于淼[1]2004年在《当归寄生注射剂指纹图谱的研究》文中研究说明本文采用Zorbax SB-C_(18)(4.6mm×250mm，5μm)色谱柱，以0.5％冰醋酸溶液为流动相A，以甲醇-四氢呋喃(90∶10)为流动相B，进行梯度洗脱，检测波长为270nm，流速为1.0mL／min，柱温为40℃，以阿魏酸为参照物，对实验室制备的10批当归寄生注射液和10批注射液的中间体以及10批生产企业提供的注射液分别进行了指纹图谱的分析。建立了当归寄生注射液和中间体的HPLC指纹图谱的共有模式。采用“指纹图谱相似度计算软件”分析，不同批次的注射液和中间体与各自的共有模式相似度均大于0.90。本法能有效控制当归寄生注射液和中间体的质量，为完善其评价标准提供依据。 本文收集了22个不同产地、不同批次的当归和10个不同产地、不同批次的槲寄生样品，经形态学鉴定均为正品。在当归寄生注射液HPLC指纹图谱基础上建立了与之相应的当归药材和槲寄生药材的HPLC指纹图谱。①实现了对当归中29个化学成分色谱峰的分离，获取了反映该药材整体的化学数据。将所获化学数据进行化学模式识别研究。用系统聚类分析将当归样品分为2类：第一类和第二类。以夹角余弦或相关系数为测度，进行相似度计算。结果表明，以相似度0.80为限度，即：相似度在0.80～1.00为第一类，相似度在0.80以下的为第二类，与聚类分析结果一致，两种不同测度的相似度趋势一致。在分析未知样品时，只需计算未知样品与标准样本间的相似度，即可对未知样品进行鉴定、分类和评价。②实现了对槲寄生中25个化学成分色
于淼, 于治国, 高阳, 赵云丽[2]2004年在《当归寄生注射液指纹图谱研究》文中研究说明目的 :研究当归寄生注射液 (当归、槲寄生 )的色谱指纹图谱测定方法。方法 :以阿魏酸为对照品 ,应用HPLC法 ,色谱柱 :ZorbaxSB C18(4 .6mm× 2 5 0mm ,5 Micro) ,流动相 :A =甲醇∶四氢呋喃·(85∶15 ) ,B =0 .5 %冰醋酸溶液 (梯度洗脱 ) ,柱温 :4 0℃ ,测定波长 :2 70nm ,分析时间 :6 0min ,流速 :1mL·min-1。结果 :标示出当归寄生注射液 18个共有峰。结论 :该方法准确、重复性好 ,为当归寄生注射液的指纹图谱质量控制提供了依据
黄萍[3]2005年在《指纹图谱在提高注射液用鲜鱼腥草、鱼腥草注射液质量标准方面的研究》文中认为鱼腥草注射液为鲜鱼腥草经加工制成的灭菌水溶液,具有清热,解毒,利湿的功能,用于肺脓疡,痰热咳嗽,白带,尿路感染,痈疖等。本文在《中国药典》2005版一部和中华人民共和国卫生部标准WS_3-B-3264-98修订标准的基础上,主要用气相色谱测定的指纹图谱分析方法对注射液用鲜鱼腥草和鱼腥草注射液的质量标准加以提高,并对该方法进行了考察。方法学考察结果表明,本研究建立的分析方法有较好的重现性和专属性。提高后的质量标准既更好地控制了鱼腥草注射液的质量,为注射液用原料鲜鱼腥草的选择提供了依据,又明确了二者的相关性,为下一步“中药物质基础与应用开发的系统研究”作前期基础工作。 此外,应用该分析方法还对市场销售临床使用中的鱼腥草注射液测定了指纹图谱,进行了共有成分的摸底调查;比较了鲜鱼腥草药材与鱼腥草注射液指纹图谱的相关性,说明了鱼腥草注射液选用鲜鱼腥草作原料的依据。
王丽峰[4]2009年在《高效液相色谱在中草药质量控制中的应用》文中认为高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)是在经典液相色谱法和气相色谱法的基础上发展起来的新型分离分析技术。鉴于其简便、快速、灵敏、准确的特点,至今,已在生物工程、制药工业、食品工业、环境监测、石油化工等领域获得广泛的应用。本文建立了用反相高效液相色谱法研究中药连翘、柿叶和峨嵋野连中有效成分的含量测定新方法,并建立了高良姜和石韦药材的高效液相指纹图谱。