有氧能力关联基因多态与技巧类滑雪运动员跨项选材论文

有氧能力关联基因多态与技巧类滑雪运动员跨项选材

周文婷1,2

(1.遵义师范学院 体育学院,贵州 遵义 563006; 2.哈尔滨体育学院 学术理论研究部, 黑龙江 哈尔滨150001)

摘 要: 目的:研究优秀技巧类滑雪运动员中4个有氧能力关联多态基因ACE 、GLUT 4、ADRB 2和PPARGC 1A 的分布频率,及基于4个优势等位基因的基因型总分(TGS),探索上述多态基因与TGS作为我国优秀技巧类滑雪运动员跨项选材分子标记的可行性。方法:应用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱检测技术,对68名中国北方汉族优秀技巧类滑雪运动员与138名中国北方汉族普通大学生ACE 基因rs4340位点、GLUT 4基因rs5418位点、ADRB 2基因rs1042713位点和PPARGC 1A 基因rs8192678位点进行解析。计算并比较运动员与对照组在上述4个位点的TGS。结果:在上述4个多态位点,运动员与对照组间的基因型和等位基因频率无显著性差异(P >0.05);两组人在携带的优势等位基因数量、TGS分值范围、平均TGS分值及TGS分值的分布频率上也均无显著性差异(P >0.05)。结论:ACE 基因rs4340位点、GLUT 4基因rs5418位点、ADRB 2基因rs1042713位点、PPARGC 1A 基因rs8192678位点多态性和基于上述4个位点的TGS均无法作为中国北方汉族技巧类滑雪运动员的有氧能力跨项分子选材标记。

关键词: 运动生物化学;基因;多态性;技巧;滑雪;有氧能力;跨项选材

1 前言

与平昌冬奥会相比,北京冬奥会新增7个小项,金牌总数达到109枚,其中技巧类滑雪项目为23枚。但据统计,2015年我国的自由式滑雪与单板滑雪运动员分别为61人和120人,有望参加北京冬奥会的年轻运动员(1992年~2002年出生)仅为39和92人[1],后备人才储备极度匮乏,距北京冬奥会“全面参赛”目标尚远。因此,提高冬季项目运动员选材效率、提升选材效果成为当前竞技体育界的工作重心之一,而以培养运动员快速达到世界水平为目的,旨在将运动员在某项目上的天赋和竞技能力成功移植到另一个项目上的“跨项选材”成为目前运动员选材研究领域最炙手可热的焦点。鉴于运动员的运动天赋和竞技能力很大程度上受控于遗传,因此,开展对优秀运动员遗传特征的研究不仅对理解不同运动能力的遗传学基础大有裨益,也可为运动员“天赋转移”及跨项选材成功机制的探索提供参考和新的视角。

在以往的作文教学中,大多数老师以应试教育为准绳,不顾学生是否有写作的兴趣,只机械性的给学生讲述所谓的写作秘诀和写作方法,并且热心地给学生推荐基本市场上流通的名字吸引人眼球的习作类图书,告知学生按照图书的目录分类,每一类图书背诵一到二篇例文。在考场上必定会遇到背诵过的例文中的某一类。此时只需要按照自己背过的例文套改一下就能够拿到高分。这是一种多么悲哀的教学方式呀。在这样的教学环境里何谈学生的学习兴趣?何谈学生的写作能力?

