验。按随机数字表法分为正常组、模型组、电针组,每组64只。每组再分别随机分为7天组、14天组、28天组和49天组四个亚组,每亚组16只。采用大黄灌胃法、利血平腹腔注射法联合饥饱失常法制作实验性大鼠脾虚证模型,造模时间为14天,观察脾虚证大鼠的外观表现和体重变化,电针组在造模期结束后于双侧足叁里、叁阴交穴行电针治疗,采用疏密波刺激(密波15Hz),强度6-15V,持续时间为20分钟,每日一次至动物处死。模型组在造模期结束后固定于针刺操作台上20分钟,不作任何治疗。2.1各亚组随机选择2只大鼠,共24只大鼠分别在实验设定的时间点处死,进行灌注固定取脑,用光学显微镜和电子显微镜观察正常组、模型组和电针组大鼠侧脑室下区和海马齿状回区的病理形态学改变。2.2各亚组随机选择6只大鼠,共72只大鼠,分别在实验设定的时间点前两天进行Brdu腹腔注射,处死后进行灌注固定取脑,运用双重免疫组化方法对正常组、模型组和电针组大鼠侧脑室下区和海马齿状回区Brdu细胞、Brdu/Nestin. Brdu/GFAP和Brdu/NSE细胞进行标记,采用美国Image-Pro Plus专业图像分析软件进行图像分析,400倍光镜下进行阳性细胞计数,最后用Statal0.0软件进行统计分析,比较各组差异。2.3各亚组随机选择8只大鼠,共96只大鼠分别在实验设定的时间点处死,运用免疫组化法对正常组、模型组和电针组大鼠侧脑室下区和海马齿状回区的bFGF蛋白进行标记,采用美国Image-Pro Plus专业图像分析软件进行图像分析,200倍光镜下进行阳性细胞计数,并运用RT-PCR技术测定bFGF mRNA表达,最后用Statal0.0软件进行统计分析,比较各组差异。3、结果：3.1模型大鼠较正常大鼠明显消瘦,毛色不荣,并出现成群蜷缩、扎堆、拱背、精神倦怠、嗜卧、眼眯、四肢无力或见颤抖、反应迟钝、拉尾排便次数增多。3.2与正常组比较,光镜下观察模型组脑组织内神经元轮廓模糊,胞体肿大,周围间隙增宽,核碎裂,胞浆出现空洞,空泡形成,细胞带层次减少。电针组脑组织内神经元轮廓尚清晰,细胞核形态正常,细胞带尚均匀,可见有胶质细胞浸润。电镜下观察模型组脑结构在神经元胞体和神经毡区都有改变,尤以线粒体和突触终末端的改变明显,电针组神经元损伤程度较轻,细胞结构良好。3.3无论是在侧脑室下区或海马齿状回区,双重免疫组化都有相似的结果。正常组大鼠Brdu、Brdu/Nestin、Brdu/GFAP、Brdu/NSE的表达在各时间段均无统计学意义(P>0.05)。Brdu的表达在模型组7天组和14天组较正常组低(P<0.05),到28天组恢复到正常组水平；在电针组7天组表达已达正常水平,14天组的表达最为显着,在28天组和49天组逐渐减少,但仍多于同期正常组和模型组(P<0.05)。Brdu/Nestin阳性细胞的表达在模型组7天组仅有少量,在14天组达到正常水平(P>0.05),28天组达到高峰(P<0.05)；在电针组7天组即可与正常组相当,在14天组达到高峰值,28天和49天组逐渐减少,但与同期的模型组与正常组比较仍有统计学意义(P<0.05)。Brdu/GFAP阳性细胞的表达在模型组7天组和14天组均较同期正常组少(P<0.05),28天组可达到正常组水平(P>0.05)；而在电针组7天组即可达到正常的水平(P>0.05),14天组为高峰期,28天后逐渐减少,恢复到基线水平。Brdu/NSE阳性细胞的表达在模型组7天组和14天组均较同期正常组少(P<0.05),28天组可达到正常组水平(P>0.05)；而在电针组7天组即可达到正常的水平(P>0.05),14天组开始增多,28天组达到高峰值,以后逐渐恢复至正常水平。3.4无论是在侧脑室下区或海马区,bFGF及其mRNA在各时间段同期表达都是一致的。模型组bFGF及其mRNA表达在7天组处于基线水平,14天组明显增多,与同期正常组相比差异有非常显着性意义(P<0.05)；28天组仍停留在一个高水平,至49天回落,与正常组比较无统计学意义(P>0.05)。