论文由综述和研究报告两部分组成,综述部分简单概述了高效液相色谱的特点、色谱技术方面的进展、在中草药有效成分分析中的应用以及中药指纹图谱质控技术。研究报告部分建立了中药连翘、柿叶和峨嵋野生黄连中几种有效成分的含量测定及高良姜和石韦药材的高效液相色谱指纹图谱的建立,包括:反相高效液相色谱法同时测定连翘和柿叶中的3种黄酮和2种叁萜酸、反相高效液相色谱法同时测定峨嵋野生黄连中不同部位的3种生物碱以及高良姜和石韦药材的高效液相指纹图谱研究。1.高效液相色谱法同时测定柿叶和连翘中黄酮和叁萜类化合物的含量建立了一种同时测定黄酮类和叁萜类化合物的反相高效液相色谱法。采用EclipseXDB-C_(18)(150 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-乙腈-0.05%磷酸(叁乙胺调pH 3.0)为流动相,采用梯度洗脱,柱温为30℃,0-10 min流速为1.0 mL/min,10-12 min流速线性变化至0.5 mL/min,12 min后流速恒定为0.5 mL/min,检测波长采用波长程序。芦丁、金丝桃苷、槲皮素、齐墩果酸和熊果酸的线性范围分别为1.632-489.6、1.045-522.5、1.349-134.9、5.290-529.0、5.075-507.5 mg/L,相关系数均大于0.999。检测限分别为0.096、0.196、0.043、0.639、0.733 mg/L。该方法灵敏快速,结果可靠,重现性好,可用于柿叶和连翘中黄酮和叁萜类化合物的分离测定。2.峨嵋野生黄连不同部位叁种生物碱的含量测定建立一反相高效液相色谱法同时测定峨嵋野生黄连不同部位盐酸药根碱、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的含量。采用ZORBAX Eclipse XDB-C_8柱(150×4.6 mm;5μm),以乙腈-0.025mol/L磷酸二氢钾水溶液(磷酸调pH 3.0)(25:75)为流动相,流速为1.0 mL/min,柱温为30℃,检测波长为342 nm,外标法定量。盐酸药根碱、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的线性范围分别为0.0256-160、0.0147-92.0、0.0371-116μg/mL。相关系数均为0.9999。检测限分别为0.010、0.009、0.005μg/mL。该方法灵敏快速,线性范围宽,重现性好,用于峨嵋野生黄连中叁种生物碱的含量测定结果可靠。3.高良姜药材高效液相指纹图谱研究建立了高良姜HPLC指纹图谱分析方法。采用Eclipse XDB-C_(18)(150 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-乙腈-水(冰乙酸调pH 3.0),梯度洗脱,流速:1.0 mL/min,柱温:30℃,检测波长254 nm。确定了12个不同产地高良姜药材乙醇提取部分13个共有峰,各产地药材指纹图谱与对照指纹图谱相似度均大于0.9,可以用来作定性研究。该方法准确,重复性好,为科学评价及有效控制其质量提供参考。4.石韦药材高效液相指纹图谱研究用正交设计优化石韦的超声提取条件,并建立了石韦高效液相指纹图谱分析方法。采用Eclipse XDB-C_(18)(150 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-水(冰乙酸调pH 3.0),梯度洗脱,流速:0.8 mL/min,柱温:35℃,检测波长采用波长程序。确定了8批不同产地石韦药材乙醇提取部分22个共有峰,各产地药材指纹图谱与对照指纹图谱相似度均大于0.9,可以用来作定性研究。该色谱指纹图谱分析法简便,能快速地鉴别和区分不同来源的石韦药材,为科学评价及有效控制其质量提供依据。
