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李延成
衡水市中心血站 河北 衡水 ０５３０００
【关键词】 甘油化红细胞;冰冻红细胞;质量;量化【中图分类号】Q２－０６【文献标识码】B 【文章编号】１００８－６３１５(２０１５)１２－０４８９－０１
“甘油化红细胞”是“冰冻红细胞”的前身,是制备“冰冻红细胞”的关键操作环节.甘油作为目前冰冻保存红细胞最为常用的保护剂,在减少冰冻后红细胞损伤方面起到重要作用[１].我国大多数血站以“低温慢冻法”制备冰冻红细胞,即复方甘油保存液与红细胞混合后的终浓度为４０％,在－６５℃以下的条件下冰冻并保存,有效保存期限为１０年[２].由于“冰冻红细胞”只是“解冻去甘油红细胞”的中间过程,国标中只是对起始血液、甘油加入、冷冻保存条件上有部分陈述,并未规定具体操作步骤与方法,质量控制环节同样缺失,造成行业内“甘油化红细胞”操作差异化很大,致使最终产品－－“解冻去甘油红细胞” 不合格率增加,加重稀有血型血液的供需矛盾.出于为提高“冰冻红细胞”制备质量,减少人为操作造成的质量影响,笔者就“甘油化红细胞”的几个关键操作环节以个人观点阐述如下:
１ 起始血液要求国标规定将自采集日期６d内的全血或悬浮红细胞中红细胞分离出,并将一定浓度和容量的甘油与其混合后,使用速冻设备进行速冻或直接置于－６５℃以下的条件下保存.由于血液保存液配方不同(ACD或CPD),保存期限也不同,而只有６d内的时限要求,最终质量肯定会有所差别.但笔者认为无论是ACD或CPD保养液均不宜超出６d再制备“冰冻红细胞”.另外,对采血源头加以控制,要求采血顺畅并足量,肉眼观察起始血液无色泽异常、溶血、凝块、气泡及重度乳糜等情况,并于４８小时内完成过滤去除白细胞的红细胞作为“甘油化红细胞”起始血液.
２ 复温及恒温平衡行标中没有对起始血液进行复温的要求,血液自２~６℃环境中取出去上清后直接加注甘油,甘油化后在室温中静置平衡３０min[３].由于我国南北四季温差较大,室温中静置本身无可操作性意义.而国外资料中要求对红细胞甘油化前后须进行复温或特殊孵育,复温是采用将红细胞在室温下静置２小时或在３７℃环境下加温１０min来实现的[４].笔者认为,将红细胞与甘油充分混合才可以降低冰冻损害,从而获得理想的红细胞回收率.复温可以恢复红细胞的代谢活力,更有利于甘油进入红细胞内置换细胞内水分子,短时间内实现细胞内外渗透压的平衡.我们的做法是将起始血液及甘油共同放入３０~３７℃ 环境内(干式融化箱)复温１０~１５min,加注甘油完成后再次以同样条件平衡１０~１５min.
３ 去除上清液血液上清液(血浆或保存液)以水分子为主,可以直接对甘油进行稀释,上清液的量直接影响甘油终浓度,所以复温后去除上清液是人为操作中至关重要的环节.根据多年操作经验,笔者推荐以２２℃、４６６０g、５min的条件离心,用分浆夹将上清液尽量去除干净.
４ 量化加注甘油由于献血者个体Hct(红细胞比容)有所不同,造成每袋血液的红细胞体积及重量差异性较大.目前国内制备冰冻红细胞以红细胞单位数为基准,每一单位红细胞加入５７．１％复方甘油保存液１６０ml,并没有考虑个体差异性因素, 因此“甘油化红细胞”终浓度４０％肯定有所偏差;另外,细胞内水也是影响甘油终浓度的关键因素,国内普遍未将其因素考虑在内,至使“甘油化红细胞”的甘油终浓度大大低于４０％,严重影响红细胞冰冻保存效果[５].根据我站２０１０－２０１４年期间数据分析,去上清后的浓缩红细胞Hct平均在０．８０左右,计算得出浓缩红细胞与所需加入的５７．１％甘油容量比为１００:１８０(即每１００ml浓缩红细胞需加入浓度为５７．１的甘油１８０ml),可满足甘油终浓度４０％的要求.
５ 去除多余甘油起始血液原有体积及注入的甘油体积之和,已远远超出原血袋的容量,所以在甘油加注前要进行转袋.过大的体积不便于包装、冰冻及解冻,虽然有文献报道冰冻前去除多余甘油与解冻后去除多余甘油,质量检测无明显差异[６]. 但笔者认为,由于细胞内外渗透压已平衡,多余的甘油已无实际性意义,冰冻前去除多余甘油更便于操作.同时也建议,去除甘油时离心力不宜过高,推荐在４℃、２６００g、８min的条件下离心;甘油去除不宜过多,去甘油后总体积在３００ml左右为宜.
６ 其他建议以无菌连接方式(无菌接管机)完成各项连接操作;使用ACP－２１５进行甘油加注更为理想,可减少人为因素的影响,但成本较高,需综合考虑;无论手工还是机器操作都要在甘油化完成后进行排气处理,可减少冰冻破袋几率; 采用双热合操作进行管道封口,两次热合间距大于３cm,可避免因热合口渗漏造成的血液报废. 结论:综上所述,笔者认为,目前国内“冰冻红细胞”操作SOP有待统一与完善,质量更有提升空间;国标只是最低标准,在满足国标的同时,应尽可能细化操作规程,降低或减少人为影响因素,进一步提高“冰冻红细胞”质量,以保证稀有血型血液的及时供应与输血安全.
参考文献[１] 曹丽,张西春,杨莉娅．冰冻解冻去红细胞制备洗涤过程中相关问题探讨． 实用医技杂志,２００５,１２(３):５９１－５９２． [２] GB１８４６９－２０１２?全血及成分血质量要求?．中华人民共和国卫生部．２０１２[ －５－１１． [３] ?血站技术操作规程?．卫医政．２０１２－６－１ ４] AABB Technical Manual．Methods６:Blood Collections,Storage,and[ ComponentPreparationMethods．p－７４１ ５] 赵阳,冰冻红细胞制备工艺的标准化和产品的质量控制．中国输血杂志,[ ２０１０,２３,(１０):７８８－７９０． ６] 王惟,谭菲,柴婷婷．冰冻红细胞冰冻前去除甘油的效果研究．临床输血与检验,２０１５,１７,(４):３４９－３５０．
论文作者:李延成
论文发表刊物:《中国综合临床》2015年12月供稿
论文发表时间:2016/3/4
标签：红细胞论文; 甘油论文; 冰冻论文; 血液论文; 操作论文; 浓度论文; 质量论文; 《中国综合临床》2015年12月供稿论文;