摘要：目的：建立减肥类保健食品中总蒽醌的检测方法，并对测定过程中可能引入的不确定度进行分析评定。方法：式样经测量过程提取测定;建立不确定度评定的数学模型，确定不确定度来源，计算合成不确定度和扩展不确定度。结果：加标回收率范围为95%—105%，线性系数达0.999，在对10份样品进行加标回收，其总蒽醌的含量和扩展不确定度为（2038
187.4）mg/100g,包含因子k=2,,相对扩展不确定度为4.6%。结论：该实验方法步骤简单，仪器稳定，灵敏度高，重复性好，满足国家痕量检测的要求;本方法适用于减肥类保健食品中总蒽醌方法的不确定度评定。
关键词：减肥类保健食品中总蒽醌；紫外分光法；不确定度
Evaluation of Uncertainty of Detection Method and Method for Total Aquinone in Health Foods with Weight Loss
DANG Yi Miao
Ningxia Food Testing Research Institute,Ningxia Yinchuan 750001,China
ABSTRACT：Objective: A method for detecting total anthraquinone in diet foods was established, and the uncertainty that might be introduced in the process was analyzed and evaluated.Method:The pattern is determined by the measurement process; The mathematical model of uncertainty evaluation is established, the source of uncertainty is determined, and the uncertainty of synthesis and expansion is calculated.Result:The standard recovery rate ranges from 95 % to 105 %, with a linear coefficient of 0.999. In the addition of 10 samples, the total anthraquinone content and expansion uncertainty is(2038,187.4) mg/100g, including the factor K = 2,, The relative expansion uncertainty is 4.6 %.Conclusion:The experimental method has simple steps, stable instrument, high sensitivity and good repeatability, and meets the requirements of trace detection in the country. This method is suitable for the uncertainty assessment of total anthraquinone in diet foods.
Key words：Total anthraquinone in diet health food; Ultraviolet spectrophotometry; Degree of uncertainty
引言
总蒽醌来源于掌叶大黄(大黄是我国的四大中药之一)的根茎，其颜色形状为棕黑色浸膏或棕色粉状结晶，是游离蒽醌、结合蒽醌、蒽酮、糖、鞣质等混合物，生物合性与大黄原药相同。能让人腹泻，还能促进胰液分泌，也能抑制胰酶活性，具有利胆泻下以及减肥等多种保健作用。被常用于减肥类保健食品中，正是这类物质起着至关重要的保健作用，是必检的主要成分，其含量测定方法有重量法、荧光法、极谱法、高效液相色谱法，超临界流体萃取法等，由于总蒽醌的测定还没有国家标准方法，参照药品检测方法，使用较简单的比色法来测定保健食品中总蒽醌的含量。同时对此方法进行不确定的评定。
1测试原理及测试过程
1.1测试原理
样品经提取分离后，利用羟基蒽醌衍生物与碱液生成红色进行比色。
1.2 测试过程
样品测定 精密称取样品内容物25mg，至于100mL圆底烧瓶中，加入混合酸溶液6mL混匀，在沸水浴中回流15分钟，放冷，加乙醚30mL提取，提取液通过脱脂棉滤入250mL分液漏斗中，继续用乙醚洗涤残渣两次，每次5mL，样品渣连同脱脂棉倒回圆底烧瓶加混合酸4mL，在沸水浴中回流15分钟，放冷，加入乙醚20mL提取，用乙醚洗涤残渣两次，每次5mL，合并乙醚液。用水 30，20mL振摇洗涤两次，弃去水洗液。乙醚液用混合碱液50，20，20mL提取三次，合并碱提取液，置100mL容量瓶中，加混合碱液定容至刻度，混匀，取50mL置100mL锥形瓶中，称重（准确至0.01g），置沸水浴中回流30分钟，取出，迅速冷却至室温，称重，补加10%氨水溶液到原来的重量，混匀，此溶液为样品待测夜。标准曲线，吸取500 μg/mL标准溶液 0.10、0.20、0.30、0.40、0.60、1.00、1.50mL于50mL比色管中（相当于1.0、2.0、3.0、4.0、6.0、10.0、15.0μg/mL浓度的标准管），加混合碱至刻度，混匀，于暗处放置30分钟。以混合碱溶液为空白，在525nm波长处，分别测定标准曲线与样品的吸光度。
图1-1 总蒽醌含量的测试流程图
2建立数学模型
总蒽醌含量按下述公式计算：
式中：X—样品中总蒽醌（以1,8-二羟基蒽醌计）含量，单位为毫克每一百克（mg/100g）;
C—测定样品总蒽醌的浓度，单位为微克每毫升(μg/mL );
V—提取后样液定容体积，单位为毫升（mL）