刘雅莉[5]2012年在《基于实证视角的中药注射剂不良反应评价研究》文中研究表明中药注射剂作为中药传统精华与西药先进制剂技术结合的产物，为中药的应用开辟了广阔的发展空间，但也出现了越来越多的不良反应（ADR）和各种潜在风险。因此，对中药注射剂不良反应进行评价研究具有重要的理论意义和现实意义。通过本文的研究可为中药注射剂ADR的防控及临床合理用药提供更为科学、直观的参考，也为ADR的评价提供新思路和新方法。本论文以中药注射剂的安全性评价为研究目标，以引发不良反应的影响因素为研究对象，将系统理论引入中药注射剂不良反应的评价研究。采用定性与定量分析相结合、理论分析与实证检验相结合，运用灰色关联分析法、主成分分析法和logistic回归分析法定量研究中药注射剂临床应用中诱发ADR的相关因素及发生规律，并对各评价方法的结果进行比较，为中药注射剂不良反应的防控及临床合理用药提出建议。通过上述研究，得到如下结论：（1）中药注射剂发生ADR的品种主要集中在清热类和活血类中药注射剂，全身性损害和皮肤及其附件损害是中药注射剂最常见的不良反应，发生不良反应的男女比例大致相当，男性患者和女性患者的平均年龄没有显着性差异。（2）将灰色关联分析法和主成分分析法用于中药注射剂不良反应的评价研究，确立应用模式并建立综合评价函数，两者研究结果相互印证，表明两种方法用于评价研究中药注射剂ADR可行有效。logistic回归分析结果说明临床用药时引起严重ADR的因素与引起一般ADR的因素基本一致，具有相关性。（3）实证研究结果：清开灵注射液中，患者是否初次用药及原患疾病的类型对ADR的发生影响最大，其中，男性、25～49岁患者、患呼吸道感染、初次用药、有过敏史、合并使用抗生素、给药剂量在20ml以上、使用GS配液及配液用量偏小更易引发ADR；原患疾病类型、患者有无过敏史及用药剂量这3个因素会带来更高的严重ADR风险。葛根素注射液中，配液类型及患者是否有过敏史对ADR的发生影响最大，其中，用GS配液、患者有过敏史、男性、非初次给药、有合并用药、配液量较小、患者年龄大于50岁、患有缺血性心脑血管疾病的患者更易出现ADR；患者有无过敏史、是否初次用药、有否合并用药这3个因素会带来更高的严重ADR风险。
余依婷[6]2011年在《台湾中药科技发展史研究》文中指出研究目的台湾自古以来就不是中药的主要生产地区、大多数中药资源须仰赖进口提供。自明清以降,带有中国传统医药理论的大陆进口中药材,再加上台湾本地民间草药的使用经验,二者共存并用,成为台湾中草药的在地文化特色。十九世纪末,清王朝因战败将台湾割让与日本之后,殖民地政府有计划地引入西式医学教育及建立公共卫生体系,民间则延续中国中医药与台湾民间草药的传统,但也开始学习流传到台湾的日本汉方医学临床经验。台湾光复、日本战败、国民政府迁台之后,众多的大陆菁英及传统中医药人士来台,受过西方科学思潮洗礼的科学家与西医师,及满腹经纶的名中医,同时主导着台湾中医药体系的发展。1960年代初期,台湾在中药本地资源有限的前提下,以“中药科学化”为基础,导入了以西药制剂为基础而开发的中药科技,开发了具有高度创意的“中药浓缩制剂”,自此奠定了台湾中医药产业朝向中药科技高度发展的现代化主轴,台湾与中国大陆的中医药体系开始往不同的方向演进。对台湾自1949年起迄今的中药科学化发展历史进行系统性探讨,可以填补我国中医药发展历史的研究空白,建立台岛地区中医药科学体系发展架构之研究骨干,对海峡两岸及国际有关传统医药发展战略提供借鉴经验与学术支撑。因此,研究台湾的中药科学技术发展进程,具有历史性及科技前瞻性的现实意义。研究方法本论文采用历史研究方法,即对台湾社会中医药历史发展过程的相关资料进行发掘、收集、调研、整理、描述、分析、归纳的综合系统方法,以时间顺序、以医学事件、以着名人物着作及学术成就等为切入点,对自明清以来台湾医药早期情况、日据时代及至1949年国民政府迁台迄今影响台湾中药科学发展进程的重大事件人物进行研究。