郑州市中医院 河南郑州 450007
【摘 要】目的：探讨愈胃灵合剂(Yu wei ling mixture YWLM)对慢性萎缩性胃炎大鼠（CAG）胃酸分泌及SS、Bax的影响及机制。方法：将健康Wistar大鼠随机分为5组，即正常组、CAG组、YWLM低、中、高剂量组，每组15只。用水杨酸钠灌胃联合自由饮用氨水法建立大鼠CAG模型，正常组予生理盐水灌胃。造模成功后开始给予药物干预，YWLM按16 g/kg?d、8 g/kg?d、4 g/kg?d的剂量给大鼠连续50天灌服，取材后检测胃液总酸和游离酸含量，采用ELISA法检测血清SS的含量，免疫组化法检测胃粘膜中Bax的表达变化。结果：与正常组比较，CAG组血清SS含量显著升高（P<0.01)，胃液总酸、游离酸含量、胃粘膜Bax表达显著降低( P < 0. 01; P < 0. 01; P < 0. 01)；与CAG组比较，YWLM（高、中、低剂量）组血清SS含量明显下降，胃液总酸、游离酸含量、胃粘膜Bax表达升高(P<0.01或P<0.05)，其中高剂量组差异最为突出(P<0.01)。结论：YWLM对CAG大鼠模型有较好的治疗作用，促进胃酸分泌、减少血清SS含量、或上调Bax表达可能是其部分作用机制。
【关键词】愈胃灵合剂；慢性萎缩性胃炎；胃酸；SS；Bax
【中图分类号】R573.3+2 【文献标识码】B 【文章编号】1674-8999（2015）9-0659-02
慢性萎缩性胃炎( chronic atrophic gastritis, CAG )是临床上常见的消化系疾病，以胃黏膜上皮和腺体萎缩、黏膜变薄、黏膜肌层增厚及伴有肠腺化生、不典型增生为主要特征。其发病率、癌变率较高，目前已成为极受医学界重视的疑难杂症。近年来中医药在近年来对该病的基础研究及临床治疗发挥了独特的优势[1-2]。愈胃灵合剂在临床治疗CAG取得了良好的效果，但其作用机理仍不明确。本研究旨在观察YWLM对CAG模型大鼠胃液总酸、游离酸含量、SS含量和Bax表达的影响，探讨其可能的作用机制。
1 材料和方法
1.1 动 物
健康清洁级 Wistar 大鼠75只，雌雄各半，体重180-220g，河南中医学院动物实验中心提供。
1.2 实验药物
愈胃灵合剂组成：党参、黄芪、白术、丹参、莪术、三七、川芎、白花蛇舌草、石斛、麦冬、半枝莲等组成，由郑州市中医药中药房提供。
1.3 试剂及仪器
试剂：氨水含NH3 25%～28%（沈阳新兴试剂厂）；水杨酸钠（天津市化学一厂）；兔抗鼠Bax多抗（北京博奥森生物技术公司）；SS与Gas ELISA试剂盒（北京博奥森生物技术公司）；SP试剂盒（美国ZYMED公司）；DAB染色液（美国ZYMED公司）。
仪器：高速离心机HHR21型，北京医用离心机厂；电热恒温水浴箱HWS-20型，江苏太仓市实验设备厂；酶标仪Thermo 354型，美国；光学显微镜Olympus BX-51型，日本。
1.4 方 法
1.4.1 将75只健康Wistar大鼠随机分为5组，即正常组、CAG组、YWLM低剂量组、YWLM中剂量组、YWLM高剂量组，每组15 只。除正常组外各组大鼠采用浓度为2％水杨酸钠溶液按1 mL/100 g灌胃2个月，1次/d，灌胃前后1 h禁食禁水，并自由饮用0．05％ 的氨水，2 d足量喂食，1 d停食；正常组给予1 mL/100 g体重生理盐水日1次灌胃，自由饮水进食，直至实验结束。造模过程中CAG组死亡2只，YWLM低剂量组、YWLM中剂量组各死亡1只，正常组没有死亡。随机抽取2只大鼠做胃黏膜病理组织学检查，确认造模成功后进行药物干预实验，YWLM低剂量2 g生药/ (kg?d )灌胃，相当于人的临床用量，1次/d；YWLM中剂量组4 g生药/ (kg?d )灌胃，相当于人临床用量的2倍，1次/d；YWLM高剂量组8 g生药/ (kg?d )灌胃，相当于人临床用量的4倍，1次/d；CAG组予1 mL /100 g体重生理盐水1次/d灌胃。各组灌胃均50天后，处死所有大鼠。
