（四川省人民医学科学院·四川省人民医院耳鼻咽喉头颈外科 四川 成都 610072）
【摘要】目的：观察黄芩苷对过敏性鼻炎（AR）大鼠免疫因子及IL-33/ST2信号通路的影响。方法：24只健康SD大鼠随机分为空白组（A）、模型组（B）、黄芩苷低剂量组（C）、黄芩苷高剂量组（D），除A组外，其余3组建立大鼠AR模型。每组于致敏第15d后开始给药，C、D组分别以50、100mg/kg黄芩苷尾静脉注射，A、B组灌胃等量0.9%生理盐水，连续14d，处死，采样待检。HE染色观察鼻黏膜组织病理学变化；ELISA检测血清IgE、IL-4、INF-γ含量；RT-PCR检测鼻黏膜IL-33、ST2、NF-kB mRNA表达。结果：D组较B组IgE、IL-4、IL-33、ST2、NF-kB表达均明显降低，IFN-γ含量明显升高（P＜0.01）。结论：黄芩苷可调节AR免疫因子及IL-33/ST2信号通路，对AR有治疗作用。
【关键词】 过敏性鼻炎；黄芩苷；免疫因子；大鼠
【中图分类号】R969.4 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2019）05-0037-03
Effect of Baicalin on immune factor and IL-33/ST2 signaling pathway in rats with allergic rhinitis
Ma Zhiyue(Correspondence?author),Li Bin, Feng Yong, Yu Xiaoxu, Fan Jiangang, He Gang.
Sichuan Academy of Medical Sciences Sichuan People's Hospital , Chengdu,Sichuan 610072,China
【Abstract】Objective To observe the effect of baicalin on immune factors and IL-33/ST2 signaling pathway in allergic rhinitis (AR) rats. Methods Twenty-four healthy SD rats were randomly divided into blank group (A), model group (B), baicalin low-dose group (C), and baicalin high-dose group (D). Rat AR models were established in the remaining 3 groups except group A. Each group was started after 15 days of sensitization. Groups C and D were injected intravenously with 50 and 100 mg/kg baicalin. Groups A and B were intragastrically administered with 0.9% normal saline for 14 days and the rats were sacrificed and samples were taken for examination. The histopathological changes of nasal mucosa were observed by HE staining. Serum IgE, IL-4 and INF-γ levels were detected by ELISA. The expressions of IL-33, ST2 and NF-kB mRNA in nasal mucosa were detected by RT-PCR. Results The expression of IgE, IL-4, IL-33, ST2 and NF-kB in group D was significantly lower than that in group B, and the content of IFN-γ was significantly increased (P<0.01). Conclusions Baicalin can regulate AR immune factor and IL-33/ST2 signaling pathway and has therapeutic effect on AR.
【Key words】Allergic rhinitis;Baicalin;Immune factor;Rats
过敏性鼻炎（allergic rhinitis，AR）是鼻炎中反复发作且最常见的慢性病之一，严重影响患者的生活质量[1]。目前研究提示黄芩苷对食物过敏及过敏性皮炎有治疗作用，虽然大多数治疗AR的经验方含有黄芩苷，但目前针对黄芩苷对于AR治疗作用效果及机制研究较少[2]。因此，为进一步探讨黄芩苷对AR的作用效果和机制，本试验建立大鼠AR模型，观察黄芩苷对AR大鼠的治疗效果及其IL-33/ST2通路调节机制。