具体包括：文献回溯分析：围绕台湾中药科学化发展历程,进行文献资料的查询收集,发掘整理,归纳分析,探讨台湾中药科学发展的学术内涵及社会背景,而资料的来源除图书报刊杂志外,更应该重视人物访谈及田野调查的记录。公文征集归类：主要针对政府公报、法令规章、会议论文、报刊杂志等关于中药科学化及中药科技的相关文献进行搜集整理。个案剖析探究：针对产业体系(顺天堂、胜昌制药等二家成功发展中药科学化制剂的标竿企业),行政体系(卫生署、药政处、中医药委员会、药物食品检验局、药物食品管理局)选取具有代表性的个案进行分析,以了解其对台湾中药科学化的重大影响。口述历史及专家访谈：针对台湾中医药产业相关人士进行访谈,包括专家、学者、研究人员、卫生行政人士、教育工作者、产业工作者等,以求全面汇整台湾中药科学化的有关情势,并深入了解发展中药科技发展之解决方案。本论文研究采用的参考文献包括数据库资料,来源主要有台湾近代医疗文物数据库系统、台湾政府公报信息网、全国法规数据库、中医药信息网。研究结果遵循上述研究方法,在占有大量史料基础上,形成本论文的正文叁个部份与附录六个专篇。论文正文“台湾中药科技发展史研究”,重点针对台湾中药科学技术发展的代表人物及事件进行记述。从日据时期到二十世纪底,台湾的中药科学化从局限于实验室的学术研究,成为医学界可具体接受的中医药处方新观念,并发展成为可于临床医疗使用的中药浓缩制剂。奠定台湾中药科学化发展基础的科研者以杜聪明、颜焜荧、许鸿源为主要代表人物。第一部份台湾历史背景之回顾及医药资料收集整理,以中医药人力变迁之统计,检视台岛地区医药历史的沿革。从传教士医疗进入台湾起,台湾民众接触到西医技术及西药治疗,开始期望医药现代化。日本殖民政权把当代国际卫生观念及医学研究思想带入台湾,建立西医学校,台湾人可在本地或到日本接受科学的研究训练,培养出一批批具有现代化思潮的西医药科研菁英。反观国民政府及日本政府对中医药均采取漠视或逐步淘汰的旁观态度,中医药行业只能朝向卖药或民间行医发展,中医药教育只靠父子或师徒相传,中医药科研无法建立学术及研究的体制化基础。第二部份奠定台湾中药科学化发展的先行者,找出开展台湾中药科学化的探索力量。①台湾中药科学化发展的先行者杜聪明。开台第一位医学博士杜聪明,于日据时期在台湾倡导汉医药研究思想,选定台湾本土药用资源作为研究对象,倡议于台大医院及高雄医学院附设医院设立汉医治疗门诊,坚持于西化制度的台大医学院及高雄医学院亲自主讲中西医学史略及中医药学评论,导入伤寒论、本草学、针灸学成为西医教育一环,在“中西医学一元化”的理念下,撒下了“中药科学化”台湾生根萌芽的种子。②台湾中药科学化的开创者颜焜荧。如果说张仲景《伤寒论》开创了中医临床治疗进入汤剂的新纪元,那么颜焜荧对中药浓缩制剂制定产制流程与质量标准的作为,可算是开创了中医临床治疗进入科学化制剂的里程碑。颜焜荧为日本京都大学药学博士,开发日本长仓制药第一款汉方新处方“人蔘当勺散”取得药证审批。首先开发出台湾第一个“中药科学化中药浓缩制剂产品原型,协助转移至顺天堂药厂。率先制定及统一中药浓缩制剂质量指标。创立“颜氏汉方理论”,以台北医学院为基地教育出最多中药科研人材。台湾中药科学化研究的泰斗颜焜荧是唯一在台湾二度荣获政府壹等奖励之中医药科学家。③许鸿源创立顺天堂药厂,并担任台湾省卫生试验所副所长及卫生署药政处第一任处长、卫生署药物食品审议委员会主任委员,在中国文化学院指导药用植物研究,始终强调中药研发检验技术的重要性,以“免煎易服、药效确实”宣传中药浓缩制剂,打响顺天堂制药厂“科学中药”,透过其创立的台湾必安研究所及美国汉方医药研究所检验数据证实科学中药质量,许鸿源实为台湾中药科学化的实践者。第叁部份中药科学化在台湾发展及其影响,说明中药科学化对台湾中药制造产业的影响,并解释台湾中药浓缩制剂的演进、质量评估及检验方法的开发、临床试验及新药开发等中药科技技术发展过程。①台湾区制药公会主任委员李沐勋先生发展中药浓缩制剂之主要贡献—导入日本汉方GMP观念于台湾,推动中药GMP产业训练。