薛云红1侯瑞生1周言2李丽1张勤1张新1赵青霞3孙长宇2
1河南国际旅行卫生保健中心郑州450003;
2郑州大学第一附属医院感染科郑州450002;
3河南省传染病医院河南郑州450005
基金项目：郑州市重点科技攻关项目（121PZDGG346）
通讯作者: 孙长宇，男，郑州大学第一附属医院感染科，主任医师，教授。
项目名称：HIV /AIDS 的Th1/Th2细胞分化及中性粒细胞功能变化的研究
【摘要】目的：探讨HIV-1感染患者不同期CD4+细胞数和Th1/Th2细胞因子变化规律。方法：采用流式细胞术检测不同期HIV-1感染患者外周血CD4+细胞数，ELISA检测Th1/Th2细胞因子水平。结果：急性期、无症状期和AIDS期患者CD4+细胞数均明显少于对照组，AIDS期和急性期、无症状期CD4+细胞数之间也有统计学差异（P<005，P<001）。CD8+细胞只有AIDS期和对照组有显著性差异（P<005）。随着疾病的发展，CD4+/CD8+比值呈下降趋势，HIV-1感染患者各期与对照组以及各期之间具有显著性差异（P<005，P<001）。患者的IL-2、INF-γ水平不断下降，无症状期、AIDS期的水平明显低于对照组（P<005，P<001）。IL-4、IL-10的水平呈上升趋势，各期的IL-4均明显高于对照组，且各期间也具有显著性差异（P<001，P<005）。无症状期和AIDS期的IL-10与对照组有显著性差异。结论：随着HIV-1感染患者病情发展，患者CD4+细胞数不断下降，Th1型细胞因子逐渐下降，Th2型细胞因子呈上升趋势。CD4+细胞数和Th1/Th2细胞因子水平可作为评估AIDS的严重程度的一个指标。
【关键词】HIV-1；CD4+；Th1/Th2；细胞因子
The study of Th1/Th2 cytokines changes of HIV-1 infection individuals in different stage
Xue Yunhong1Hou Ruisheng1Zhou Yan2Li Li1Zhang Qin1Zhang Xin1Zhao Qingxia3Sun Changyu2(1Henan international travel health care center,Zhengzhou,450003;
2Infection department of the First Affiliated Hospital of Zhengzhou University, Zhengzhou,450002;
3Infectious disease hospital in Henan Province,Zhengzhou, 450005)
【Abstract】
Objective To investigate the CD4+T cells counts and the level of Th1/Th2 cytokines changes of HIV-1 infection individuals in different stages. Methods The CD4+ T cells counts of HIV-1 infection individuals in the peripheral blood in different stages were detected
by flow cytometry method (FCM) , while the level of Th1/Th2 cytokines were detected by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Results Patients with acute stage, asymptomatic stage and AIDS stage , CD4+ T cells counts were significantly lower than the control group, besides ,there were statistical difference between each stage（P<005，P<001）. The CD8+ T cells counts only between the AIDS stage and the control group had statistically difference（P<005）.With the progress of the disease ,the CD4+/ CD8+ ratio was in decline ,which had significantly difference between each stage and the control group ,as well as among each stage（P<005，P<001）. The level of IL-2 and INF-γwere falling, and they were significantly lower than the control group with the asymptomatic stage and AIDS stage（P<005，P<001）.The level of IL-4、IL-10 were on the rise ,and the level of IL-4 with each stage was obviously higher than the control group, moreover, there had significant difference among each stage（P<001，P<005）.The level of IL-10 of the asymptomatic stage and AIDS stage also had significant difference with the control group. Conclusions With the progress of the disease , the CD4+ T cells counts and the level of Th1 cytokines of the HIV-1 infection patients gradually decline, but the level of Th2 cytokines is on the rise .Thus , the CD4+ T cells counts and the level of Th1/Th2 cytokines can be a marker to estimate the state of the AIDS.
