杜 宇 王彩丽 魏 红 李海涛
【摘 要】 目的 分析α-actinin-4在大鼠正常肾组织和阿霉素肾病大鼠不同病理类型肾组织的表达差异，以探讨该分子在蛋白尿发生中的可能作用及相互关系。方法 采用阿霉素制备大鼠模型，分析α-actinin-4在不同病理类型大鼠肾组织中的表达。结果 α-actinin-4在微小病变组表达增加（P<0.01），而在局灶节段性肾小球硬化组表达与对照组无明显差异。结论 α-actinin-4在不同病理类型间存在差异，其表达的变化间接反映足细胞的损伤，提示了病变的活动情况。
【Abstract】 purpose Analysis of α-actinin - 4 normal kidney tissue of rats and adriamycin nephrosis expression in different pathological type of renal tissue of rats, to explore the molecular in the possible role and relationship between proteinuria occurred. Methods The preparation of adriamycin rat model, analysis of α-actinin - 4 kidney tissues in rats in different pathological type of expression. Result α-actinin - 4 expressed in tiny lesions group increased (P < 0.05), while in focal segmental glomerular sclerosis express no obvious difference with the control group。Conclusion α- actinin - 4 in the differences between the different pathological type, the change of its expression indirectly reflect the damage of sertoli cell, prompt the lesions.
足细胞是维持GBM结构和功能正常的主要细胞之一。它的损伤导致并增加了蛋白尿的发生[1]，加剧肾小球的硬化,。阿霉素可以直接损伤肾细胞，可能从DNA水平直接干预足突细胞的蛋白合成，造成足突细胞的形态学改变[3]. 。阿霉素肾病大鼠模型病理类型主要表现为局灶节段性肾小球硬化（FSGS）和微小病变（MCD）两种.。本文分析α-actinin-4在大鼠正常肾组织和阿霉素肾病大鼠不同病理类型肾组织的表达差异，以探讨该分子在蛋白尿发生中的可能作用及相互关系。本文分析α-actinin-4在大鼠正常肾组织和阿霉素肾病大鼠不同病理类型肾组织的表达差异，以探讨该分子在蛋白尿发生中的可能作用及相互关系。
材料和方法
1．材料：健康雄性SD大鼠30只，体重200g左右（内蒙古大学动物中心提供，合格证号：SCX（蒙）2002-0001）。盐酸阿霉素（山西普德制药 10mg/支）。兔抗鼠 α-actinin-4多克隆抗体：100ug/ml MAB1682 美国 Chemicon 公司。SP试剂盒（北京博奥森）。DAB显色系统（福州迈新）。
2．模型建立及分组：实验大鼠适应性喂养一周后随即分为3组：对照组（n=10）. MCD组，(n=10) 、FSGS组 (n=10）。MCD组测定24小时尿蛋白定量、血清白蛋白、总胆固醇、肌酐，尾静脉一次性注射盐酸阿霉素7.5mg/kg，并于注射后第7天和第14天分别测定上述指标，第14天处死对大鼠,取肾组织制备成蜡块备用。FSGS组大鼠测定上述指标后在第7天和14天分别尾静脉注射阿霉素5mg/kg， 2.5mg/kg，注射后28天和56天分别测定同样指标，第56天处死对大鼠,肾组织制备成蜡块备用。
3．免疫组化：石蜡切片脱蜡水化，采用SP法免疫组化试剂盒，检测α-actinin-4，（1:100稀释），DAB显色剂，显色3-5分钟后，所有操作按说明书进行。
4．用Olympus DP72摄象头及DP—BSW采集图像，利用Image Pro Plus 6.0（IPP6.0）图像分析软件，分别测定每个肾小球中α-actinin-4阳性面积占其整个肾小球面积的比。
5．统计学分析：计量资料以均数士标准差( )表示，多组间比较采用单因素方差分析。使用SPSS17.0软件进行统计处理.
结 果
1．大鼠的初始生化指标、尿蛋白定量及体重各组间均无显著差异（P>0.1），MCD组大鼠2周时尿蛋白、TG、CHO均明显升高，ALB明显下降与对照组比较具有显著性差异 (P<0.01)，而血肌酐无显著差异（见表1）。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆FSGS组大鼠4周时尿蛋白、TG、CHO均明显升高，ALB明显下降与对照组比较具有显著性差异 (P<0.01)，8周时差异更加显著，而血肌酐始终无显著差异.