主持《订定中药标准方》研究计划,成为日后《台湾传统药典(中华中药典)》公告《中药基准方200方》之基础。②中药制造厂在研发制造中药浓缩制剂的时候,必须参考《中药基准方200方》,影响中药厂对配方、包装、制造、申请全民健康保险费用给付等策略,连带地也会影响产业界的科研开发意愿。③以“中药科学化”方式制造中药浓缩制剂的中药厂,由顺天药厂及胜昌制药在上世纪60年代为首创。截至2011年1月1日,台湾实施中药GMP的中药厂将近120家,浓缩制剂中药厂将近50家,仍然是以顺天堂集团及胜昌制药的中药科研实力最为突出,为台湾生技医药产业的中药制造标竿典范。笔者认为上述研究结果具有以下价值：①开创中医药临床体系的临床决策新流程,②新科技的传播在于说服大众的过程,③台湾的中药科学化将处于动态的演进。在完成学位论文过程中,笔者积累1949年迄今的资料,汇编成为论文的第二部份“台湾中药科技发展进程及史料汇编”作为附录。分成六个专篇讨论①现代化科学标准管理中药制造,②以中药为基础的新药开发,③与中药管理有关的政府机构,④中药管理的有关法规,⑤中药科研之重大计划及主要机构,⑥台湾中药制造产业的发展。具体说明卫生署、中医药委员会、食品药物管理局、中央健康保险局与全民健保、国立中国医药研究所等单位与推动台湾中药科学化之关连性。中药科学化产品个案说明包括第一张中药新药药品许可证“寿美降脂一号胶囊(卫署药制字第047152号,2005年9月30日核可)”,及第一张植物新药药品许可证“怀特血宝PG2黄耆多醣注射剂(卫署药制字第054853号,2010年6月24日核可)。研究结论台湾中药科技发展史是当代中医药学史的组成部分,它从一个侧面反映了台湾自1949年国民政府迁徙迄今医药学发展的历史进程,台湾医药学界为努力发展中药科学技术所采用的模式及所取得成就。本论文以此为题材进行研究,其创新点：一是从史料汇集的层面,系统性记录台湾中药科学化的历史进展,资料具有原创性及“存史”价值。二是对台湾中药科学化具有奠基贡献的杜聪明、颜焜荧、许鸿源等叁人之学思历程及科研经验进行研究。叁是总结台湾中药科学化理念与实质学术内涵,其与中药制品质量管理标准、与临床试验的演进新药开发、与台湾中药制药GMP、与中药基准方二百方颁布相关。台湾同样也肩负着对全球传播交流中医药文化的重责大任,以中药科学技术手段所创造的实体产品,正是利用现代科学语言帮助国际友人理解中医药传统文化内涵的一大助力。深入研究中医药这个属于全人类共同所有的丰富宝藏,考察台湾推动中药科学化及发展中药科技的历程,共同探索中医药,传承中医药,将是海峡两岸中华文化大融合的必然。
刘春卉[7]2007年在《金耳生药学和发酵产物活性的研究》文中提出金耳(Tremella aurantialba)为担子菌纲(Basidiomycetes)，银耳目(Tremellales)，银耳科(Tremellaceae)，银耳属(Tremella)的寄生真菌，主产于我国西南部，野生资源稀有。为充分利用金耳资源，拓展创新药物研究与开发，对金耳生药学和发酵产物的活性进行系统研究，采用生药分子鉴别和病理模型等现代生物技术，探寻金耳单倍体无性酵母和寄主菌丝体鉴定及其产物生物学活性的证据。通过本草考证，认为金耳能够滋阴润肺，止咳化痰，生津。用于肺结核、虚痨、咳嗽、痰多、气喘、盗汗、高血压、糖尿病等症的治疗。经原菌物鉴定、显微鉴定、超微结构和培养特征研究，得到金耳生药学的基本特征：完整担子果呈脑状，剖面外层为橙黄色胶质，裂片中间为白色的肉质区，即寄主菌丝区，寄主菌丝含量比其它近似种高。菌丝细胞间有明显的隔膜，隔膜上有孔帽状结构，该结构可用以区别金耳菌丝和寄主革菌菌丝；寄主菌丝多核，有明显的锁状联合；子实层外露，成熟下担子为十字形纵分隔，顶生，上担子顶部膨大；担孢子球形，有小尖；担孢子反复出芽繁殖产生大量外被荚膜的分生孢子；担子果中有明显的吸器菌丝。通过对多个担子果的观察，发现以上特征很稳定，可以作为菌物分类和生药鉴定的重要依据。