运动员优秀运动能力的基因多态研究始于1998年,迄今为止取得了巨大进步,已发现350多个运动能力相关基因,不仅涉及力量、速度和耐力等主要的运动素质[2],也包含了训练敏感性[2]、环境适应能力[3]、身体成分[4]、肌肉形态[5]、柔韧性[6]、能量代谢[7]、心肺健康特征[8],甚至运动技能获得能力(动作学习[9]和动作协调性[10])等领域,大大拓展了运动员选材研究的广度和深度。根据以往的研究,技巧类滑雪项目均主要以磷酸元供能系统及糖酵解供能系统供能,对有氧供能系统要求不高[11]。但随着近年来比赛规则的变化[12]、赛程的更加紧凑和动作难度的增加,技巧类滑雪运动员在一套高强度技巧动作后ATP和CP的重新合成、以及乳酸的代谢消除能力成为影响运动员后程比赛,特别是决赛中成套动作难度和质量的关键因素,因此,有氧能力的强弱成为当前影响技巧类滑雪运动员竞赛表现的重要因素之一。鉴于以上原因,本研究通过文献检索结合国内外相关研究报道,筛选了4个与东亚人有氧能力显著相关的基因多态性位点[13-16],即ACE 基因rs4340位点、GLUT 4基因rs5418位点、ADRB 2基因rs1042713位点和PPARGC 1A 基因rs8192678位点,通过比较我国北方汉族优秀技巧类滑雪运动员与北方汉族普通人群的基因分布及基因型总分(total genotype score, TGS),探索上述多态位点与TGS作为技巧类滑雪运动员跨项分子选材标记的可行性。

2 研究对象与方法

2.1 研究对象

2015年~2017年选取北方技巧类汉族优秀滑雪运动员68名,来自于国家队和黑龙江省滑雪队的单板U型场地、自由式滑雪空中技巧、自由式滑雪U型场地和自由式滑雪雪上技巧运动员(男35,女33)。包括国际级运动健将15名(男7,女8),国家级运动健将10人(男5,女5),国家一级运动员43人(男23,女20)。测试时平均训练年限6.3±2.7年,年龄23.4±4.5岁,身体健康。对照组为138名北方汉族大学生(男76,女62),年龄21.5±1.3岁,未经任何专业体育训练,体检合格。全部受试者对本研究的测试内容及用途均知情同意。

2.2 实验方法

2.2.1 全血总DNA制备提取

考察现场人头攒动,各种展板林立。讲解员的讲解声与现场的交流声此起彼伏。大家纷纷拿起自己的手机拍照,收集着各种信息资料。还有人静静地拿起现场展示的各种盐碱地改良的新产品仔细端详了解。

他瞧遍了每个水坑,都没有用,最后,到了漫漫的暮色袭来的时候,他才发现一个水坑里有一条独一无二的、像鲦鱼般的小鱼。他把胳膊伸下水去,一直没到肩头,但是它又溜开了。于是他用双手去捉,把池底的乳白色泥浆全搅浑了。正在紧张的关头,他掉到了坑里,半身都浸湿了。现在,水太浑了,看不清鱼在哪儿,他只好等着,等泥浆沉淀下去。

基因型分布:运动员组与对照组之间无显著性差异(χ 2=0.30,P >0.05) ,也无性别差异( 对照组:χ 2=0.59,P >0.05;运动员组:χ 2=0. 33,P >0.05) 。

等位基因分布:运动员组与对照组之间无显著性差异(χ 2=0.16,P >0.05),也无性别差异(对照组:χ 2=0. 46,P >0.05;运动员组:χ 2=0.04,P >0.05) 。

ACE 、GLUT 4、ADRB 2和PPARGC 1A 基因的SNP分型采用国际通用的基质辅助激光解吸飞行时间质谱法(MALDI-TOFMS),分析采用美国Sequenom公司的Mass Array系统完成。PCR引物和单碱基延伸引物用Assay Designer(Sequenom)软件包设计,操作方法同参考文献[17]

试验发现,边坡系数对固体拦截能力影响明显高于骨料粒径的影响;覆土植草和无覆土植草均能够较好的拦截固体污染杂质,其中无覆植草组和覆土植草组对固体杂质拦截率高于普通硬化护坡。强降雨条件下植草对固体杂质的拦截作用明显提高,主要由于植株茎叶及根系对表层种植土质和固体杂质截留具有很好的拦截作用,同时植物能够吸收有害物质并将固体杂质分解为各种无机物、有机物,为微生物和植物提供了营养环境,进而减少了生物链内有害污染物的传播。

表1 各多态位点基因型的计分情况

注:标有下划线的为各表型相关等位基因(即优势等位基因)