m—样品质量，单位为（g）
上述公式是按原理给出的。在评定不确定度时，不能体现各种随机因素对测量结果的影响。在实际评定中，很难分别定量地研究每个影响因素引入的不确定度分量。为此，在测量模型中引入一个数值等于1的重复性系数。该系数的相对标准不确定度就等于在重复性条件下重复测量某个量X所得到一组观测值的相对标准不确定度。这样就合并评定了各种随机影响引入的不确定度分量。于是，评定不确定度的数学模型应写为如下形式：
3 不确定度分量的主要来源及其分析
3.1影响总蒽醌含量的随机因素较多，主要来源于分光光度计与天平的变动性、样品均匀性、操作的差异、环境条件的变动等因素。
3.2称量、标准储备液的不确定度及稀释过程、定容体积校准、测定含量重复性(随机)变化及校准曲线引入的不确定度分量。
图1-2六价铬含量测定的不确定度来源因果图
4各分量标准不确定度的评定
4.1标准物质不确定度
4.1.1标准储备液的不确定度
4.1.1.1标准物质纯度引入的不确定度
1，8-二羟基蒽醌对照品，其不确定度为 0.005，k=2，假设为均匀分布，则重铬酸钾的标准不确定度
4.1.1.2 称量过程中电子天平引入的不确定度
用I级电子天平秤取25.0mg对照品，根据天平检定合格证书0～50g最大允差±0.5mg，属于均匀分布，所以
4.1.1.3标准储备液配置过程中量器校准引入的标准不确定度：
容量瓶体积的不确定度 属于B类不确定度评定，所使用经过校正的50mL A级容量瓶，其允差为 0.05，属于三角分布 。本实验过程中，试验温度与鉴定证书的温度一致，因此唯独引起的容量瓶体积不确定度可忽略。
、 、 互相独立不相关，故配制标准工作液引入的相对不确定度为
4.1.2稀释过程引入的不确定度
稀释过程： 1，8-二羟基蒽醌标准溶液浓度为500 µg/mL；再用1mL分度吸量管吸取1，8-二羟基蒽醌标准溶液0.10mL，0.20mL，0.30mL，0.40mL，0.60mL；用2mL分度吸量管吸取1，8-二羟基蒽醌标准溶液1.00mL，1.50mL定容至50ml比色管中，则标准曲线浓度分别为1.0 µg/mL、2.0µg/mL、3.0 µg/mL、4.0 µg/mL、6.0 µg/mL、10.0µg/mL、15.0 µg/mL。
配制标准溶液系列的过程中使用了一系列玻璃量具，按照《常用玻璃量具检定规程JJG196-2006》的要求，均有相应的最大允差，按照三角分布考虑， ，由此估算相对不确定度分量，见表1-1。
表1-1 标准系列配制过程中量具校准引起的不确定度
由上述数据合成的相对标准不确定度uCrel：
=0.0419
4.2 最小二乘法拟合标准曲线校准得出的样品的质量浓度X 时所产生的不确定度。
采用8个浓度水平的六价铬标准溶液，用分光光度计测定得到相应的吸光度y，用最小二乘法进行拟合，得到直线方程y = aX +b(a为斜率，b为截距)和其相关系数r，详见表1-2。
表1-2 最小二乘法拟合峰高H结果
本例中对样品测定液进行了10次平行测定，由直线方程求测定液的平均浓度为
X0=5.10μg/mL,则X0的标准不确定度u(X )= =0.046
式中s(y)= =0.0061,标准溶液的残差的标准差；
= =5.10,标准溶液的平均浓度；
S = =150.9,标准溶液质量浓度残差的平方和；
n-----标准溶液的测量次数，本例为21；
p-----X 的测量次数，本例为10次。
= =0.00902
4.3样品制备过程引入的不确定度
4.3.1取样
本实验依照作业指导书《总蒽醌的测定方法》规定，将样品充分混匀后随机取样，可认为样品是均匀的、代表性充分，由此所致的不确定度忽略不计。
4.3.2称重
实验中的称样量为25.0mg，要求使用的天平的最小分度为1mg。JJG 1036-2008《电子天平检定规程》规定，该准确级的天平在0.01g～50g称量范围的MPE为±0.5e(e=1)，样品质量是由两次称量(空瓶mtare和样品msamp)所得，天平线性MPE为矩形分布，两次称量天平的MPE导致的不确定度
= =0.408
= = =0.0163
4.4重复性实验相对标准不确定度
在重复性条件下，对总蒽醌的含量进行了10次独立性测试，所得测量数据示于下表：
表1-3 对总蒽醌的含量10次独立测试数据
在重复性条件下，重复10次测定六价铬含量，算数平均值为：
= =2038
单次测量的标准偏差为： (Y )=S(Y )= =19.62
算术平均值的不确定度 = = =6.21
u ( )= =
5不确定度分量列表
在不确定度评定时，已凭经验经将一些不确定度分量去除。现将各不确定度分量列于表1-4。
表1-4总蒽醌的含量不确定度分量表
6 合成标准不确定度
(Y)=
=
=93.7 mg/100g
7 扩展不确定度
取包含因子k=2，
扩展不确定度： =k (Y)=2 93.7=187.4 mg/100g
相对扩展不确定度： = (Y)/2038×100%= 4.6 %
8 结果报告
用紫外分光光度计测定总蒽醌的含量，测定两份样品取其平均值( )报告结果，其结果和扩展不确定度为2038±187.4 mg/100g，包含因子k=2，相对扩展不确定度为4.6%。
参考文献
[1]王淑美，冯素香，脑脉通有效部分中总生物碱的含量测定[J]，广东药学院学报，2008，24（1）：1-3.
[2]国家药典委员会，中华人民共和国药典：一部[S].北京：化学工业出版社，2005：17.
[3]JJF1059.1-2012 测量不确定度评定与表示[S].
[4]JJG1036-2008电子天平检定规程[S].
[5]JJG 196-2006,中华人民共和国国家计量检定规程（常用玻璃量具检定规程）[S].
论文作者:党祎苗
论文发表刊物:《基层建设》2018年第34期
论文发表时间:2019/3/27
标签：不确定论文; 标准论文; 样品论文; 蒽醌论文; 溶液论文; 含量论文; 浓度论文; 《基层建设》2018年第34期论文;