刘玉杉[1]2001年在《一种生物型免疫抑制剂——可溶性肿瘤坏死因子α受体I基因治疗移植的实验研究》文中研究指明急慢性排斥反应是影响器官移植近远期效果的最主要原因，根本的解决出路之一是寻找诱导抗原特异性耐受或实现抗原特异性抑制的治疗方法和策略。器官移植物的基因治疗和基因修饰的耐受性树突状细胞(dendritic cell，DC)诱导免疫耐受的相关进展为临床器官移植提供了极具潜力的治疗方法。尝试应用免疫抑制性调节分子基因修饰移植器官进行局部免疫调控或基因修饰树突状细胞诱导免疫耐受已成为移植研究领域的主攻方向之一。 树突状细胞(DC)是功能最强大的专职抗原提呈细胞，DC提呈抗原方式的免疫性或耐受性决定了DC既可以启动免疫反应也可以诱导中枢性或外周性免疫耐受。成熟或活化的DC可以启动正向免疫反应，未成熟DC或DC前体则显示了耐受性。通过免疫抑制分子的基因修饰能够使DC潜在的耐受原性得以放大，候选基因包括vIL-10、TGF-β、CTLA4-Ig、FBL-3、IFN-γdR和FasL等。 肿瘤坏死因子-α(turnor necrosis factor-α，TNF-α)是多能的前炎症细胞因子，由激活的单核细胞和巨嗜细胞，活化的T淋巴细胞和树突状细胞所产生，具有广泛的生物学活性。TNF-α是介导同种免疫应答反应的关键因子，在急、慢性同种排斥反应的各个阶段均有TNF-α的合成和释放，介导排斥反应的发生发展。TNF-α的生物活性是由细胞膜上的两种结构相关但功能完全不同的受体介导，分别为TNFR-I(55KD，p55-)和TNFR-Ⅱ(75KD，p75-)。近来的研究显示TNF／p55TNF-R通路在TNF-α介导的同种排斥反应过程中具有重要作用；TNF-α具有促进DC前体发育成熟及活化DC的活性，阻断TNF-α的作用可抑制DC成熟与活化。因此，应用TNF-α的拮抗剂有可能预防和治疗排斥反应，TNF-α拮抗分子的基因有可能是修饰耐受性DC的又一个潜在的候选基因。 p55-和p75-TNFR受体均可水解形成可溶性TNF受体(soluble tumor necrosis factorreceptor,sTNFr)，相应的称为sTNFr-p55和sTNFr-p75。sTNFr具有中和和拮抗TNF-α的作用，是体内自然存在的TNF-α拮抗剂。据认为sTNFr是继可溶性IL-2受体之后又一个具有潜在临床应用价值的分子。 本研究利用小鼠血管化的心脏异位移植模型和基因转移技术，通过编码sTNFr-p55：Fc融合蛋白基因的腺病毒载体转染移植器官及DC前体，观察sTNFr-p55作为TNF-α拮抗剂的表达抑制器官移植排斥反应的效果及在体内、外产生耐受性DC的作用，探讨sTNFr-p55抗排斥效果及其基因修饰DC诱导免疫耐受的体内外机制。 第Ⅰ部分：改进的小鼠异位心脏移植模型(cuff法)建立与评价。 小鼠心脏移植模型是进行移植免疫学的理想动物模型。目前有腹部吻合法、颈部吻合法和颈部Cuff法叁种制作方法。本方法是在颈部cuff法的基础上加以改进的。将供者心脏连同肺部整块切除后，置于冰乳酸林格氏液中修整。内径0.6mm的cuff在修整时安装于供心的左肺动脉，内径0.4mm的cuff在术中安装于受者颈内动脉。术后排斥反应的判定通过直接触摸法和心电图法联合判断。本手术方法成功率可高达96％,平均手术时间40-50分钟。直接触摸法和心电图法联合判断准确率很高。BALB／C和C57BL／6小鼠是纯系的同种小鼠，具有不同的主要组织相容性抗原(MHC-Ⅰ、Ⅱ)，可进行同种排斥反应的免疫学研究。根据对BALB／C和C57BL／10小鼠互为供、受者进行移植的结果表明，在排斥发生时间上不同的鼠株移植组合存在差异(p＜0.05)，BALB／c小鼠的同种应答强度较C57BL／6小鼠为弱。本方法简单，可在短时完成多组实验手术，易于控制试验条件，排斥判定准确。一升生小型允友一刊爿一可沫位砷地怀死网子。央体！在困治疗的旧扳粪必研允 傅士企丈fllat＃：N）r＠MB：uwmFf＃ tSTNFrJ gM＃＄＄g DC MBbis＃RMk———————— DC处于不同分化发育阶段具有不同的提呈抗原方式。成熟DC高表达MHCJ 分子、CD80或 CD86及 CD40，具有强大的提呈抗原能力，可激活 nche T细胞，而未成熟 DC因表面分子的低表达，在提呈抗原时不能提供适宜的双信号刺激，可导致T细胞的无能或凋亡。许多因子包括GM－CSF、IL4、TGF－p及TNF－a等可影响骨髓细胞来源的DC的发育进程。研究发现人骨髓来源的CD34”单核细胞前体在GM－CSF的作用下发育为DC前体后，需TNFu的作用才能进一步发育成熟；阻断hF．a的作用可抑制DC成熟与活化。为了深入了解 hF－C对 DC分化成熟和活化的作用，我们将编码 SThFrp55＊C融合蛋白基因的腺病毒载体转染未成熟DC，通过阻断yF．a的作用，观察体外接受LPS、可溶性抗原及同种抗原的刺激对基因修饰的DC的成熟和活化的影响，探讨体外产生的耐受性DC在体内诱导免疫耐受的效果及机制。 用GM－CSF＋IL4的方法体外扩增C57BU6小鼠骨髓来源的DC，于第5天将STNFrp55基因的腺病毒转染未成熟DC，设Ad．LacZ修饰的DC及正常DC为对照组。观察有无LPS刺激对DC的表型、细胞因子（IL－12）分泌的影响；检测基因修饰后DC抗原递呈能力的改变；将基因修饰的DC与新鲜分离BALB／C小鼠的CD4＋T细胞作72小时MLR后，检测基因修饰的DC对同种CD4＼细胞的刺激能力，对培养上清中hl或ThZ细胞因子分泌水平进行了ELISA检测；观察基因修饰的DC
林丽莎, 毕广良, 黄为民[2]2019年在《干细胞治疗支气管肺发育不良的新启示:干细胞衍生物》文中提出随着围生医学的发展,极早产儿的生存率得到大大提升,但相应的,支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)的防治现状愈加严峻。BPD与新生儿死亡率、神经系统发育障碍密切相关,早期预测及治疗BPD尤为重要。近年来,已有许多临床前证据表明干细胞可治疗BPD,这种治疗作用是通过旁分泌多种生物因子尤其是干细胞外泌体实现的,且干细胞分泌的某些分子可在早产儿气道分泌物中分离并与BPD的发生密切相关,干细胞衍生物或可成为预测及治疗BPD的方式。现就干细胞衍生物治疗BPD的研究进展、优势、挑战以及作为BPD早期预测标记物的作用做简要综述。
参考文献：
[1]. 一种生物型免疫抑制剂——可溶性肿瘤坏死因子α受体I基因治疗移植的实验研究[D]. 刘玉杉. 第二军医大学. 2001
[2]. 干细胞治疗支气管肺发育不良的新启示:干细胞衍生物[J]. 林丽莎, 毕广良, 黄为民. 解放军医学院学报. 2019