基因型分布:运动员组与对照组之间无显著性差异(χ 2=0.51,P >0.05) ,也无性别差异(对照组:χ 2=0.86,P >0.05;运动员组:χ 2=1.68,P >0.05) 。

TGS由Williams等[18]于2008年提出,通过将有利基因型计分给个人的简单加性模型来计算运动员的遗传优势,从而检测理论上运动素质可能存在的“最优多基因群”。具体来说,每个多态性基因型分数都基于基因表型使运动员获得运动能力优势的假设,即携带优势纯合基因型计2分,优势杂合基因型计1分,无优势基因型计0分,计算公式为:TGS=(100/8)×(GS1+GS2+GS3+GS4)。TGS最高与最低分分别为100和0,分别代表一个具备优势多基因型的精英运动员和无优秀运动员潜质的情况[14],各位点基因型的计分情况见表1。

2.3 统计学分析

采用SPSS 16.0 进行统计学分析。各组人的等位基因频率和基因型频率分布采用χ 2检验,用Hardy-Weinberg平衡定律检验各组基因型分布是否具有群体代表性,对照组与运动员组间的TGS分布频率与平均TGS值差异采用单因素方差分析,显著性水平定为P <0.05。

3 结果

3.1 基因多态性的分布特征

本研究采用MALDI-TOFMS技术对ACE 基因rs4340位点、ACTN 3基因的rs1815739位点、ADRB 2基因的rs1042713位点和PPARGC 1A 基因的rs8192678位点进行了基因型分型,检测成功率在运动员组和对照组中均为100%,取得了良好的分型结果。经检验,优秀运动员组与对照组在上述各位点的基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡(P >0.05),表明各组研究对象均具有群体代表性,见表2-表5。

表2 不同组别ACE 基因多态性分型

基因型分布:运动员组与对照组之间无显著性差异(χ 2=2.74,P >0.05) ,也无性别差异( 对照组:χ 2=1.94,P >0.05;运动员组:χ 2=0. 94,P >0.05) 。

基因型分布:运动员组与对照组之间无显著性差异(χ 2=1.87,P >0.05) ,也无性别差异( 对照组:χ 2=2.70,P >0.05;运动员组:χ 2=0.08,P >0.05) 。

表3 不同组别GLUT 4基因多态性分型

安静状态下抽取受试者静脉血5 mL,加入EDTA抗凝管,全血总DNA采用Promaga公司DNA kit试剂盒提取。

当下,在我国农业生产资源不足、生态环境保护形势严峻以及农业减肥增效目标的驱动下,以水溶肥为代表的新型肥料有着广阔的市场前景。国家在政策层面也对水肥一体化技术的发展给予了大力支持。“选择和设计合理的灌溉模式”“根据作物来制定不同的施肥方案”“合理地利用水溶肥料”等水肥一体化技术越来越受到重视。

根据以往研究,技巧类滑雪项目具有相似的项目特征、动作结构特征、能量代谢特征、身体与运动素质特征及场地特征,且选材来源相近,因此,本研究认为该类项目运动员可能具有相近的运动遗传学特征,而这些特征可用于该类项目运动员的跨项分子选材。尽管研究认为有氧能力并非技巧类滑雪项目的主导运动能力,但近2届冬奥会中,运动员的成套动作难度不断增大,规则的改变又使得各项目的赛程愈加紧凑,对运动员耐力及运动后恢复能力的要求不断提高,从而表明有氧能力可能是制约运动员竞技能力和赛场表现的因素之一。众所周知,优秀运动能力是一类复杂的生理表型,因此,科学界普遍认为效应主基因并不存在,意味着优秀运动能力是多基因累加形成的表型效应[23],因此,对其遗传标记的探索不仅需要找到这些等位基因,评价这些基因的单独调控效应,还要研究其关联效应[15]。为此,本研究选择了经国内外报道确定与东亚运动员有氧能力相关性较大的4个SNP多态性位点[15, 18,23-28],并以TGS来评价这些基因多态在技巧类滑雪运动员跨项选材中的潜在关联效应。

表4 不同组别ADRB 2基因多态性分型

2.2.3 基因型总分计算法(TGS)