【Key words】HIV-1 infection； CD4+ T cells； Th1/Th2； cytokine
【中图分类号】R34982 R392-33 【文献标识码】B【文章编号】16748999(2013)12051402
辅助性T细胞亚群（Th）产生的细胞因子在HIV感染的病情发展中发挥着重要作用［1］。根据细胞因子分泌模式不同，T淋巴细胞可分为Th1和Th2亚群。Th1分泌的细胞因子主要为白介素-2（IL-2）和γ-干扰素（INF-γ）等，介导巨噬细胞活化、细胞毒性T细胞，发挥抵御细胞内致病因子的作用；Th2分泌的细胞因子主要为白介素-4（IL-4）和白介素-10（IL-10）等，介导体液免疫、嗜酸性粒细胞、B细胞和IgE生成，发挥抵御细胞外致病因子的作用［2］-［3］。本研究通过检测HIV-1感染患者的外周血CD4+细胞数以及Th1/Th2型细胞因子水平，探讨HIV-1感染患者不同期CD4+细胞数以及Th1/Th2型细胞因子变化规律。
1资料与方法
11一般资料：参照WHO标准，选择我院2008年1月-2012年12月收治的HIV-1阳性患者90例，在这90例患者中，急性HIV感染患者30例，其中男性19例，女性11例，年龄段在18-65岁之间，平均年龄为（421±56）岁；无症状HIV感染患者30例，其中男性20例，女性10例，年龄段在18-67岁之间，平均年龄为（4291±51）岁；AIDS期患者30例，其中男性19例，女性11例，年龄段在19-64岁之间，平均年龄为（431±50）岁。选择30例健康志愿者为对照组，其中男性19例，女性11例，年龄段在17-65岁之间，平均年龄为（428±55）岁。各组患者在年龄、性别以及职业等因素等方面均无显著性差异（P>005）。
12方法
121收集标本： 收集不同期HIV-1感染患者和健康志愿者10ml乙二胺四乙酸( EDTA) 抗凝血，分离血清标本，在－70℃条件下保存待测。
122淋巴细胞的计数及其亚群的检测： 采用Beckman-Coulter公司的EPICS-XL 型流式细胞仪进行荧光抗体标记检测。取上述HIV/ AIDS 患者和健康献血员的新鲜抗凝血标本100 μL放入样品测定管, 加入相应的荧光标记的单克隆抗体(每种抗体加 10μL ) ，振荡混匀后室温避光温育20 min，每管加入500μL溶血素，振荡混匀，室温下溶血8 min。加入2 mlPBS，1500r/min洗两遍。加入1mlPBS混匀，立刻上机检测。用FITC-IgG1/ PE-IgG1/PEcy5-IgG1同型阴性对照管设立荧光染色的阴阳分界线，然后进行T淋巴细胞及其激活亚群的检测。
123细胞因子检测： 进行IL-2、INF-γ、IL-4和IL-10四种细胞因子的检测方法为：首先进行仪器调整：使用BD 公司的自己试剂通过BD FASComp软件进行仪器参数的设定，应用公司 CBA试剂盒中的Cytometer Setup Beads设定本实验中的设门、调节电压和补偿参数。接着制作细胞因子检测标准曲线：使用 CBA试剂盒中标准的细胞因子样按照1:2的方式进行浓度梯度的等比稀释，共稀释9个浓度梯度，空白对照用稀释液代替标准品，上机进行检测后，采用BD CBA软件对数据进行处理，绘制每个细胞因子的标准细胞曲线图。最后进行样品的制备和分析，将置于－70℃条件下冻存的血清置于37℃水浴锅中进行孵育5分钟，取50μL血清置于待检管然后依次加入50μL捕获微球(为六种捕获微球混合产物)，50μLPE标记的检测抗体，轻摇混匀后在室温条件下进行避光孵育2 h，加入1 ml洗液，在200 g条件下离心5 分钟，重复清洗1次后，加入300μL洗液上机进行检测，使用BD CBA软件进行数据分析，计算所含细胞因子含量。