研究了金耳基源担子果、酵母状分生孢子培养物和菌丝培养物的核糖体DNA内部转录间隔区(ITS)和大亚基D1／D2区序列，结果表明金耳担子果的ITS区和D1／D2区的PCR产物均为碱基数不同的两条带，片段长度和序列与酵母状分生孢子培养物、菌丝培养物一致。通过对ITS1和ITS2联合进行系统发育分析表明金耳酵母状分生孢子培养物属于银耳属的金耳T. aurantialba，参与组成担子果的寄主菌丝为毛韧革菌Stereum hirsutum。大亚基D1／D2区系统发育分析结果与ITS区一致。结合GenBank中登录的金黄银耳、脑状银耳、橙黄银耳等近似种构建系统发育树，结果支持形态学证据，金耳药材和近似种金黄银耳形成一个稳定的独立分支，近似种黄金银耳形成另一个分支。分子序列的差异为金耳的鉴别提供了可靠的分子标记，为金耳菌类药材基源入药建立了遗传基础。首次报道了金耳的rDNAITS完整序列，包括ITS1和ITS2总长度为467-468 bp；5.8S序列为158 bp以及大亚基D1／D2区序列(638 bp)。金耳寄主粗毛韧革菌的rDNA ITS完整序列，包括ITS1和ITS2总长度为591-593 bp；5.8S序列为158 bp以及大亚基D1／D2区序列(607 bp)。金耳与寄主粗毛韧革菌的5.8S区序列同源性为97％。对人工栽培金耳药材ITS及5.8S区和D1／D2区序列研究结果表明，栽培金耳存在种内变异性。测定了收集的金耳试管菌株ITS区和D1／D2区序列，BLAST比对，发现存在误将寄主菌丝株作为金耳菌丝的现象，认为金耳对于伴生菌的依赖性在于担孢子形成的单一型金耳菌丝对基质中的养分分解能力极弱，必须借助毛韧革菌丝来获得营养物质，因而导致人工培养金耳时不仅难以获得纯培养的金耳菌丝，而且由于金耳菌丝的生长劣势易被伴生菌丝取代，同时也表明金耳制种时采用分子标记法进行鉴别较为可靠。采用金耳无性酵母菌株B1，对其产生胞外多糖(Extracellular Polysaccharides，EPS)的液体培养基配方进行研究，以获得最优的液体培养基。培养基优化结果表明葡萄糖是菌体生长和EPS产生的最佳碳源，中心组合设计和响应面分析得到最佳碳源为49.2 g／L的葡萄糖，最佳氮源为10.4 g／L的酵母膏的优化配方，最大EPS产量为5.02 g／L。优化前胞外多糖产量为3.43 g／L，优化后的EPS产量是优化前的1.5倍，明显提高了菌株B1的生物学效率。金耳EPS对STZ诱导的胰岛素抵抗实验动物模型空腹血糖有显着降低作用，0.2 g／kg·BW／d剂量，连续灌胃EPS 21 d后空腹血糖降低30.1％，口服糖耐量2h血糖显着降低，果糖胺水平下降59.5％，胰岛素敏感指数显着升高，胰岛素抵抗指数显着降低，胰岛素水平未见显着下降，提示其可能通过调节胰岛素以外的其它途径改善胰岛素抵抗。给EPS组的胰岛素抵抗大鼠的TG水平和LDL-C水平显着降低，HDL-C水平显着升高，相关的LPL和HL的活性也显着升高，表明由胰岛素抵抗引起的脂代谢异常也得到改善。通过对金耳无性酵母液体培养耐受和富集叁价铬(Cr~(3+))能力的研究，依据菌种的生理特性建立了富铬金耳无性酵母菌体的基础发酵条件：碳源采用葡萄糖，氮源采用酵母膏，基质Cr~(3+)添加浓度50μg／mL，发酵周期以66-72h为佳，获得了Cr~(3+)含量为2.87 mg／g干重的富铬金耳菌体，Cr~(3+)含量是文献报道的富铬啤酒酵母(1.5mg／g干重)的1.91倍；是富铬子囊菌Cr~(3+)含量(0.8 mg／g干重)的3.59倍。大鼠急性毒性实验结果表明口服富铬金耳无性酵母菌体在最大给药量为11g／kg·BW／d未见急性毒性反应。