方勤美[1]2003年在《嗜水气单胞菌β-HemA重组菌的优化培养及其表达产物ISCOMs的制备》文中认为嗜水气单胞菌能导致鱼类细菌性疾病并造成大面积流行，给水产养殖业造成巨大的经济损失。嗜水气单胞菌病的免疫预防研究已成为鱼病学研究的热点，国内已开发了嗜水气单胞菌灭活全菌疫苗，其亚单位苗和基因工程苗也正在研究中。溶血素是嗜水气单胞菌重要的毒力因子和保护性抗原，是目前嗜水气单胞菌亚单位苗和基因工程苗研究的重要对象。本研究在构建嗜水气单胞菌β-hemA基因重组菌的基础上，探讨重组菌的优化培养，提高基因产物的表达量，应用基因表达的β-溶血素制备免疫刺激复合物，为嗜水气单胞菌亚单位疫苗奠定技术基础。 通过设计正交试验探讨温度、培养基、时间叁个因素对嗜水气单胞菌β-hemA重组菌E．coli DH_5。(命名为PCB)基因产物表达量的影响，选择最佳培养条件，实现优化培养，提高了β-hemA基因产物的产量。实验结果表明：该重组菌株在100mLTSB(添加0.05％酵母浸提物，1.8μg／mL ZnCl_2)，37℃培养30小时收获，其毒素蛋白含量为3258μg，毒素溶血价为17.44hu／μg，而在LB(100mL)和营养肉汤(100mL)中最高蛋白量和溶血价分别为1260μg，14hu／μg和1199μg，8.22hu／μg。所选择的叁个因素中对毒素蛋白质含量影响最大的是培养基，其次是温度；而对溶血作用影响最大的则是温度，其次为时间。最佳生长曲线测定结果表明，在培养基预热至37℃的情况下，PCB 6小时能进入对数期。 重组菌PCB培养物经硫酸铵浓度梯度沉淀粗提毒素蛋白质，并在pH2.5的柠檬酸缓冲液里酸化处理以暴露其疏水区，经Mega-10裂解后与Quil A、卵磷脂、胆固醇等结合制备β-hemA-ISCOMs(Immune Stimulating Complexes，ISCOMs)，透射电镜下可观察到β-hemA-ISCOMs，呈直径40nm左右的多面体的笼格状颗粒结构。 用β-hemA-ISCOMs(以下简称ISCOM组)、β-hemA-CFA(弗氏佐剂，以下简称CFA组)和β-hemA-Free Adiuvant(以下简称FA组)免疫接种鳗鲡，以PBS作为空白对照，免疫保护试验证实，同剂量的ISCOMs组比CFA组和FA组对本菌株TPS-30攻击具有更高的保护率，ISCOMs组可达100％，福建农林大学硕士学位论文CFA组能达87.5%，而FA组只有50%;交叉免疫保护实验证实:鳗鲡经ISCOMs免疫后除了能抵抗本菌株TPS一30的攻击外，还能产生抗异源菌株WQ免疫保护力，其中，IsCOMs组对wQ保护率为100%，未加佐剂组对WQ的保护率仅为33%。淋巴细胞增殖ELISA试验显示，在免疫剂量和Co认刺激剂量均相同的情况下，IsCOMs免疫组淋巴细胞的ELISA OD450比FA免疫组高出0.3。
吴宗福, 龚晖, 陈红燕, 杨金先, 刘晓东[2]2007年在《嗜水气单胞菌重组β-hemA-ISCOMs对鳗鲡的浸泡免疫效果》文中认为应用嗜水气单胞菌β-hemA重组菌表达产物作为抗原,制备成免疫刺激复合物(β-hemA-ISCOMs),通过浸泡途径免疫鳗鲡,测定免疫鱼细胞和抗体应答水平和免疫效力。试验结果表明:(1)β-hemA-ISCOMs在电镜下呈笼格状颗粒,直径约40nm;(2)一免后第44天,β-hemA-ISCOMs免疫组淋巴细胞转化率显着高于非β-hemA-ISCOMs免疫组(P<0.05);(3)免疫浓度在30～120mg.L-1时,β-hemA-ISCOMs免疫组血清抗体效价与浓度正相关,且显着高于ISM1312佐剂组与无佐剂组(P<0.05);(4)免疫浓度在30～120mg.L-1时,β-hemA-ISCOMs免疫组存活率与免疫接种剂量正相关,在同等剂量下,β-hemA-ISCOMs免疫组的存活率高于其它组。因此β-hemA-ISCOMs浸泡免疫可诱导宿主产生细胞与抗体介导的免疫应答,产生保护性免疫,ISCOMs技术适用于制备浸泡型渔用疫苗。
参考文献：
[1]. 嗜水气单胞菌β-HemA重组菌的优化培养及其表达产物ISCOMs的制备[D]. 方勤美. 福建农林大学. 2003
[2]. 嗜水气单胞菌重组β-hemA-ISCOMs对鳗鲡的浸泡免疫效果[J]. 吴宗福, 龚晖, 陈红燕, 杨金先, 刘晓东. 水产学报. 2007