林建龙 钟国栋 王婷 林晶 魏霖 程焰红
（福建中医药大学附属第二人民医院病理科 福建 福州 350003）
【摘要】 目的：探讨液基细胞学联合沉渣包埋切片及免疫组化检测在胸水诊断中的应用价值。方法：对368例胸水进行液基细胞学检测，其中65例恶性及可疑恶性胸水进行沉渣包埋切片，并联合应用免疫组化染色，进一步明确诊断及追溯其组织来源。结果： 65例胸水液基细胞学检测阳性49例（75.38%），可疑阳性16例，经沉渣包埋切片及免疫组化检测出阳性61例，阳性率93.85%，差异有统计学意义(P＜0.05)；经免疫组化标记结果证实，肺腺癌41例、肺鳞癌2例、肺神经内分泌癌1例、恶性间皮瘤2例、胃肠道癌9例、乳腺癌2例、胆管癌1例、卵巢癌3例、反应性间皮增生4例。结论：液基细胞学联合沉渣包埋切片及免疫组化检测，可提高胸水细胞学诊断准确性和阳性检出率, 并对判断肿瘤细胞组织来源具有临床应用价值。
【关键词】 液基细胞学；沉渣包埋切片；免疫组织化学；胸水
【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）26-0107-03
Application Value of Sediment Embedding Biopsy And Immunohistochemical Detection In Hydrothorax
Lin Jianlong, Zhong Guodong, Wang Ting, Lin Jing,Wei Lin,Chen Yanhong
Department of pathology ,The second people's hospital affiliated to fujian university of traditional Chinese medicine. Fuzhou China 350003
【Abstract】Objective To explore the application value of Liquid based cytology combine with sediment embedding biopsy and immunohistochemical detection in the diagnosis of hydrothorax.Methods To detecte liquid based cytology of 368 cases of hydrothorax and we found that 65 cases were malignant or suspicious malignant，and we further diagnosis and trace their organization sources by the means of sediment embedding biopsy combined with immunohistochemical staining.Results By the method of liquid based cytology ,we found that 49 cases (75.38%) were positive and 16 cases were suspicious positive . On the other hand ,by the method of sediment embedding biopsy conbined with immunohistochemical detection , 61 cases were positive,with the positive rate of 93.85%,and the difference was statistically significant (p < 0.05). Immunohistochemical markers results Confirmed that 41 cases of patients were lung adenocarcinoma, 2 cases were lung squamous carcinoma,1case was pulmonary neuroendocrine carcinoma, 2 cases were malignant mesothelioma, 9 cases were gastrointestinal carcinoma, 2 cases were breast cancer ,1 case was bile duct carcinoma , 3 cases were ovarian cancer and 4 cases were reactive mesothelium hyperplasia.Conclusion By using Liquid based cytology combined with sediment embedding biopsy and immunohistochemical detection can improve the accuracy of hydrothorax cytology diagnosis and positive detection rate,and be of great clinical application value in estimate the source of tumor cell tissue.
