【摘要】目的：分析QFT 和T-SPOT.TB两种法分别检出的结核效应T淋巴细胞，在诊断结核病时的灵敏度。方法：对我院确诊的1000例结核病患者同时用QFT和T-SPOT.TB法进行检测，比较两种方法的可靠性。结果：QFT法的阳性率为82.3%,T-SPOT.TB法的阳性率为64.0%，TQFT法的阳性率大于T-SPOT.TB法，具有统计学意义（P＜0.01）。结论：分析两种方法的结果，对选择检查方法有指导意义。
【关键词】结核；QFT；T-SPOT.TB
【中图分类号】R52 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2018）34-0062-02
结核病如同“白色瘟疫”是由结核菌感染导致的一种慢性传染病。根据世界卫生组织（WTO）的统计，我国结核病患病人数居世界第2位，仅次于印度；我国不仅是全世界27个严重流行耐多药结核病的国家之一，同时也是全世界22个结核病流行严重的国家之一[1]。
结核病发病比较隐匿，一般不易出现典型的症状，甚至有的患者感染以后也毫无症状，偶有食欲不振、咳嗽及咯血，也经常会被误诊为感冒或是普通肺炎。老年慢性支气管炎经常掩盖其患有肺结核的症状，延误其治疗。结核病是慢性传染病，其临床症状繁多，轻重不等，结核病的症状和其他疾病一样大多是非特异性的[2]。发明一种有效及时准确诊断结核病的方法，在鉴别诊断结核病时极为重要。
1.资料与方法
1.1 一般资料
标本为2016年5月至2018年4月期间入住本院并确诊的1000例患者，其中男性478例，女性522例，年龄最大85岁，最小6个月。
试剂 QFT试剂盒及设备：酶标板条、20X浓缩洗涤液、酶底物夜、终止夜、37℃培养箱、酶标板振荡器、洗板机、移液器、一次性枪头、蒸馏水。T-SPOT.TB试剂盒、淋巴细胞分离液、AIMV、RPMI1640。
1.2 方法
（1）采集5ml静脉血于肝素锂抗凝管中，立即混匀送检。每支培养管中充入1ml血液，充分上下振摇10次，确保充分溶解管壁上的抗原。（2）将血液培养管直立，在37℃孵育16～24小时。（3）孵育结束后，以2000～3000RCF（g）离心血液培养管15分钟，分离血浆和红细胞。（4）离心后用移液器收集血浆标本。收集前要避免反复上下吸取或任何混合血浆的操作。始终注意不要搅动分离胶表面的物质。（5）平衡ELISA试剂。除100倍浓缩结合物外所有试剂在室温下至少平衡60分钟。（6）以蒸馏水复溶冻干的100倍浓缩结合物。（7）以绿色稀释剂配制实验所需浓度的结合物，并于每个微孔加入50ul。（8）加入50ul血浆标本和50ul标本品到相应的微孔，用酶标板振荡器混合。（9）室温下孵育120分钟。（10）每个微孔以400ul洗涤液清洗至少6次。（11）加入100ul酶底物液到微孔中，用酶标板振荡器混合。（12）室温下孵育30分钟。（13）加入50ul终止夜到微孔中，用酶标板振荡器混合。（14）以装有450nm滤光片及620～650nm参考滤光片的酶标仪来读取结果。（15）分析结果。结核抗原管的r-干扰素含量若显著高于Nil对照管，则视为阳性结果。如血液标本对Mitogen反应弱（小于0.5IU/ml）为阴性。
1.3 T-SPOT.TB试验方法
（1）于肝素锂抗凝管中采集4ml静脉血，立即混匀，PBMC分离必须控制在4小时内进行。（2）抗凝血与预先加入4ml的 RPMI1640液混匀。（3）将混匀的细胞悬液缓慢加入3ml淋巴细胞分离液上方，1600g离心22分钟，取白细胞层到15ml离心管中。（4）加入RPMI1640至11ml，600g离心7分钟，上清液丢弃。（5）加培养液AIMV至11ml，350g离心7分钟，上清液丢弃。（6）加入0.7mlAIMV培养液，把10ul混匀后的细胞悬液于加入40ul锥虫兰染液中，再次混匀后，吸取10ul加入计数板上进行细胞计数。调整至每样本每毫升250万个PBMC。根据标本量准备T-SPOT.TB试剂盒内微孔板条，4个微孔为一人份，加AIMV为阴性对照，加植物血凝素为阳性对照，其余2孔，1孔加入抗原-A50ul及细胞悬液100ul，另1孔加抗原-B 50ul及细胞悬液100ul。置于5%CO2孵育箱中16至20小时,用pH6.8至7.2的PBS液洗板。加入50ul碱磷酶标记的小鼠抗人IFN-γ单克隆抗体，2至8℃培育1h，PBS液洗涤4次，最后每孔加入50ul显色液，暗室常温静置7分钟，用蒸馏水洗涤后看结果。放大计数每个孔中的斑点，0至5个斑点为阴性，样本孔斑点数2倍阴性孔斑点为阳性。
1.4 统计方法
采用卡方统计学分析。
2.结果
1000例患者的血样标本用QFT和T-SPOT.TB法进行检测。QFT法的阳性率为82.3%，T-SPOT.TB法的阳性率为64.0%，QFT法的阳性率大于T-SPOT.TB法，具有统计学差异（P＜0.01）。
3.讨论
结核病是历史上困扰人类时间最长，导致死亡人数最多的慢性传染性疾病。对于绝大多数结核病患者及其家庭而言，结核病是一种灾难性疾病，是导致因病致贫、因病返贫的重要因素[3]。随着耐药性结核病发病数量的不断彪升，以及人免疫缺陷病毒合并感染，结核病的防治工作也越来越严峻[4]。目前结核病的诊断方法耗时长且灵敏度较低，探索快速简便的诊断方法一直是国内外学者研究的焦点[5]。
QFT检测的原理是使用特殊的血液培养管孵育全血，血液在血液培养管中孵育16至24小时，提取血浆，检测受结核菌特异性抗原免疫刺激产生的r-干扰素含量。通过特异性的细胞免疫反应来判断其是否感染结核杆菌。
QFT检测方法不受卡介苗（BCG疫苗）的影响，特异性检测结核复合群（人型、牛型、非洲型）引起的结核感染，特异性高、敏感性好。所以，QFT法较T-SPOT.TB法在诊断结核病中更为准确可靠。
【参考文献】
[1]廖丽.我国结核病流行现状及防治工作形势分析[J].中外医疗杂志,2014,34（3）:192-196.
[2]唐神结,高文.临床结核病学[M].北京：人民卫生出版社，2011：3.
[3]刘宇红，杜建，李亮，等.结核病疫情现状及应对策略[J].中华传染病杂志，2016,34（3）：105-106.
[4] Wood R, Middlekoop K, Myer L, et al. Undiagnosed tuberculosis in a community with high HIV prevalence: implications for tuberculosis control. Am J Respir Crit Care Med,2007,175:87-93.
[5]杨华，张丽婷，李连青，等.结核分枝杆菌H37Rv结合肽的筛选研究[J].中华结核和呼吸杂志，2011,34（3）:192-196.
论文作者:李琼秀,王辉,曾海燕
论文发表刊物:《心理医生》2018年34期
论文发表时间:2018/12/11
标签：结核病论文; 结核论文; 微孔论文; 阳性论文; 标本论文; 方法论文; 抗原论文; 《心理医生》2018年34期 论文;