1.材料与方法
1.1 实验动物与分组
24只健康SD大鼠，体质量（200±10）g，雌雄各半，购于成都达硕实验动物有限公司，使用许可证号：SYXK（川）2014-189。试验动物随机分为空白组（A）、模型组（B）、黄芩苷低剂量组（C）、黄芩苷高剂量组（D），每组6只，清洁级实验室饲养。
1.2 大鼠AR模型构建
参照常用卵清蛋白（OVA）复制AR模型方法[3]：将OVA 0.4mg、铝佐剂40mg及生理盐水1mL混合，B、C、D组大鼠腹腔注射1mL，隔日1次注射致敏，连续7次，A组注射等体积生理盐水。第15～17天、第18～20天、第21～28天分别以0.25%、2%、5%的OVA双侧滴鼻激发，每次100μL/鼻孔，A组大鼠以等体积生理盐水滴鼻激发，1次/d。
1.3 药物干预
各组大鼠于致敏第15d后开始给药，黄芩苷低、高剂量组分别尾静脉注射50、100mg/kg黄芩苷，空白组、模型组灌胃等量0.9%生理盐水，1次/d，连续14d。
1.4 样本采集
末次给药1h后，戊巴比妥钠（60mg/kg）腹腔注射麻醉，腹主动脉取血，离心取血清，剥离双侧鼻中隔黏膜，每只的组织样本分为两份，一份于4%多聚甲醛固定，用于后续组织病理检测，另一份于-80℃低温保存，用于后续RT-PCR检测；血清样本于4℃低温保存，并于48h内检测血清因子。
1.5 检测项目
将固定的鼻黏膜组织按常规方法制备石蜡切片，HE染色，镜检观察病理组织学变化；ELISA试剂盒（上海茁彩）检测血清IgE、IL-4、INF-γ含量；RT-PCR检测鼻黏膜IL-33、ST2、NF-kB mRNA表达。
1.6 统计学方法
运用SPSS20.0统计软件进行分析处理，计量资料以均数±标准差（x-±s）描述，组间差异采用单因素方差统计分析，P＜0.05差异有统计学意义。
2.结果
2.1 病理组织观察
空白组鼻黏膜无炎症反应；模型组可见鼻黏膜水肿、充血，炎症细胞浸润，黏膜上皮坏死；黄芩苷低剂量组鼻黏膜有少量炎症细胞浸润；黄芩苷高剂量组可见轻度水肿，炎症细胞消失，图1～4。
图4 黄芩苷高剂量组（400×）
图1～4 大鼠鼻黏膜病理组织学变化
2.2 血清IgE、IL-4、INF-γ含量
造模成功后，血清IgE、IL-4含量较空白组明显升高，INF-γ含量明显降低（P＜0.01）。黄芩苷低、高剂量组较模型组均可明显降低IgE、IL-4含量，升高INF-γ含量（P＜0.05），高剂量组较低剂量组IgE、IL-4含量降低明显，INF-γ含量升高明显（P＜0.05），表1。
表1 各组大鼠血清IgE、IL-4、INF-γ水平 （x-±s）
注：同列上标不同大写字母表示P＜0.01，不同小写字母表示P＜0.05。
3.讨论
过敏性鼻炎（AR）临床症状为鼻黏膜水肿、流涕、鼻堵等[1]。近年来，由于中医药在AR临床应用价值愈见突出。因此，本试验采用黄芩苷治疗AR大鼠，考察病理组织结果表明，模型组黏膜上皮坏死，黏膜水肿、充血，黄芩苷低剂量组有少量炎症细胞浸润，黄芩苷高剂量组可见炎症细胞消失，轻度水肿，AR病理组织损伤减轻。
目前Th1/Th2细胞失衡是鼻炎发病的核心病理环节，而INF-γ、IL-4分别是Th1、Th2的重要细胞因子[4]。当Th细胞分化发生偏移则致IL-4分泌增加，INF-γ分泌减少，IL-4进而上调免疫球蛋白（IgE），IgE则是触发呼吸道变应性炎症的关键因素[5]。本试验结果显示模型组较空白组IgE、IL-4含量明显増加，INF-γ明显降低（P＜0.01）。黄芩苷低、高剂量组较模型组均明显降低IgE、IL-4含量，明显增加INF-γ含量（P＜0.01），说明黄芩苷可影响Th2的偏移。
IL-33对AR的发病与持续起着关键作用，IL-33可与ST2L组成的受体复合物的细胞外IgE结合后，激活衔接蛋白骨髓分化因子，继而调节相关激酶介导的受体因子活化，进一步激活下游的NF-kB，NF-kB与核内DNA结合可发挥基因转录调节作用[6-7]。本试验结果发现模型组IL-33、ST2、NF-kB mRNA表达较空白组明显増加（P＜0.01），黄芩苷低、高剂量组较模型组均可明显降低IL-33、ST2、NF-kB mRNA表达（P＜0.01），高剂量组降低程度更明显，提示黄芩苷可有效抑制IL-33/ST2信号通路。
综上所述，黄芩苷可平衡细胞因子，抑制IL-33/ST2信号通路，对AR治疗作用明显。
【参考文献】
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基金项目：四川省成都市科技局课题（2015-HM01-00172-SF）
论文作者:马志跃（通讯作者）,李彬,冯勇,余晓旭,樊建刚,何
论文发表刊物:《医药前沿》2019年5期
论文发表时间:2019/4/17
标签：黄芩论文; 剂量论文; 大鼠论文; 含量论文; 模型论文; 血清论文; 炎症论文; 《医药前沿》2019年5期论文;