2.2.2 基因多态性分析

表5 不同组别PPARGC 1A 基因多态性分型

等位基因分布:运动员组与对照组之间无显著性差异(χ 2=0.03,P >0.05),也无性别差异(对照组:χ 2=0. 82,P >0.05;运动员组:χ 2=0.05,P >0.05) 。

等位基因分布:运动员组与对照组之间无显著性差异(χ 2=1.14,P >0.05),也无性别差异(对照组:χ 2=1.65,P >0.05;运动员组:χ 2=0.03,P >0.05) 。

3.2 TGS特征

对照组与运动员中优势等位基因数量分布情况见表6。对照组中有2人不携带任何优势等位基因,运动员组则均携带至少1个优势等位基因,但对照组与运动员组间无显著性差异(F =1.25,P >0.05)。

表6 对照组与运动员中优势等位基因 数量分布情况(n/%)

对照组的TGS分值范围为0~100,平均TGS分值为51.09±18.03,运动员组的TGS分值范围为12.5~87.5,平均TGS分值为52.21±16.86,两组间差异不显著(F =0.18,P >0.05);国际健将+健将组与一级运动员组的TGS分值范围分别为37.5~62.5和12.5~87.5,平均TGS分值分别为51.00±13.94和52.91±18.47,TGS分值在对照组与该两组间的差异也不显著(F =0.18,P >0.05)。

图1 对照组与优秀运动员4个基因多态性位点 TGS分值分布图

对照组与运动员组的4个基因多态位点TGS分值分布情况见图1,将两组按TGS低分值组(<40分)、中分值组(41~70分)和高分值组(>70分)进行分组,对照组和运动员组中三组的频率分别为32.5%、50.7%和16.6%及35.3%、48.5%和16.1%,两组均在中分值组频率最高,但不同分值组间无显著性差异(F =0.01,P >0.05)。

4 讨论

天赋与后天培养对运动员成材的影响孰轻孰重,争论由来已久,但近年来的一系列研究成果为其中的天赋方增添了新的筹码[19]:首先,研究者在统计了1896年~2016年历届奥运会中运动员的家谱后发现,奥运奖牌运动员的直系血亲在奥运会中获得奖牌的概率较大,且血缘越近概率越大(44.4%表亲~85.7%同卵双生子)[20];其次,有研究者发现,天赋比训练对优秀运动员(特别是技巧类项目)的成长更重要,且精英运动员与普通运动员间的运动能力差异与训练量不相关[20];再次,近期的一项meta分析报道称,训练量对运动能力的贡献率仅为18%[21],从而表明,刻苦训练虽然重要,但训练量并非运动员成材的充分条件[22],遗传(贡献率~66%)才是影响运动能力的最主要因素。这也意味着,一旦实现运动员分子选材,就可以在相对较短的时间内培养出优秀运动员,提高选材效率,提升选材效果。

等位基因分布:运动员组与对照组之间无显著性差异(χ 2=0.12,P >0.05),也无性别差异(对照组:χ 2=0. 40,P >0.05;运动员组:χ 2=0.01,P >0.05) 。