2．α-actinin-4在MCD组表达增加（P<0.01），而在FSGS组表达与对照组无明显差异。
讨 论
肾病综合征是因肾小球滤过膜通透性的改变而致使大量血浆白蛋白从尿中丢失，而引起的一系列病理生理改变的临床综合征[1]，而足细胞附着于肾小球基底膜（GBM）的外侧连同GBM和毛细血管内皮一起构成了肾小球血液滤过屏障，它是由细胞体、主突、足突(FP)三部分组成,相邻的足细胞由裂孔膈膜(SD)相连,足细胞特殊结构的维持主要依赖于以肌动蛋白为主的细胞骨架系统和一些特异性蛋白分子的表达,足细胞骨架结构是足细胞发挥正常功能的基础。其从肾小球基底膜（GBM）的脱落是启动肾小球硬化发生、发展的关键，目前在研究中发现足细胞的损伤有四个主要机制：（1）裂孔膜成分等或其结构的变化；（2）actin骨架蛋白的变化；（3）GBM的变化或者其与足细胞连接的变化；（4）足细胞表面的负电荷的变化[4、5] 足细胞是蛋白尿产生的重要原因。
上个世纪80年代初期由BertaniT[6]等首次报道了阿霉素肾病大鼠模型，是现今被公认的能较好模拟人类肾小球疾病的动物模型，也是观察足细胞损伤的理想模型。
α-actinin家族至今已发现4种成员，在肾组织中仅发现有α-actinin-4表达, 且主要见于足细胞，它是一种肌动蛋白微丝交联蛋白，α-actinin-4能调节actin的聚合和解聚，并通过其两端的ABD结构域将足细胞中松散的肌动蛋白纤维捆扎成具有收缩作用的纤维束,从而稳定肌动蛋白、肌丝蛋白等足细胞骨架结构, 调节细胞骨架的运动变化，维持足细胞足突形态[7、8]。现在的研究认为α-辅肌动蛋白在稳定细胞粘附、调节细胞形状及细胞运动中发挥重要作用，Asanuma 等认为引起足突融合的可能机制首先是病变破坏足细胞骨架蛋白，干扰足突与基底膜间的相互作用，其次才是裂隙膜（Slit Diaphragm，SD）复合体及相关脂阀的破坏。近年来，国外多位学者利用免疫荧光技术对不同病理类型肾病患者肾组织的α-actinin4的染色观察发现其表达不同。
Guan等发现MCD模型小鼠肾组织中α-actinin-4 mRNA表达在第20天开始上调，本研究显示α-actinin-4在MCD组表达增加（P<0.01），这与Guan等的研究结果相似，而在FSGS组表达与对照组无明显差异，这可能TRPC6的高表达通过使细胞内钙离子浓度升高、直接影响肌动蛋白支架以及组成机械敏感性钙离子通道引起足细胞的损伤和脱落，致使足细胞数量减少。另外可能与病变时间相关，α-actinin-4仅在肾小球足细胞表达，而随时造模时间的延长，肾小球病变逐渐加重，虽然α-actinin-4的表达增强，而足细胞大量脱落，使测量所得的α-actinin-4占总面积减少，从而导致α-actinin-4所占面积比与对照组无显著差异，局灶节段性肾小球硬化组我们只测定了病变8周后α-actinin-4的表达情况，如果能在造模开始的2周或4周内或者间隔更短的时间多次测量α-actinin-4的阳性面积是否会有不同的结论尚有待于证实。
综上所述，α-actinin-4在不同病理类型间存在差异，其表达的变化间接反映足细胞的损伤，提示了病变的活动情况。
参考文献
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论文作者:杜,宇,王彩丽,魏,红,李海涛
论文发表刊物:《中华临床医师杂志》(电子版)2016年2月第4期
论文发表时间:2016/7/14
标签：细胞论文; 肾小球论文; 阿霉素论文; 大鼠论文; 肾病论文; 差异论文; 组织论文; 《中华临床医师杂志》(电子版)2016年2月第4期论文;