猕猴桃中几种水溶性维生素的毛细管电泳测定
何弘水
（漯河医学高等专科学校，河南 漯河 462002）
摘 要： [目的]建立高效毛细管电泳同时分离和检测猕猴桃中水溶性维生素的方法，并研究缓冲溶液，工作电压，检测波长对维生素测定的影响。[结果]实现了6种水溶性维生素的同时分离，回收率为89.9%～97.8%。在柱温20℃，电压20kV硼酸—硼砂缓冲液pH值8.6，进样时间10min，检测波长265nm时，检测效果最好，具有良好的稳定性，精密度和线性关系。
关键词： 高效毛细管电泳 水溶性维生素 猕猴桃
水溶性维生素包括B族维生素和维生素C。维生素B1又称抗神经炎或抗脚气病维生素，极易溶于水，缺乏时使主要由葡萄糖供能的神经、心脏、脑组织结构和功能发生改变，出现多发性神经炎、皮肤麻木，四肢无力等一系列症状。维生素B2广泛体内的各种氧化还原反应，能促进糖、脂肪和蛋白质代谢。维生素B6的活性形式是磷酸吡哆醛和磷酸吡哆胺，它们是转氨酶的辅酶参与氨基酸和脂肪代谢。Vc也能参与体内多种代谢过程，增强机体抵抗抗力。同时测定几种维生素的方法主要有高效液相色谱法和反相高效液相色谱法等[1-3]。笔者采用HPCE对猕猴桃中水溶性维生素B1、B2、B6、C、PP、叶酸进行测定，旨在为其他水果水溶性维生素的测定提供参考。
一、材料与方法
1.仪器与试剂
P/ACETMMDQ型高效毛细管电泳仪；熔融石英毛细管，有效长度50cm，内径75um；PHS-2C型pH计；KQ-100B型超声波清洗器；BT25S型电子天平.水为蒸馏水。猕猴桃在漯河丁湾菜市场购买。
2.标准溶液的配制
称取各种维生素标品10.00mg，蒸馏水定容至100m，l得到浓度为100mg/L的标准溶液，0145Lm滤膜过滤，超声波震荡待用。分别配制60.0、50.0、40.0、30.0、20.0、10.0、5.0和2.0mg/L的溶液，用以制作标准曲线。
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3.样品处理
猕猴桃用蒸馏水洗净，自然沥干，称重20.0g，研磨至碎，置于小烧杯，加0.01mol/LHCl溶液，搅拌均匀，超声提取，并用0.45um滤膜过滤。将滤液转至50mL容量瓶中，用0.01mol/L盐酸定容至刻度，充分摇匀，置冰箱备用。
1.2 电压的选择
二、结果与分析
1.毛细管电泳条件
不同电压对出峰时间有影响。电压越高，组分迁移速度越快，所用时间也越短，出峰越早，但并不影响出峰的先后顺序。同时，高压增加柱内焦耳热，对测定效果有一定影响。分别考察了5～40kv的结果，发现虽然在10kV电压条件下，B族维生素分离效果较好，但综合考虑其他因素最终选择20kv电压。
应用SPSS 20.0统计软件分析数据，计量资料用均数±标准差(±s)表示，组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用t检验;计数资料采用率(%)表示，数据比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。
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1.1 缓冲溶液pH值的选择
缓冲溶液对电泳影响很大，缓冲液浓度增大会降低电渗流速度，而选择低浓度缓冲液有利于快速分离。根据研究资料[4]，分别考察了pH值分别为7.6、8.0、8.2、8.6、8.8和9.0的硼酸—硼酸钠缓冲液对电泳的效果。最终认为pH值为8.6的缓冲液分离效果最好。
1.3 其他因素的影响
3.3.1.2 心理干预 向患者说明肝穿刺的意义、程序、有可能出现的问题和应对办法及密切配合的重要性，让做过肝穿刺的患者介绍经验和体会，让患者早有心理准备，增强患者的信任感和安全感，消除过度的紧张和焦虑。因术后疼痛的出现与否、强度如何与机体的情绪状态密切相关。本组患者疼痛病例出现较少，与术前进行了较好的心理和行为干预，减少和降低了患者的焦虑和紧张情绪有关。因为焦虑可使脑内去甲肾上腺素递质释放增加，能减低痛阈，增加痛觉［2］。王瑞敏等［3］也认为，加强心理干预，可明显减少紧张情绪及疼痛的发生率。
试验中还考察了进样电压、进样时间、柱温和检测波长对试验结果的影响。最终确定进样电压为5kv，进样时间5min，柱温20℃，检测波长265nm。
2.样品测定及回收率试验
取500uL经过处理过的猕猴桃提取液定容至100m，l按2.0条件进行测定，结果见表1。为检测方法的可靠性，在已经测得含量的样品中分别添加对照品，分别观察其回收率和精密度，结果见表2。由表2可知，该方法可靠，回收率高。
表1 猕猴桃样品中6种维生素的含量
表2 猕猴桃水溶性维生素的回收率与相对标准偏差
三、结论
采用毛细管电泳分析法同时测定了猕猴桃中6种水溶性维生素含量的条件是：柱温20℃，电压20kV，进样时间10min，硼酸—硼砂缓冲液pH值8.6，检测波长265nm。该方法所需样品少，操作简单，也可为其他水果中水溶性维生素测定提供参考。
参考文献
[1]王雪梅，高素莲，于金文.HPLC法测定新鲜草莓中水溶性维生素[J].食品科学，1999（5）：52-53.
[2郝荣辉，夏敏，谷学新.反相高效液相色谱同时测定动物营养液中B族维生素[J].现代科学仪器，2006，16（6）：81-83.
[3]翁水旺.RP-HPLC法测定复方三维右旋泛酸钙糖浆中维生素B1和维生素B6的含量[J].药物分析杂志，2004，24（6）：645-647.
[4]司雄元，檀华蓉，高丽萍，等.高效毛细管电泳方法同时测定茶叶中多种水溶性维生素[J].安徽农业科学，2008，36（3）：849.
中图分类号： G301
文献标识码： A
文章编号： 1003-9082（2019）05-0201-01
标签：高效毛细管电泳论文; 水溶性维生素论文; 猕猴桃论文; 漯河医学高等专科学校论文;