在4个多态基因中,ACE 基因的rs4340位点是被研究最多的运动表型关联多态位点[2]。研究表明,该位点与心血管及骨骼肌功能相关[27]。由于ACE可促进Ang II(一种重要的骨骼肌生长因子)的合成,而该位点多态可调控ACE的生成,因此,该位点与骨骼肌生长也高度相关,其中I 等位基因被认为是杰出耐力素质的分子标记,而D 等位基因携带者由于循环Ang II量较高,与力量素质更相关[23]。GLUT4是SLC2家族膜转运体超家族促进者的重要成员,是葡萄糖进入细胞内的重要介质,并作为骨骼肌中最主要的葡萄糖转运体,负责骨骼肌中的葡萄糖转移运输,是骨骼肌中控制糖代谢速度的关键环节[24,25]。研究发现,rs5418位点和人体能量代谢有关的生理表型相关,且与有氧运动能力关联[25],在耐力型运动员及有氧+糖酵解双供能系统供能的运动员中均表达极高的A 等位基因,并通过生物实验法推断A 等位基因可提高Glut4 mRNA的表达,AA 纯合型是有氧耐力的优势生物标记[24]。ADRB 2基因编码β2肾上腺素受体,可作为儿茶酚胺的结合位点参与多个运动能力相关的代谢通路,从而提高每搏输出量、心输出量等心血管参数,而rs1042713位点多态可通过调节β2肾上腺素受体含量影响氧转运能力,从而被认为与优秀有氧能力相关,A 等位基因则被认为与高加索人和东亚人的耐力表型相关[26]。PPARGC 1A 基因编码PGC-1蛋白,是线粒体代谢的主要调节因子。研究表明,该基因控制几个参与脂肪酸氧化关键酶编码基因的表达,主要调控肌肉适应训练诱导,而G 等位基因携带者与耐力表现相关,拥有更好的耐力表型[23,26]

本研究发现,在对照组与优秀运动员组中,上述4个多态位点的基因型和等位基因分布频率差异均不显著(P >0.05),在计算了对照组与运动员组的TGS后发现,两组人无论携带的优势等位基因数量、TGS分值范围、平均TGS分值,还是TGS分值的分布频率均无显著性差异(P >0.05),表明上述4个多态位点及其构成的TGS无法作为我国北方汉族优秀技巧类滑雪运动员的有氧能力跨项选材分子标记。究其原因,可能有以下两点:

除了部分功能性的需求之外,其他需求同样也是高校教学资源库平台的重要构成要素。在实际的系统设计和研发阶段,相关领域的技术人员需要对多种不同的需求进行集中处理,在主界面设计统一的logo标识,在主界面和所有一级的功能性操作界面,引用统一的颜色。

(1)虽然目前技巧类滑雪项目越来越倾向于使运动员拥有较好的有氧能力,但与其他典型的有氧能力为主导的运动项目相比,拥有均衡的运动机能似乎才是该类项目运动员应具备的最重要素质,而这与国外研究者“优秀运动员可能不是某一项的机能水平超过所有人,而是在所有机能标准上都需要具备相当高的水平”的观点不谋而合[28]。因此,推测该类项目运动员可能需要在力量、平衡、动作学习能力、运动损伤风险等方面均具备较好的机能水平,而根据以往研究结果,人类似乎通过自然选择的进化在有氧表型与爆发力表型间诱导了一种平衡,使其无法同时具备优秀的耐力和爆发力/力量素质[23],因此,预计力量素质关联基因多态才是优秀技巧类滑雪运动员跨项选材的潜在分子标记。

(2)多态位点间的相互效应并非线性累加,即基因多态性不是独立作用于或单独调控运动表型,而是通过多个基因间的交互作用调控运动表型,因此,优秀运动机能并非单个基因多态优势位点存在的结果,而是一些特殊基因多态性的组合,而此外,样本大小、人口分层、各基因型的权重、基因型/质量表型的测量和TGS纳入的SNP数量也非常重要[29],不仅决定了TGS统计学功效的高低,样本可能存在的区域和种族等方面的异质性还决定了多态位点分布的差异性。由于我国优秀技巧类滑雪运动员数量较少,故本研究将4个项目运动员合并统计,而考虑到可能的区域差异与种族差异,本研究还提取了日本普通人与优秀耐力运动员[27]、韩国普通人与芭蕾舞演员[26]、中国汉族普通人(湖北省)与赛艇运动员[15]、中国北方汉族普通人与长跑运动员[24]及中长距离游泳运动员[25]等东亚人群在上述4个多态位点的分布情况。经比较,我国北方汉族普通人的基因型与等位基因分布频率在ACE 基因的rs4340位点、GLUT 4基因的rs5418位点和PPARGC 1A 基因的rs8192678位点与其他各国各组人相比无显著性差异(P >0.05),但在ADRB 2基因的rs1042713位点,我国北方汉族普通人的基因型与等位基因分布频率与韩国及中国汉族普通人(湖北省)组间差异不显著(P >0.05),与日本普通人相比差异显著(P <0.05),说明该位点存在区域异质性,栖息地较近、同在东亚大陆上的我国不同地区汉族人、我国汉族人与韩国人之间差异不显著性,而日本因与东亚大陆距离相对较远,则与上述各组之间差异显著。因此,未来在研究其他基因多态效应时,应对区域、种族等方面的异质性予以重视,以探寻不同基因多态的适用范围。

