【摘 要】目的：通过正交试验优选紫菀百花散提取工艺。方法：采用正交试验，以总黄酮含量和干膏得率为指标，对紫菀百花散提取工艺进行优选。结果：优选的工艺条件为。结论：正交试验法优选得到的工艺可靠，简单易行。
【关键词】紫菀百花散；总黄酮；提取工艺；正交试验【中图分类号】R473【文献标识码】A【文章编号】2096-0867（2015）-08-124-02
紫菀百花散出自《济生方》，由紫菀、款冬花、百部三味中药组成。功能主治：润肺、止咳、平喘，主治咳痰不爽者。
本方组方为经典方剂，疗效确切,治疗效果好，但其提取工艺研究鲜有报道。经研究表明，总黄酮成分为其止咳祛痰的药效成分，故本实验重点考察了提取溶剂量、提取温度、提取时间和提取次数为因素对总黄酮类成分提取的影响，拟优选出最佳提取工艺条件。
1 仪器及试药1.1 仪器UV-160A 紫外-可见分光光度仪（日本岛津公司）；KQ-300DB 型数控超声仪（昆山市超声仪器有限公司）；BP211D 型电子天平（德国Sartorius 公司）。
1.2 试药芦丁（供含量测定用，批号100080-200306）：中国药品生物制品检定所提供。紫菀、百部、款冬花自松原市中西医结合医院中药房。经鉴定为菊科植物紫菀Aster tataricus L.f.、菊科款冬属植物款冬Tussilago farfara L.、百部科植物百部Stemona japonica。诸药材干燥，粉碎，备用。
2 方法与结果2. 1 正交试验设计根据预试验结果，选择提取溶剂量、提取乙醇浓度、提取时间和提取次数作为考察因素，每个因素各取3 个水平，各因素、水平见表1。以总黄酮的含量为评价指标，选用L9(34)正交表安排试验( 表1)。
2. 2 供试品溶液制备准确称取紫菀百花散180g（紫菀60g，百部60g，款冬花60g，）置于圆底烧瓶中，加入一定量的提取溶剂回流提取，合并每次提取液，滤过，减压蒸去乙醇，残渣加75％乙醇溶解定容至10ml 量瓶中作为供试品溶液。
2. 3 标准曲线制备精密称取芦丁对照品5.2mg 置于50mL 容量瓶中，加30%乙醇适量，置80℃水浴中加热，使溶解，放冷，加30%乙醇稀释至刻度，摇匀，配制成0.104mg/mL 的对照品溶液，备用。
精密量取对照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml，分别置10ml 量瓶中，加5％亚硝酸钠溶液0.3ml，摇匀，放置6min，再加10％硝酸铝溶液0.3ml，摇匀，放置6min，再加1mol/L氢氧化钠溶液4ml，用30％乙醇稀释至刻度，放置10min，在510nm 处测定吸光度。以芦丁的含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，得线性回归方程为y=1.1484x-0.0004，r=0.9999（n=5）。表明芦丁在0.104~0.520mg 之间吸收度（A）与 浓度（mg/ml）具有良好的线性关系。
2. 4 精密度实验精确吸取对照品溶液0.8ml，按照‘2.3’项下操作，连续5 次测定相同溶液的吸光度，测得RSD 为0.93%，表明该方法精密度良好。
2. 5 重复性实验精密吸取按供试品溶液制备项下平行制备5 份样品溶液，并测定其所含总黄酮（以芦丁计）含量，测得RSD 为1.19%，结果表明本方法的重复性较好。
2.6 稳定性实验精密量取样品0.1ml，按照2. 3 项下操作，测定0.5h、1h、2h、3h、4h 的吸光度值，计算得其RSD 值为1.11%，样品在4h 内稳定。
2. 7 加样回收率实验精密吸取已知黄酮含量的供试品溶液5 份，分别加入芦丁对照品适量，依法分别进行测定，计算总黄酮含量和加样回收率，经计算RSD=1.60%，5 次测定的平均加样回收率为99.45%，表明该方法测定结果准确。
2. 8 正交试验结果直观分析结果，影响因素的大小顺序为： B>C>D>A。由方差分析表可以看出,本实验设计中，因素B 对总三萜类成分提取工艺影响有显著差异，因素A、C、D 对总三萜类成分提取影响不显著，为达到最佳提取率并降低实验成本，确定最佳搭配为A2B2C3D2，即提取工艺的最佳方案为：12 倍量70%乙醇回流提取2 次，每次3 小时。
3 工艺验证性试验按上述筛选的总黄酮类成分最佳提取工艺进行验证实验：取紫菀百花散处方粗粉，以12 倍量的70%乙醇回流提取2 次，每次3 小时。减压回收乙醇，干燥。此条件下总黄酮（以芦丁计）含量为26.023 mg?g-1。验证结果与正交实验预测结果较接近,验证的本实验筛选的提取工艺稳定、可行。
4 讨论
提取工艺研究中水煎煮和回流提取法为黄酮类物质提取方法，考虑到水提取方法得到的产品杂质较多，后续纯化复杂，因此根据药品实际生产工艺，本研究选择不同浓度的乙醇（60%乙醇、70% 乙醇、80% 乙醇）提取，通过正交工艺考察制备紫菀百花散中总黄酮提取物。
本研究以黄酮为指标，通过正交试验优选最佳提取工艺为用12 倍量70%乙醇回流提取2 次，每次3 小时。此研究为更加有效的控制该药质量提供科学依据。
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论文作者:王瑛 丰东蒙 谭忠德
论文发表刊物:《系统医学》2015年第1卷第8期供稿
论文发表时间:2016/1/19
标签：紫菀论文; 乙醇论文; 工艺论文; 正交论文; 溶液论文; 百花论文; 黄酮论文; 《系统医学》2015年第1卷第8期供稿论文;