【Key word】 Liquid-based Cytology;Sediment embedding biopsy; Immunohistochemistry;Hydrothorax
胸水是常见的临床症状，病因很多如炎症、肿瘤、外伤等，产生机制十分复杂，准确快速地判断其良、恶性对疾病的诊断、治疗有重要意义。胸水脱落细胞学检查具有快速、准确、简便、易行以及患者痛苦少等优点，目前仍是诊断良恶性胸腹水的主要方法[1],但常规离心涂片法存在阳性率低、难以判断瘤细胞组织来源等问题。本研究对65例胸水标本采用液基细胞学检测联合沉渣包埋切片及免疫组织化学（以下简称免疫组化）染色，对比观察其细胞学形态学特征及免疫组化标记结果，探讨其对胸水良恶性诊断及判断瘤细胞组织来源中的应用价值。
1.材料与方法
1.1 材料 收集福建中医药大学附属第二人民医院2012年6月-2015年6月的胸水标本368例，进行液基细胞学检测，对液基细胞学判断为恶性或可疑恶性的65例胸水进行沉渣包埋切片及免疫组化染色，其最终结果均经临床影像学资料及病理组织学明确诊断。65例胸水中女性40例，男性25例，年龄32-85岁，中位年龄65岁；临床提示有明确器官占位的31例，胸水原因待查的34例；双侧胸水50例，一侧胸水15例；外观淡黄色胸水46例，血性胸水19例。
1.2 方法
1.2.1 液基细胞学制片 取50ml胸水放入4℃冰箱自然沉降30分钟，除去上清液，将底部20ml离心10分钟2000r/min，取沉淀物入液基保存瓶中，室温放置20分钟。经梯度离心后取沉淀物放入全自动液基薄层细胞制片机，由仪器自动完成转移、沉降、贴附、巴氏染色等步骤，制成直径1.3cm的细胞薄片，二甲苯透明、湿封，光镜观察。全自动液基薄层细胞制片机（TIB-1800）、液基细胞保存液及相关试剂均购自由泰普生物科学（中国）有限公司。
1.2.2 沉渣包埋切片 液基细胞制片后剩余胸水标本静置30min，弃上清液，取余下40ml标本离心10分钟3000r/min，弃上清液，滴加95%乙醇10ml，离心10分钟2000r/min；取沉渣物用滤纸包好，放入10%中性福尔马林固定，进行常规脱水、透明、浸蜡、包埋制片程序，制成4μm厚度切片备用。HE染色及免疫组化染色，光镜观察。
1.2.3 免疫组化染色 免疫组化染色采用EnVision法，选用CK7、CK20、villin、CEA、TTF-1、Napsin A、MC、CR、Ca125、ER、PR、CK5/6、P63、Cg-A、P120、Vimentin等抗体及相关试剂均购自福州迈新生物技术有限公司。切片常规脱蜡、水化，抗原修复，滴加一抗室温下孵育60分钟，冲洗，滴加二抗孵育15分钟，冲洗，DAB显色，苏木素复染，盐酸乙醇分化，切片脱水、封片。
1.3 统计学分析 统计软件采用SPSS 16.0软件进行数据处理和统计分析。各组间阳性率差异采用χ2检验。
2.结果
2.1 液基细胞学与沉渣包埋切片免疫组化检测结果
65例胸水经液基细胞学检测，检出癌细胞49例（75.38%），可疑癌细胞16例，其中腺癌46例，鳞癌2例，恶性间皮瘤1例。液基细胞学形态表现为：腺癌细胞多成葡萄串样、桑椹样、乳头状，有较强的立体感，细胞核圆形或椭圆形，核仁明显，胞浆可见粘液空泡（图1）；鳞癌细胞异型性较大，成蝌蚪形、梭形、不规则形，多单个散在分布，核染色深如墨炭样，核仁不明显，巴氏染色可见红色胞浆；间皮瘤细胞可成团或散在分布，核圆形或椭圆形，核浆比增加，胞膜见光环或花边现象，细胞间可见“开窗”及核裹核或核包核现象（图2）。通过沉渣包埋切片及免疫组化检测后，液基细胞学46例腺癌中，检出腺癌44例，2例为恶性间皮瘤；液基细胞学16例可疑癌细胞中，12例检出癌细胞。经沉渣包埋切片及免疫组化检出阳性病例总数为61例，阳性率93.85％，差异有统计学意义(P＜0.05)（见表1）。
表1 68例胸水液基细胞学检测与沉渣包埋切片免疫组化检测的结果对照
图1 成团腺癌细胞，核圆形核仁明显，胞浆内见粘液空泡，巴氏染色，液基细胞制片，放大倍数200
图2 散在恶性间皮瘤细胞，见“开窗”与核裹核现象，HE染色，液基细胞制片，放大倍数200