与模型组不同,电针组bFGF及其mRNA表达在7天组即处于较高的表达,与模型组和正常组比较具有显着性差异(P<0.01),14天组稍有下降,但较同期正常组仍有明显差异(P<0.01),并且这一表达水平可以持续至49天。4、结论本研究选择大黄灌胃、利血平腹腔注射联合饥饱失常法造成幼鼠实验性脾虚状态的病理模型,应用组织形态学、免疫组织化学等方法,围绕着神经干细胞的生长、增殖和分化对脑神经细胞的影响展开探讨,观察脾虚对脑神经细胞所造成的影响,同时分析电针对脾虚造成的神经细胞损害的保护作用及其机制。结果如下：脾虚证可出现脑神经元胞体和突触的改变,同时导致神经干细胞增殖和分化能力降低。电针“足叁里”“叁阴交”穴对脾虚所造成脑组织的损害有保护作用,使脑神经元损伤程度较轻,维持正常的细胞形态,保护神经毡中突触的基本结构,同时电针能促进脾虚证大鼠神经干细胞的增殖,适当地促进侧脑室下区和海马齿状回区增殖的神经干细胞往星形胶质细胞及神经元方向分化,电针的保护作用可能与促进bFGF蛋白及其mRNA表达上调有关。综上所述,我们认为对于脾虚证引起的中枢神经细胞损害,通过电针的刺激作用可以改善机体脾虚的功能状态,消除致病因素,并且诱导神经干细胞增殖、分化,从而使脾虚证所造成的受损的神经细胞得到修复。
李晨[9]2013年在《四君子汤对脾虚证大鼠外周血CD4~+、CD8~+影响的实验研究》文中提出目的：探讨四君子汤对脾虚证大鼠外周血CD4+、CD8+的影响。方法：将SPF级SD大鼠102只，体重（200±20）g随机分为4组。正常对照组24只，脾虚模型组、自然恢复组和四君子汤组各26只。造模因素：采用复合因素造模方法。除正常对照组外，脾虚模型组、自然恢复组和四君子汤组均制作大鼠脾虚模型。脾虚模型建立采用耗气破气药物、饥饱失常和劳累叁种复合因素造模，即小承气汤（1.5ml/100g）隔日一次灌胃，灌胃当日禁食，次日足量喂食且游泳至耐力极限。干预因素：正常对照组大鼠常规喂养，生理盐水（1.5ml/100g）灌胃，隔日1次，共7周。脾虚模型组大鼠以上述造模方法喂养7周。自然恢复组大鼠喂养方法前4周同脾虚模型组，4周后改为常规喂养，共7周。四君子汤组大鼠喂养方法前4周同脾虚模型组，4周后改为常规喂养，同时用四君子汤（1.5ml/100g）灌胃3周，每日1次。结果：1.一般情况：（1）正常对照组：大鼠活动正常，反应灵敏，背毛光泽，大便正常，体重增长明显，食欲良好。（2）脾虚模型组：大鼠少动，精神倦怠，扎堆，眯眼，弓背，毛色枯黄脱落，失去光泽，大便稀溏，体重增长缓慢或减少，食量减少。（3）自然恢复组与四君子汤组：1-4周造模期间，表现同脾虚模型组；5-7周自行恢复、治疗期间，表现逐渐恢复，接近正常对照组。2.体重方面：第1-4周造模期间：脾虚模型组、自然恢复组、四君子汤组与正常对照组比较，差异有统计学意义（P<0.01，P<0.05）；第5-7周：自然恢复组、四君子汤组与脾虚模型组比较，差异有统计学意义（P<0.01，P<0.05）。3.食量方面：第1-4周造模期间：脾虚模型组、自然恢复组、四君子汤组与正常对照组比较，差异有统计学意义（P<0.01）；第5-7周：自然恢复组、四君子汤组与脾虚模型组比较，差异有统计学意义（P<0.01）。4.游泳时间、尾周直径、肛温方面：游泳时间方面：各组之间比较，差异无统计学意义（P>0.05）。尾周直径方面：正常对照组与脾虚模型组比较，差异有统计学意义（P<0.05）；四君子汤组与脾虚模型组比较，差异有统计学意义（P<0.01）。肛温方面：各组之间比较，差异无统计学意义（P>0.05）。5.脾脏指数、胸腺指数方面：各组之间在脾脏质量、脾脏指数、胸腺质量、胸腺指数方面比较，差异无统计学意义（P>0.05）。6.外周血CD4+、CD8+、CD4+/CD8+方面：外周血CD4+方面：自然恢复组、四君子汤组与正常对照组比较，差异有统计学意义（P<0.01）；自然恢复组、四君子汤组与脾虚模型组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。外周血CD8+方面：各组之间比较，差异无统计学意义（P>0.05）。CD4+/CD8+方面：各组之间比较，差异无统计学意义（P>0.05）。