30d喂养试验结果表明，口服富铬金耳菌体各剂量组大鼠均未见异常症状和体征，也无死亡；对大鼠的体重、进食量、食物利用率及生长发育未见明显影响；红细胞计数、血红蛋白、白细胞计数等血液学指标也未见明显影响；富铬金耳各实验组与对照大鼠的血清葡萄糖、白蛋白、胆固醇、尿素氮、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、总蛋白、甘油叁酯、肌酐等血液生化学指标检查结果均在正常范围，脏器组织病理学检查结果未发现异常改变。富铬金耳对正常大鼠的无作用剂量在7.92 g／kg·BW／d以上，为人体推荐摄入量的100倍以上。STZ诱导的胰岛素抵抗实验动物分别按1.32 g／kg·bw／d、0.66 g／kg·bw／d、0.33 g／kg·bw／d灌胃富铬金耳21d后，叁个剂量组均有降低模型大鼠空腹血糖和口服糖耐量血糖的作用，果糖胺水平也显着降低，与盐酸二甲双胍降糖作用比较无显着性差异，但胰岛素水平未见显着降低，中剂量和高剂量组的胰岛素敏感指数显着升高，胰岛素抵抗指数显着降低，初步认为富铬金耳能够改善实验性胰岛素抵抗大鼠模型的口服糖耐量，能够显着降低血糖和果糖胺水平，虽未改变胰岛素的分泌功能，但显着提高了胰岛素敏感指数，从而显着改善胰岛素抵抗指数。采用金耳寄主粗毛韧革菌发酵法制备以萜类为主的小分子混合物SHE(Ethanol extract from the fermented mycelium of Stereum hirsutum，host fungus of T. aurantiabla)，观察SHE对体外培养的人肾透明细胞癌(786-O)和人肝癌细胞(BEL-7404)的细胞毒作用。MTT法结果表明SHE能够抑制786-O和BEL-7404细胞的生长，抑制作用随SHE浓度的升高而增强。SRB法蛋白含量测定结果发现SHE作用48 h后，786-O细胞与SRB结合的蛋白质含量显着下降，IC_(50)为523.13μg／mL。Wright染色和结果显示，786-O经SHE作用后呈现典型的凋亡形态学改变。流式细胞技术研究发现SHE组出现明显的凋亡峰。SHE作用48h后，BEL-7404细胞与SRB结合的蛋白质含量显着下降，IC_(50)为567.38μg／mL。Wright染色结果显示，BEL-7404经SHE作用后呈现典型的凋亡形态学改变。流式细胞技术研究发现SHE组也出现明显的凋亡峰。
马丽杰[8]2009年在《锁阳多糖延缓衰老的作用及端粒酶调控机制研究》文中认为目的:本文研究锁阳抗衰老作用的主要有效部位,对活性成分锁阳多糖(Cynomorium songaricum polysaccharides,CSP)从形态学、自由基、免疫等多个角度研究其抗衰老作用及端粒、端粒酶调控机制。实验通过比较锁阳不同溶液提取物对D-半乳糖致衰小鼠的抗氧化、抗衰老作用,探讨锁阳抗衰老的有效部位和有效提取部位的主要有效成分;研究CSP提取精制工艺,为工业化生产提供依据;研究CSP对衰老模型小鼠免疫功能的影响和对端粒酶活性的影响;CSP对衰老模型小鼠血液及脑组织细胞染色体末端端粒长度和小鼠骨髓及睾丸组织端粒酶逆转录酶(telomerase reverse transcriptase,TERT)mRNA表达的影响,观察其抗衰老免疫机制及端粒酶机制,为锁阳多糖的保健作用和药用价值的开发和利用提供依据。方法:制备锁阳水、无水乙醇、乙酸乙酯提取物混悬液,应用HPLC法,苯酚-硫酸法测定不同提取物中所含的主要活性成分儿茶素、熊果酸和多糖。建立小鼠衰老模型,以锁阳的不同提取液连续给药56 d,取血并测定其过氧化氢酶(CAT)、总抗氧化能力(TAOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)叁项指标。昆明小鼠腹腔注射D-半乳糖500 mg·kg~(-1)·d~(-1)制作衰老模型,CSP低(20mg·kg~(-1))、中(40 mg·kg~(-1))、高(80 mg·kg~(-1))CSP治疗,连续56天后,测定脾脏、胸腺脏器系数,应用MTT法测定骨髓细胞增殖数,通过体内淋巴细胞转化率和腹腔巨噬细胞吞噬率观察非特异性免疫功能。