124统计学方法：所有数据以x±s表示，采用SPSS170处理数据，组间比较采用t检验，P<005表示差异有统计学意义。
2结果
21不同期HIV-1感染患者和健康志愿者T细胞亚群计数：
急性期、无症状期和AIDS期患者CD4+细胞数均明显少于对照组（P<001），各期CD4+细胞数之间也有统计学差异（P<005，P<001）。CD8+细胞只有AIDS组和对照组有显著性差异（P<005）。随着疾病的发展，CD4+/CD8+比值呈下降趋势，HIV-1感染患者各期与对照组以及各期之间具有显著性差异（P<005，P<001）。结果见表1。
表1不同期HIV-1感染患者和健康志愿者T细胞亚群计数结果
注：与对照组比较，*P<005，**P<001；与急性期比较，#P<005，##P<001；与无症状期比较，▲P<005。
3讨论
艾滋病是由于人类感染了HIV-1病毒而引发的一种发病率和致死率很高的传染性疾病。自1981年发现首例艾滋病患者以来，已导致全球3900万人感染，尤其是妇女和儿童［4］。由于HIV-1病毒分布广，传染性强，突变率高，目前还没有有效的疫苗和药物可以治愈艾滋病，使得艾滋病一直以来都是世界各地关注的焦点和难点。艾滋病的传播给各地的经济和社会发展带来沉重的负担。
艾滋病(Acquired Immune Deficiency Syndrome, AIDS)，获得性免疫综合症，感染人类免疫缺损病毒 (Human immunodeficiency virus，HIV)而引起的疾病，Th细胞对机体的细胞免疫和体液免疫中发挥着重要的调节作用。HIV-1感染患者的Th1/Th2细胞免疫功能的动态平衡被打破，出现偏离，导致疾病的发生［5］-［6］。HIV病毒侵染人类免疫系统的重要组成部分，CD4+淋巴细胞和巨噬细胞，引起CD4+淋巴细胞数量明显下降，人体失去区分“自己”和“非己”的能力,导致免疫抑制［7］。艾滋病感染的阶段可以分为急性感染期（也称原发性感染），潜伏期和成熟期。急性感染可以持续几个星期，表现出包括发烧，淋巴结肿大，咽炎，皮疹，肌肉痛酸，乏力，口腔和胃溃疡等症状［8］。潜伏期几乎没有任何症状，具有个体化差异，可以持续2周到20年甚至更长时间。成熟期，艾滋病毒感染的最后阶段，CD4+ T细胞数量急剧下降到最低（每微升少于200个），并发各种机会性感染和癌症［9］。本研究发现，随着HIV-1感染患者的病程进展，CD4+细胞数呈减少趋势，CD8+细胞逐渐上升，CD4+/CD8+比值不断下降。各期CD4+细胞数、CD4+/CD8+比值与对照组有显著性差异，且各组间的差异也具有统计学意义，与相关研究一致［10］。结果表明，在一定程度上可以通过CD4+细胞数和CD4+/CD8+比值来观察患者病情的严重程度。
机体在感染HIV病毒后，当机体出现细胞因子分泌时代表机体自身免疫应答系统被激活，其中1型T辅助细胞主要分泌IL-2、INF-γ等，主要功能是加强细胞免疫。1型T辅助细胞主要分泌IL-4、IL-10等，主要功能是加强体液免疫。相关研究表明，HIV感染患者病情进展中，Th1型细胞因子（IL-2、INF-γ）表达降低，Th2型细胞因子（IL-4、IL-10）表达上升，与本研究结果相同。Th1状态处于优势时，免疫力增强；当Th2状态呈优势时，患者易感性增强，导致HIV病情加重［11］。因此，通过调节Th1/Th2平衡来增强患者免疫力，改善患者病情。
参考文献
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论文作者:薛云红1侯瑞生1周言2李丽1张勤1张新1赵青霞3孙长宇2
论文发表刊物:《中医学报》2013年12月第28卷供稿
论文发表时间:2014-3-24
标签：细胞因子论文; 细胞论文; 患者论文; 免疫论文; 差异论文; 对照组论文; 淋巴细胞论文; 《中医学报》2013年12月第28卷供稿论文;