1.4.2 胃液收集检测: 大鼠用乌拉坦(1g/kg) 麻醉后, 仰卧位固定于手术板上, 沿腹正中线剪开, 结扎贲门, 十二指肠剪小口插入引流管, 用洁净注射器抽取胃液, 记录胃液量, 注入离心管离心5min取上清液待测。胃液总酸度和游离酸度测定参考文献[3] :将收集的胃液和胃黏膜冲洗液混合共为4ml，测定其pH 值( pH计) , 然后滴入1%的酚酞指示剂, 用0.01mol/L的NaOH 缓慢滴定中和至酸度计值达7.0, 记录NaOH的消耗量V1,V1*10即为胃液中所含的游离酸含量；继续滴加NaOH至出现酚酞色( pH 值8.5左右), 记录NaOH 的消耗量V2, V2 即为总酸量。
1.4.3 ELISA法测定标本中SS含量：采用摘取眼球法取血，约5 mL/只，离心10 min，分离血浆、血清，-80℃保存，采用酶联免疫吸附法检测SS含量，具体操作方法详见试剂盒说明书。
1.5 统计学方法
采用SPSS17.0软件包进行数据分析。数据均采用（x±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析（ANOVA）。
2 结果
2.1 各组大鼠胃液总酸量和游离酸含量的比较 结果见表1。
胃液总酸含量, CAG组与正常组比较P<0.01,差异具有统计学意义；YWLM高剂量组与CAG组相比较P <0.05, 差异具有统计学意义；YWLM低剂量组与CAG组相比较差异无统计学意义。胃液游离酸含量, CAG组与正常组比较P<0.01,差异具有统计学意义；YWLM高剂量组与CAG组相比较P <0.05, 差异具有统计学意义；YWLM低剂量组与CAG组相比较差异无统计学意义。
2.2 血清生长抑素（SS）的变化 结果见表2。
3 讨论
从中医角度看,CAG属于“胃脘痛”、 “痞满”等范畴，临床上主要表现为胃脘痞闷、嗳气等。本病多由于机体脾胃素虚, 再加之内外之邪乘虚相袭,如饮食不节、情志失调等导致胃气阻滞，和降失司，久则气滞血瘀，瘀阻中焦，脾胃势必受损，气血不能荣养胃络，胃膜失养，逐渐萎缩。本课题组以益气健脾和胃，活血化瘀之法组方愈胃灵合剂治疗本病，方中以黄芪、党参补脾胃之气，扶正固本，使脾气健运，气血化生有源，白术扶植脾胃，散寒除弊，消食除痞，丹参、川芎、三七、莪术联用增强活血行气化瘀之效，使脾胃脉络通畅、瘀滞消除,利于萎缩病变的改善，石斛、麦冬养胃生津，使胃阴得充，白花蛇舌草、半枝莲清热祛毒, 使其湿热郁毒得于清除,有助于黏膜病变的恢复。诸药合用可使补中有消，补而不滞，共凑健脾益气、活血化瘀、和胃养阴之效。现代药理研究证明,黄芪、党参、白术可调节消化系统功能, 提高胃蛋白酶活性, 改善免疫状态。
本实验结果示：与正常组比较, Bax灰度值明显升高。经YWLM预防和治疗后, Bax蛋白水平增高。YWLM 3种不同剂量均能不同程度上调Bax蛋白表达，积极促进正常的细胞凋亡，避免了CAG进一步向胃癌的转化。
综合分析，YWLM的作用机制可能是通过升高胃液总酸含量和游离酸含量, 促进SS正常分泌, 上调Bax表达，调节内分泌功能、修复胃粘膜损伤；促进正常的细胞凋亡，起到治疗CAG的效果。且YWLM在治疗CAG方面具有明显的剂量相关性，一定程度上提高药物剂量可以达到更好的治疗效果。
参考文献：
[1]吴晓燕，朱方石，王伟.中医药治疗慢性萎缩性胃炎临床研究进展.江苏中医药，2009，41（6）：81.
[2]张静.中医药治疗慢性萎缩性胃炎研究述要. 实用中医内科杂志,2009,23(2):19-21.
[3]徐叔云, 卞如濂. 药理实验方法学[M].北京：人民卫生出版社,2003: 13.
[4]刘旺根，蒋时红，王雪萍．黄芪建中汤对脾虚型慢性萎缩性胃炎大鼠胃粘膜防护因子复健作用研究[J].中药药理与临床，2007，23( 4) : 6-8．
科技项目：
郑州市普通科技攻关计划项目（X2013S0264）
通讯作者：
娄 华（1985-），女，河南省郸城县。硕士研究生。
论文作者:乔虹,娄华通讯作者,王昊,曹桂芳 杨宏升
论文发表刊物:《中医学报》2015年9月第30卷供稿
论文发表时间:2015/10/22
标签：胃液论文; 含量论文; 剂量论文; 大鼠论文; 合剂论文; 统计学论文; 血清论文; 《中医学报》2015年9月第30卷供稿论文;