2.2 沉渣包埋切片及免疫组化检测结果
65例胸水经沉渣包埋切片HE染色，细胞数量多并分布于同一平面，染色清晰、结构完整易于观察，腺癌细胞保留了组织学菊花形、腺管状、筛孔状及乳头状结构特点（图3、4），腺癌细胞的胞浆内粘液空泡及病理性核分裂像清晰可见（图5、6）。
图7 肺腺癌 TTF-1（+），EnVision法，放大倍数：100
图8 肺腺癌 CK7（+），EnVision法，放大倍数：100
3.讨论
恶性胸水在临床上较为常见，肺癌、胃肠道癌、乳腺癌、卵巢癌等恶性肿瘤在临床上常有胸水症状，胸水脱落细胞学检查是临床判断胸水性质的主要方法。胸水直接离心涂片法、液基细胞学检测法及沉渣包埋切片法均广泛应用于胸水检测。直接涂片法存在涂片厚，细胞重叠，结构不清，细胞量少而阳性检出率低等缺点[2]。近年来液基细胞学检测在胸腹水广泛应用，在标本的采集、制片上有很大进步，使胸腹水恶性肿瘤的确诊率明显提高[3]。液基细胞学制片克服传统涂片红细胞、炎症细胞多而影响制片质量问题，具有背景干净、分布均匀、核染色质清晰可辨等优点。本组65例胸水液基细胞学检测出癌细胞49例（75.38%），可疑癌细胞16例，其中腺癌46例，鳞癌2例，恶性间皮瘤1例，液基细胞学检测可以作为胸水良恶性诊断的有效方法。
胸水细胞学病理诊断要解决的常见问题，一是鉴别反应性增生间皮细胞与恶性肿瘤细胞，二是判断恶性肿瘤细胞为原发性还是转移性及其组织学类型。临床往往不满足于恶性胸水的诊断，肿瘤细胞是原发或继发及其组织学类型，更能指导临床进一步的诊疗工作。胸水沉渣包埋石蜡切片技术操作简便，既提高胸水检测的阳性率，也进一步提高细胞学的准确率[4]，本组65例胸水经沉渣包埋切片及免疫组化检出恶性肿瘤细胞为61例，阳性率为93.85％明显高于液基细胞学检测。与液基细胞学检测相比，胸水沉渣包埋块易于保存，可连续切片，便于免疫组化染色，对判断肿瘤细胞的类型和鉴别诊断有重要意义[5]。胸水沉渣包埋切片细胞形态接近组织学形态，保持着肿瘤的组织学排列结构，如典型的腺管样、菊花样、筛孔状及乳头状结构，部分表现为印戒细胞癌和粘液腺癌。结全临床影像学资料及细胞形态特征，联合应用免疫组化染色，可以明确肿瘤细胞组织学类型和组织来源[6]。本组65例胸水中肺来源腺癌41例，占63.08%，沉渣包埋切片联合检测CK7、CK20、TTF-1、Napsin-A、CEA等免疫组化标记，对肺腺癌的鉴别诊断有重要意义。TTF-1在原发性肺腺癌中的表达具有较高的敏感性和特异性，提示TTF-1可作为一种有价值的标记用于原发与转移性肺腺癌的鉴别，对于肺原发性低分化腺癌和鳞癌的鉴别也有一定价值[7]；原发性肺腺癌中Napsin-A呈较强阳性，敏感性达86.7%、特异性达100%，其在转移性腺癌、鳞癌及肺良性胸水中均未见阳性，表明Napsin-A对原发性肺腺癌诊断有较高的敏感性和特异性[8]；CEA在腺癌尤其是消化道腺癌和肺腺癌中有较高表达，间皮细胞阴性；Villin是一种分布于肠上皮的绒毛蛋白，可用于肠腺癌的鉴别诊断。CK7+、TTF-1+、Napsin-A+、CEA+提示肺腺癌，CK7-、CK20+、CEA+、Villin+提示胃肠道腺癌，本组胸水中胃肠道来源腺癌9例，仅次于肺腺癌。
胸膜间皮瘤与肺腺癌在细胞学形态上有相似之处，二者的鉴别诊断是胸水细胞学诊断的难点，沉渣包埋切片联合标记MC、CR、Vimentin、CEA、TTF-1可以明确诊断。MC对间皮瘤及反应性间皮细胞均有较好的敏感性和特异性，CR、Vimentin与对间皮瘤的阳性率为100%，CR、MC、CEA、TTF-1联合使用能完全鉴别胸水中间皮瘤细胞与肺腺癌细胞[9、10]，CR+、MC+、Vimentin+、TTF-1-、CEA-提示间皮来源。本组液基细胞学检测46例腺癌中经沉渣包埋切片免疫组化标记发现2例为恶性间皮瘤，及时纠正液基细胞学诊断不足。本组标记ER+、PR+、P120+、CK7+提示乳腺癌来源2例，Ca125+、CK7+、CK20-提示卵巢癌来源3例。特别要注意的是，单个抗体的组织特异性并非绝对，多种抗体联合应用进行免疫组化标记并设立对照有助于克服某些抗体表达意义不明确造成的困惑[11]。
液基细胞学检测可作为胸水良恶性诊断的有效方法，对恶性或可疑恶性者联合沉渣包埋切片及免疫组化检测，可提高胸水细胞学诊断准确性及阳性检出率,并对判断肿瘤细胞组织来源具有重要临床应用价值。
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论文作者:林建龙,钟国栋,王婷,林晶,魏霖,程焰红
论文发表刊物:《医药前沿》2015年第26期供稿
论文发表时间:2015/10/29
标签：细胞学论文; 沉渣论文; 腺癌论文; 切片论文; 细胞论文; 免疫论文; 间皮瘤论文; 《医药前沿》2015年第26期供稿论文;