7.光镜下表现：脾虚模型组为黏膜缺损，固有层血管扩张充血。自然恢复组为固有层炎症不明显，血管扩张充血不明显，炎细胞浸润可见。四君子汤组为固有层扩张充血。正常对照组为基本正常。结论：1.脾虚能使胃黏膜各级防御机制下降，进而导致胃黏膜屏障功能减退。外周血CD4+、CD8+的水平作为局部免疫调节反应了胃黏膜屏障的防御机制，进而反应了机体整体的免疫调节水平。2.脾虚能导致胃黏膜屏障功能减退，这可能是导致慢性胃病发生的病理生理基础之一。3.四君子汤作为治疗药物能够通过改善外周血CD4+、CD8+的水平来修复胃黏膜，从改善局部免疫调节水平方面来调整机体整体的免疫功能，进而增强各级防御系统防御功能，从而达到治疗脾虚证慢性胃病的机理，进一步反应了健脾益气药物修复胃黏膜的作用机制。
李俊[10]2010年在《溃疡性结肠炎患者脾虚证肠粘膜线粒体体视学研究》文中指出目的：脾为后天之本,气血生化之源,在生命活动过程中占有重要地位。脾虚证是中医脾胃病常见的病证之一,若脾虚失运,则脏腑、肌肉无以充养、各器官的功能活动则会减退。长期以来,脾虚证一直是人们研究的热点。本研究旨在对溃疡性结肠炎患者脾胃气虚组、大肠湿热组及正常对照组肠上皮柱状细胞线粒体的体视学进行比较,为中医“脾-线粒体相关”理论提供线粒体变化的体视学依据,从而丰富中医“脾-线粒体相关”理论,完善脾胃学说的研究,揭示中医脾的本质。方法：广州军区广州总医院住院及门诊患者共18例,参照排除标准,选择病例,分脾胃气虚组、大肠湿热组证和正常对照组,分别为6例、7例和5例；在肠镜下取肠粘膜组织,常规电镜制样、半薄切片定位后行超薄切片；按体视学原理和方法在电镜下随机摄片,用Image-Pro图像分析软件设计方网测试系统进行测试。按体视学公式分别计算它们的下列参数：体积密度(Vv)、表面积密度(Sv)、数密度(Nv)、平均体积(V)、平均表面积(S)、平均自由程(λ)、表面积与体积比(Rs,)。结果：通过投射电镜观测到：大肠湿热组线粒体较丰富,少数线粒体膜或嵴破坏；脾虚组不仅线粒体数量减少,而且线粒体的结构有明显损伤,可见线粒体肿胀、膜缺损、嵴断裂、基质变淡等超维结构的改变。线粒体的体视学定量测试结果也显示：与正常组比较,脾虚组细胞线粒体的Nv减小,差值较大,差异亦有显着性(P<0.05),λ增大,差值较大,差异亦有显着性(P<0.05),脾虚组线粒体分布明显稀疏,单位体积胞质内线粒体数目明显减少；脾虚组Rsv减小,差值较大,差异亦有显着性(P<0.05),脾虚组线粒体结构发生肿胀等形态变化；S和V值增大(P<0.05)；与大肠湿热组比较Nv减小(P<0.05)、λ增大(P<0.05)、Rsv减小(P<0.05)、V增大(P<0.05)、Sv减小(P<0.05)、V,减小(P<0.05)。结论：本课题运用图像分析技术和现代体视学技术,从叁维水平上较系统地定量的对溃疡性结肠炎患者脾虚证线粒体形态结构的基本特点和变化规律进行揭示,结果显示,无论是从体视学密度参数数密度(N,)、体积密度(Vv)、表面积密度(Sv),形状参数比表面和平均表面积(S),尺寸参数平均体积,分布参数平均自由程(λ)等,都表明脾虚组线粒体数目减少,分布明显稀疏,结构发生肿胀、变形等。本课题所采用的现代体视学技术,避免了既往对于细胞形态结构采用定性或半定量的描述方法所带来的人为的误差和不确定性,使结果更具客观性和准确性,结果也进一步印证了中医“脾一线粒体相关”理论,从亚细胞水平,较确切的阐明了脾本质的实质内涵。
参考文献：
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[8]. 电针对脾虚证幼鼠中枢神经细胞保护作用的研究[D]. 卓缘圆. 广州中医药大学. 2010
[9]. 四君子汤对脾虚证大鼠外周血CD4~+、CD8~+影响的实验研究[D]. 李晨. 辽宁中医药大学. 2013
[10]. 溃疡性结肠炎患者脾虚证肠粘膜线粒体体视学研究[D]. 李俊. 广州中医药大学. 2010
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