谢芳艺[1]2001年在《Epstein-Barr病毒潜伏膜蛋白2A重组痘苗病毒转染DCs及特异性CTL的体外诱导》文中进行了进一步梳理本文旨在通过EB病毒LMP2A重组痘苗病毒转染的DCs体外诱导LMP2A特异性CTL。EB病毒是一种普遍存在的人类γ-疱疹病毒。现已证实，它与多种恶性疾病如鼻咽癌、Burkitt's淋巴瘤、大约50％的何杰金氏病以及免疫妥协病人的淋巴增生性疾病等有关联。鼻咽癌是我国广东、广西、香港及江苏沿海地区的高发肿瘤，不能采用手术切除，而化疗、放疗后不能有效清除肿瘤细胞，绝大多数病人复发。因此，进行鼻咽癌其它治疗手段的研究非常重要。近年来，树突状细胞（DC）由于具有最强的抗原递呈功能而成为研究的热点。DC可强有力地激活T细胞，有“天然免疫佐剂”之称。近年来，应用细胞因子体外诱生DC成功，满足了实验和临床应用的需要。通过GM-CSF、IL-4和TNF-α培养体系，我们诱导出了人外周血单核细胞来源的DC。同时，我们选用了在鼻咽癌患者中表达的EB病毒潜伏蛋白之一LMP2A作为靶基因，利用痘苗病毒这一载体，转染诱导的DC。随后，用紫外线照射转染的DCs灭活重组痘苗病毒。经此处理的DCs与自体PBMCs混合培养，在IL-2的刺激作用下获得特异性CTL。实验结果概述如下： 1．人外周血单核细胞经GM-CSF、IL-4、TNF-α的混合培养，10天可获得成熟的功能性DCs。FACS检测显示DC表面相对特异性标志CD83高表达（94.2％），MHC-Ⅰ、Ⅱ类分子及共刺激分子都高表达，分别为HLA-ABC（98.3％）、HLA-DR（96％），CD40（97.7％）、CD80（98.2％）。MLR结果显示此法诱导的DC 有京巨抖大学硕士学位论文具有强烈地激发初始型T细胞增殖的能力。 2．重组痘苗病毒可有效地将目的基因EBV工 导入DCS，经间接免疫荧光法及FACS检测表明转染的最佳条件为MOI叫，时间 12小时。另外，根据台盼蓝染色计数及照射上清接种CVI的结果综合分析，紫外线照射门0瓦特、35cm）能灭活重组痘苗病毒，而对DC无损伤，最佳照射时间为30分钟。 3．经照射处理的 DCS与自体 PBMCS vXI：20的比例混合培养，于培养第 4天加入 IL上，50U阿。于培养第 8天以同样比例加入转染并处理的DCS。培养过程中，每4天半量换液一次。培养第15天收获诱导细胞，采用LDH释放法检测CTL特异性杀伤活性，平均达34．3％。 我们的结果表明，重组痘苗病毒能有效地将目的基因＊B病毒LMPZA导入m，经过皿的加L、处理后，有效提呈给CD81细胞，并最终体外诱导出特异性CTL。本试验证实经过DC的有效递呈，EB病毒免疫原性较弱的潜伏蛋白能激发出有效的特异性CTL，为临床治疗鼻咽癌等EB病毒相关性疾病提供了实验和理论基础。
姚堃, 谢芳艺, 许继军, 彭光勇[2]2001年在《Epstein-Barr病毒潜伏膜蛋白2A重组痘苗病毒转染DC及特异性CTL的体外诱导》文中研究指明通过ＥＢ病毒ＬＭＰ２Ａ重组痘苗病毒转染的ＤＣＳ体外诱导ＬＭＰ２Ａ特异性ＣＴＬ，并通过ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－４和ＴＮＦ－ａ培养体系，我们诱导出了人外周血单核细胞来源的ＤＣ。同时选用在鼻咽癌患者中表达的ＥＢ病毒潜伏蛋白之一ＬＭＰ２Ａ作为靶基因，利用重组痘苗病毒
参考文献：
[1]. Epstein-Barr病毒潜伏膜蛋白2A重组痘苗病毒转染DCs及特异性CTL的体外诱导[D]. 谢芳艺. 南京医科大学. 2001
[2]. Epstein-Barr病毒潜伏膜蛋白2A重组痘苗病毒转染DC及特异性CTL的体外诱导[J]. 姚堃, 谢芳艺, 许继军, 彭光勇. 细胞与分子免疫学杂志. 2001