5 结论

有氧能力关联多态基因位点——ACE 基因的rs4340位点、GLUT 4基因的rs5418位点、ADRB 2基因的rs1042713位点、PPARGC 1A 基因的rs8192678位点及基于上述4个位点的TGS不能作为我国北方汉族优秀技巧类滑雪运动员的跨项选材分子标记。

(2)化学成分分析 从淬裂样件上取样进行,采用湿法测量对其进行化学成分分析,结果如表1所示。由表1可看出,化学成分符合AMS5630L标准要求。

由上述非线性瞬态响应分析及动力学仿真结果可知,车辆在140 km/h的运行速度范围内,非线性冲击动态间隙向上最大变化值Zi为8.0 mm,向下最大变化值Zi为8.5 mm,随机响应动态间隙最大变化值Zr为11.7 mm。空重车一系静挠度变化Zs可由空重车载重变化及一系垂向刚度计算得到,其值为21.2 mm。

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Polymorphisms in Aerobic Performance -related Genes and Transfer of Elite Skill -dominated Skiing Athletes

ZHOU Wenting1,2

(1.School of P.E., Zunyi Narmal Inst., Zunyi 563006,China; 2.Research Sect. Of Academic Theories, Harbin Inst. of P.E., Harbin 150001, China)

Abstract : The objective of this research was to study the frequency distribution of 4 aerobic performance-related polymorphisms of ACE ,GLUT 4,ADRB 2 and PPARGC 1A genes and the TGS in elite Chinese skill-dominated skiing athletes, so to explore the validity of whether these loci and the TGS can be used as genetic mark for the talent transfer of the elite Chinese skill-dominated skiing athletes. Four SNPs (rs4340 in ACE gene regions, rs5418 in GLUT 4 gene regions, rs1042713 in ADRB 2 gene regions and rs8192678 in PPARGC 1A gene regions) were selected. The genotypes of the 68 elite skill-dominated skiing athletes and 138 college students from northern China were analyzed using the matrix assisted laser desorption ionisation-time of flight mass spectrometry method(MALDI -TOF ). Total genotype score (TGS ) based on the 4 SNPs were calculated and compared between the athletes and control groups. Results showed that there were no significant differences of the 4 loci in the 4 genes between the athletes and the control groups (P >0.05), nor significant differences of the advantage allele numbers, TGS range, average TGS and the TGS frequency distribution were found in the groups of control and athletes (P <0.05). It could be concluded that the SNP rs4340 of ACE gene, the SNP rs5418 of GLUT 4 gene, the SNP rs1042713 of ADRB 2 gene and SNP rs8192678 of PPARGC 1A gene alone, as well as the TGS based on these 4 SNPs could not be used as the genetic marks for the talent transfer of elite skill-dominated skiing athletes.

Key words :exerxise biochemistry; gene; polymorphism; skill-dominated; skiing athlete; aerobic performance; talent transfer

收稿日期: 2019-03-02;修回日期:2019-04-09

基金项目: 2018年黑龙江省教育厅“冰雪运动学”特色学科专项重点项目(BXZD001);2018年度黑龙江省省属高等学校基本科研业务费科研项目(2018KYYWF-FC07);国家科技支撑计划“冰雪冬奥”专项(2018YFF0300506)。

作者简介: 周文婷(1979-),女,黑龙江哈尔滨人,博士,副教授。研究方向:运动分子选材。

中图分类号: G804.23;G863.1

文献标识码: A

文章编号: 1000-520X(2019)06-0066-06

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有氧能力关联基因多态与技巧类滑雪运动员跨项选材论文
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