应用Elisa法测定睾丸组织端粒酶的活性。昆明小鼠D-半乳糖制作衰老模型,动物分成正常组、模型组、CSP低、中、高剂量、黄芪多糖(40 mg·kg~(-1))各组,连续灌胃给药56 d后,应用荧光实时定量PCR方法测定各组小鼠血细胞及脑组织端粒的相对长度,应用荧光实时定量RT-PCR法测定骨髓及睾丸组织TERT mRNA的表达。结果:锁阳水提物主要含多糖类成分,含65.64%,不含熊果酸,儿茶素含量也极低,为0.026%。衡量CSP的多糖得率和纯度,选择水提醇沉法提取锁阳多糖,精制后CSP得率为1.24%,多糖含量93.2%,平均分子质量1.29×10~5。锁阳不同提取物均具有一定的抗氧化、抗衰老能力,其中水、醇提物作用最显着。锁阳水提物的CAT、GSH-PX、TAOC叁个抗氧化指标同模型组相比均有统计学差异,接近正常组水平。醇提物CAT、GSH-PX明显高于模型组,对TAOC影响不明显。酯提物只能提高GSH-PX,对另外两个指标影响很小。较高剂量的CSP能够提高衰老小鼠免疫功能。CSP高、中、低剂量骨髓细胞增殖数分别为(0.44±0.09);(0.43±0.08);(0.39±0.10),各组同衰老组(0.32±0.11)相比均有明显差异(P＜0.0 5)。高剂量CSP能够显着提高衰老小鼠体内淋巴细胞转化率(P＜0.01)和腹腔巨噬细胞吞噬率(P＜0.05)。中、高剂量CSP组小鼠睾丸组织端粒酶阳性率明显增加。高、中剂量CSP组血细胞相对端粒长度T/S ratio分别为(1.64±0.36),(1.33±0.28),同衰老组(1.01±0.13)相比,有极显着性差异(P＜0.01),脑组织高、中、低剂量CSP组分别为(3.34±0.58),(2.30±0.75),(1.55±0.58),同衰老组(1.04±0.33)相比,有极显着性差异(P＜0.01)。骨髓中相对TERT/GAPDH基因表达各给药组均值均高于衰老模型组,但只有CSP高剂量组(1.0129±0.0106)显着高于衰老模型组(1.0000±0.0021)(P＜0.05)。在睾丸中低(1.0004±0.0002)、中(1.0006±0.0003)、高剂量CSP(1.0009±0.0007)和黄芪多糖对照组(1.0005±0.0006)相对TERT/GAPDH基因表达均显着高于衰老模型组(1.0000±0.0003)(P＜0.05)。结论:CSP可以提高衰老小鼠免疫功能,并可以通过促进TERT的转录过程,提高端粒酶活性,抑制染色体末端端粒长度的缩短,从而起到延缓组织细胞的衰老进程的作用。论文从衰老的自由基、免疫、端粒叁大机制入手,多个角度研究其抗衰老的作用及机制,为锁阳的推广应用和锁阳多糖的研发和应用提供了基础,也为中药锁阳及CSP的养生保健、提高老年人生活质量提供了依据。论文将分子生物学理论和技术应用于传统补肾中药的抗衰老研究,为补肾中药的研究提供了一个新的思路。
参考文献：
[1]. 当归寄生注射剂指纹图谱的研究[D]. 于淼. 沈阳药科大学. 2004
[2]. 当归寄生注射液指纹图谱研究[J]. 于淼, 于治国, 高阳, 赵云丽. 中成药. 2004
[3]. 指纹图谱在提高注射液用鲜鱼腥草、鱼腥草注射液质量标准方面的研究[D]. 黄萍. 成都中医药大学. 2005
[4]. 高效液相色谱在中草药质量控制中的应用[D]. 王丽峰. 西南大学. 2009
[5]. 基于实证视角的中药注射剂不良反应评价研究[D]. 刘雅莉. 天津大学. 2012
[6]. 台湾中药科技发展史研究[D]. 余依婷. 广州中医药大学. 2011
[7]. 金耳生药学和发酵产物活性的研究[D]. 刘春卉. 华东师范大学. 2007
[8]. 锁阳多糖延缓衰老的作用及端粒酶调控机制研究[D]. 马丽杰. 内蒙古大学. 2009
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